ออเรโอบาซิดิน เอ หรือที่รู้จักกันในชื่อ AbA, บาซิฟุงกิน, เบรโอไมซิน เอ เป็นยาปฏิชีวนะประเภทเปปไทด์เอสเทอร์แบบวงแหวนที่แยกได้จากเชื้อราเส้นใย Aureobasidium Pullulans No. R106 มีคุณสมบัติต่อต้านเชื้อราอย่างมีประสิทธิภาพ และเป็นสารยับยั้งเซราไมด์ซินเทส AUR1 ที่ฟอสโฟรีเลตโดยอินอซิทอล เป็นพิษต่อยีสต์แม้ในความเข้มข้นที่ต่ำกว่า (0.1-0.5 μg/mL) เชื้อราที่ไวต่อ Aureobasidin A ได้แก่ Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharces pombe, Candida glabrata, Aspergillus nidulans และ A. niger เชื้อราที่ไวต่อ Aureobasidin A ได้แก่ ยีสต์ฟัน (Saccharomyces cerevisiae), Schizasaccharomyces millet (Schizosaccharomyces pombe), Candida glabrata (Candida glabrata), Aspergillus nest (Aspergillus nidulans) และ Aspergillus niger (A. niger.) กลไกการออกฤทธิ์คือ Aureobasidin A ยับยั้งการทำงานของ inositol phosphoramidite (inositol phosphorylceramide, IPC) synthase ซึ่งเชื้อราขึ้นอยู่กับการเจริญเติบโต และขัดขวางการสังเคราะห์ sphingolipid จึงทำให้เชื้อนี้ตายลงต่อไป มีการศึกษาเกี่ยวกับยีนที่เข้ารหัส IPC synthases เพิ่มเติม เช่น ยีน AUR 1 จาก Saccharomyces cerevisiae และยีน AURA จาก A. sinensis ซึ่งมีความคล้ายคลึงกัน การปิดยีนที่เข้ารหัสเหล่านี้ทำให้สายพันธุ์ต้านทานต่อ Aureobasidin A เช่น ยีน AUR 1-C

ออเรโอบาซิดิน เอ เหมาะอย่างยิ่งที่จะใช้เป็นเครื่องหมายคัดเลือกยาเพื่อคัดกรองโคลนที่มีผลบวก ความต้านทานต่อออเรโอบาซิดิน เอ ยังเป็นตัวรายงานที่เหมาะสำหรับการศึกษายีสต์ไฮบริดเดี่ยวและไฮบริดสองแบบ ผลิตภัณฑ์นี้เป็นสารละลายของออเรโอบาซิดิน เอ ที่ละลายในเมทานอลด้วยความเข้มข้น 1 มก./มล.

คุณสมบัติ

ความบริสุทธิ์97%

การผลิตที่ได้มาตรฐาน โดยใช้โหมดการผลิตจำนวนมากแบบโรงงาน

แอปพลิเคชั่น

การศึกษายีสต์สองไฮบริด

การศึกษายีสต์ไฮบริดหนึ่งตัว

เครื่องหมายการคัดเลือกยาของยีสต์ที่เข้มงวด

การดื้อต่อ Aureobasidin A เป็นตัวรายงานที่เหมาะสำหรับการศึกษาการผสมพันธุ์ของยีสต์

ข้อมูลจำเพาะ

ส่วนประกอบ

การขนส่งและการเก็บรักษา

การ ออเรโอบาซิดิน เอ-เอบีเอ- สินค้าควรเก็บไว้ที่ -15℃ - -25℃ สำหรับ 2 ปี.

คำแนะนำ

1. สมาธิในการทำงาน

กรุณาอ้างอิงเอกสารที่เกี่ยวข้องเพื่อดูความเข้มข้นที่เฉพาะเจาะจง และศึกษาและปรับให้เหมาะสมตามเงื่อนไขการทดลองของคุณเอง (เช่น วัตถุประสงค์ของการทดลอง ประเภทเซลล์ ลักษณะเฉพาะของการเพาะเลี้ยง ฯลฯ)

2. การทดลองเซลล์ (การทดลองในหลอดทดลอง)

ออเรโอบาซิดิน เอ หยุดการเจริญเติบโตของเซลล์ยีสต์โดยผ่านทั้งการเป็นพิษของเซราไมด์และการขาดอินอซิทอลฟอสโฟริลเซราไมด์ที่จำเป็น^[1]-

สังเคราะห์การทำซ้ำแบบเรียงซ้อนสามครั้งของโมทีฟ CArG-box แต่ละอัน ชิ้นส่วน DNA ทั้งหมดถูกโคลนลงในเวกเตอร์ Y1H pAbAi (Clontech, Mountain View, USA) โดยใช้ไซต์จำกัดที่เหมาะสม จากนั้นโครงสร้าง pAbAi ที่ประกอบขึ้นแต่ละอันจะถูกทำให้เป็นเส้นตรงด้วย BstbI และแปลงเป็นสายพันธุ์ Saccharomyces cerevisiae Y1HGold ตามคู่มือ Yeast Transformation System 2 (Clontech, Mountain View, USA) โคลนที่มีชิ้นส่วน DNA ที่ต้องการจะถูกคัดกรองเพื่อเปิดใช้งานอัตโนมัติบนตัวกลางดรอปเอาต์ยูราซิลสังเคราะห์ที่เสริมด้วยออเรโอบาซิดินเอในความเข้มข้น 100-900 ng/mL ตามที่ระบุ (Clontech, Mountain View, USA)^[2]-

กรอบการอ่านแบบเปิด (ORF) ของยีน SlBES1 ได้รับการขยายและเชื่อมต่อเข้ากับพลาสมิด pGBKT7-GAL4BD คอนสตรัคต์ฟิวชัน GAL4BD-SlBES1 ถูกแปลงต่อไปเป็นเซลล์ยีสต์ Y2H Gold SD/จานเพาะเชื้อ Trp ขนาดกลางถูกนำมาใช้ในการเพาะเชื้อยีสต์ที่กลายพันธุ์การ อัล-กิจกรรมของกาแลกโตซิเดสของทรานส์ฟอร์แมนท์ถูกระบุโดย X-อัล-gal และการแสดงออกของ AUR1-C ได้รับการคัดกรองโดย Aureobasidin A^[3]-

3. ความเข้มข้นยับยั้งขั้นต่ำของ Aureobasidin สำหรับยีสต์ต่างๆ

4. ขั้นตอนการปฏิบัติงาน (สำหรับระบบการเปลี่ยนรูปยีสต์ที่ต้านทาน AbA)

1) เติมเชื้อยีสต์ข้ามคืน 0.5 มิลลิลิตรลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ YPD 50 มิลลิลิตร (ส่วนประกอบ: อาหารเลี้ยงเชื้อของเหลว 1 ลิตรประกอบด้วยสารสกัดยีสต์ 10 กรัม โพลีเปปโตน 20 กรัม D-กลูโคส 20 กรัม สำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อของแข็ง ให้เติมวุ้นอีก 2%)

2) ฟักที่อุณหภูมิ 30℃ นานประมาณ 6 ชั่วโมง จนค่า OD660 อยู่ที่ 1-2 เมื่อใช้ดิพลอยด์ ให้วัดค่า OD660 ให้ได้ 2-4

3) เครื่องเหวี่ยงที่ 1,000กรัม เป็นเวลา 5 นาที

4) แขวนตะกอนใหม่ในสารละลาย A 10 มล. (ส่วนผสม: ลิเธียมอะซิเตท 100 มิลลิโมลาร์, ทริส-HCl 10 มิลลิโมลาร์ pH 7.5, EDTA 1 มิลลิโมลาร์) จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 1,000กรัม เป็นเวลา 5 นาที

5) อีแขวนตะกอนในสารละลาย A จนกระทั่ง OD660 อยู่ที่ 150

6) แบ่งเซลล์แขวนลอย 100 µL ลงในหลอดและฟักที่อุณหภูมิ 30℃ เป็นเวลา 1 ชั่วโมง.

7) เติมเวกเตอร์ 5 µg (DNA แบบวงกลมหรือเชิงเส้น) และ DNA ตัวพา 150 µg (ซึ่งได้รับความร้อนที่ 100℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วจึงพักให้เย็นลงอย่างรวดเร็ว)

หมายเหตุ: pAUR101 ต้องใช้ DNA เชิงเส้นจึงจะแปลงสภาพได้ การใช้ DNA แบบวงกลมจะลดประสิทธิภาพการแปลงสภาพหรืออาจล้มเหลวก็ได้ pAUR112 และ pAUR123 ต้องใช้ DNA พลาสมิดที่สมบูรณ์จึงจะแปลงสภาพได้

8) เติมสารละลาย B ปริมาณ 850 µL (ส่วนประกอบ: ละลายโพลีเอทิลีนไกลคอล 4000 จำนวน 40 กรัม ในสารละลาย A จำนวน 100 มล. แล้วผสมให้เข้ากัน เตรียมใหม่ก่อนใช้) แล้วผสมเบาๆ

9) ฟักที่อุณหภูมิ 30℃ นาน 30 นาที แล้วจึงปรับเป็น 42 นาที℃ เป็นเวลา 15 นาที.

10) วางไว้ที่อุณหภูมิห้องประมาณ 10 นาที

11) ปั่นเหวี่ยงที่ 5,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 1 นาที แล้วแขวนตะกอนกลับเข้าไปในตัวกลาง YPD ปริมาตร 5 มล.

12) ฟักที่อุณหภูมิ 30℃ เป็นเวลา 6 ชั่วโมงจนถึงข้ามคืน

13) ปั่นเหวี่ยงที่ 5,000-10,000 รอบต่อนาที และแขวนตะกอนกลับคืนใน NaCl 0.9% ปริมาณ 1-10 มิลลิลิตร

14) แผ่นที่ 100 µL ของเซลล์ที่ถูกแขวนลอยไว้บนแผ่นตัวกลางที่เลือก YPD (ซึ่งมี AbA ในความเข้มข้นที่แน่นอน ขึ้นอยู่กับประเภทของความเครียด)ฟักที่อุณหภูมิ 30℃ เป็นเวลา 3-4 วัน จนกว่าจะเปลี่ยนแปลงเสร็จสิ้น

15) เลือกตัวแปลงที่เป็นบวก และ/หรือกำหนดประสิทธิภาพการแปลง (แสดงเป็นจำนวนของโคโลนีที่แปลงต่อไมโครกรัมของดีเอ็นเอพลาสมิด)

เอกสาร:

เอกสารข้อมูลความปลอดภัย

60231_เอกสารความปลอดภัย_HB220420_EN.pdf

คู่มือการใช้งาน

60231_คู่มือ_HB250116_EN.pdf

ตัวเลข

รูปที่ 1- แผนภูมิการเจริญเติบโตของแผ่นยีสต์

สายพันธุ์ทดลอง:GS115

ปริมาณการใช้งาน: 0.05 ไมโครกรัม/มล.-0.1 ไมโครกรัม/มล.-0.5 ไมโครกรัม/มล.-1 ไมโครกรัม/มล.

การรักษา: 3-5 วันs ที่ 30℃

แถวบนเป็น Yeasen สินค้าและแถวล่างเป็นยี่ห้อ T *.