Moleküler tanı teknolojisi, olağanüstü duyarlılığı ve özgüllüğü nedeniyle çeşitli tespit yöntemlerinden ayrılır. Ancak, geleneksel sıvı tanı reaktifleri, yüksek nakliye masrafları ve sınırlı raf ömrü gibi dezavantajlara sahiptir ve bu da kullanımlarını kısıtlar. Gelişen pazar ihtiyaçlarına ve teknolojik gelişmelere yanıt olarak, liyofilize moleküler tanı test reaktifleri ortaya çıkmıştır. Dondurularak kurutulmuş ürünler, geleneksel sıvı test reaktiflerine göre çeşitli avantajlar sunar, bunlar şunlardır:
- Oda sıcaklığında kararlıdır - üç boyutlu yapı sabittir, bu da enzimin ve reaksiyon sisteminin oda sıcaklığında stabilitesini sağlayabilir. Soğuk zincir taşımacılığına ve buzdolaplarında veya soğuk depolamada depolamaya gerek yoktur, bu da ürünlerin raf ömrünü uzatabilir.
- Kullanımı kolay- Tekrar tekrar dondurma-çözme, sıvı verme vb. işlemlere gerek kalmaz.
- Azaltılmış maliyet- Soğuk zincir taşımacılığına ve dondurulmuş depolamaya gerek kalmaz, nakliye ve depolama maliyetleri etkin bir şekilde azalır.
- Yüksek hassasiyet- Bir reaksiyonda bir adet dondurularak kurutulmuş mikro çekirdek kullanılarak reaktif hazırlama sırasında kompozisyon hatası azaltılmakta, operasyon süresi kısaltılmakta, sıvı hazırlama sırasında biyolojik aktivite kaybı önlenmekte ve hassasiyet önemli ölçüde artırılmaktadır.
- Esnek kullanım- Numune sayısıyla sınırlı olmayıp, tek numune de yüklenebilir.
Geleneksel moleküler enzimler veya ön karışımlar sıklıkla kriyoprotektif bir ajan ve dengeleyici olarak yüksek konsantrasyonlarda gliserin içerir. Ancak, reaktifte gliserin bulunması suyun yapısal bütünlüğünü bozabilir ve suyun etkili bir şekilde ortadan kaldırılmasını zorlaştırır. Bu da dondurularak kurutulmuş ürünün yapısı ve kararlılığı üzerinde olumsuz bir etkiye sahiptir. Bu nedenle, dondurularak kurutmayı tercih ederken gliserol içermeyen reaktifler seçmeniz önerilir.
Ayrıca, dijital PCR gibi reaktif bileşimine özellikle duyarlı uygulamalarda, yüksek konsantrasyonlu gliserinsiz enzimlerin kullanımı, gliserolün dijital PCR reaksiyonu üzerindeki etkisini daha da azaltabilir. Bu yaklaşım, yalnızca girişimi en aza indirmekle kalmaz, aynı zamanda dijital PCR tespit reaktif sistemini optimize etme potansiyelini de genişletir.
YEASEN Gliserol içermez moleküler enzim çözeltisi
YEASEN kapsamlı bir gliserinsiz moleküler enzim Ar-Ge ve üretim platformu kurmuş olup, malzeme seçimi, çevre kontrolü, proses optimizasyonu ve kalite güvencesi yoluyla çok sayıda Gliserol içermeyen moleküler enzimin büyük ölçekli üretimini gerçekleştirmiştir.
- Diyaliz sürecinin denenmesi
Sabit hacimli gliserin enzimi için diyaliz sürecinin optimize edilmesi:
- Farklı moleküler enzimler için optimum diyaliz tamponunun taranması;
- Farklı moleküler enzimler için 4℃ veya -20℃'de uzun süreli depolamaya olanak sağlayan stabil depolama solüsyonlarının taranması.
- Tanjantsal akış filtrasyon prosesi amplifikasyonu
Diyaliz proses taramasına dayanarak, optimum diyaliz tampon bileşenleri ve bunların optimum depolama solüsyonları belirlenebilir. Daha sonra, teğetsel akış filtrasyon prosesi (UFDF olarak da bilinir) solüsyon tamponu değişimi için kullanılabilir.
Tanjansiyel akış filtrasyon prosesinin geliştirilmesindeki kritik faktörler, depolama solüsyonu formülü, yıkama ve filtrasyon solüsyonu formülü seçimi ve filtrasyon sırasında uygulanan transmembran basıncı ve akış hızı etrafında döner. YEASEN, hedef moleküler enzimdeki istenen gliserin içeriğine dayalı olarak yıkama ve filtrasyon hacimlerinin ve zaman parametrelerinin hızlı bir şekilde belirlenmesini sağlayan tanjansiyel akış filtrasyonu için standart bir yaklaşım oluşturmuştur. Bu yaklaşım hem malzemelerden hem de zamandan tasarruf etmeye yardımcı olur.
- Kalite kontrol
Yukarıda özetlenen çeşitli hazırlama süreçleri, farklı hacimler ve ürün tipleri için çeşitli gereksinimleri karşılamak üzere tasarlanmıştır. YEASEN, çeşitli partiler arasında ve aynı süreç içinde ürün kararlılığını değerlendirmek için kapsamlı bir performans parametresi karakterizasyon sistemi geliştirmiştir. Bu sistem, gliserol içermeyen ölçümlerin etkisinin birden fazla bakış açısından kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesine olanak tanır. Karakterizasyon yöntemleri, protein kantifikasyonu, enzim aktivitesi değerlendirmesi (geri kazanım oranı), gliserin içerik analizi, koruyucu madde içerik değerlendirmesi ve enzim performans değerlendirmesini içerir.
YEASEN gliserol içermeyen moleküler enzim ürünleri
YEASEN, başlangıçta gliserin içeren enzimlerden gliserin içermeyen enzimler üretmek için gliserol içermeyen moleküler enzim hazırlama yöntemini benimsemiştir. Şu anda, qPCR/RT-qPCR ve LAMP/RT-LAMP uygulamaları için uygun önemli miktarda gliserol içermeyen enzim ham maddesi tedarik edebiliyoruz. Bu ham maddeler, sıvı muadilleriyle aynı kalite ve performans seviyesini korurken, teşhis testlerinde dondurarak kurutma için tasarlanmıştır.
Gliserol içermeyen moleküler enzim ürünleri
qPCR ön karışımları kullanılarak hazırlandı EVET 14316ES E-Taq DNA polimerazı ve sırasıyla karşılık gelen gliserol içermeyen enzimler ve 10'un şablonu5, 104 ve 103 kopya/mL aynı anda çoğaltıldı. Sonuçlar, gliserol içermeyen 14316ES'nin çoğaltma etkisinin gliserin içeren 14316ES'nin çoğaltma etkisi ile tutarlı olduğunu gösterdi muadili. 14316ES'nin hızlandırılmış kararlılık testi 37℃'de gerçekleştirildi. Sonuçlar, 14316ES'nin genleşme performansının 37℃'de 54 günlük hızlandırılmış tedaviden sonra hızlandırılmamış kontrolle tutarlı olduğunu gösterdi. Yukarıdaki sonuçlar, gliserol içermeyen enzimin ve gliserin içeren enzimin performansında bir fark olmadığını gösterdi muadili ve istikrarı iyiydi.
- RT-qPCR dondurularak kurutulmuş ürünler: 25 gün boyunca 50℃'de hızlandırılan dondurularak kurutulmuş ürünler, stabil morfolojiye ve performansa sahiptir
Yeasen 14316ES, dondurularak kurutulan ve 25 gün boyunca 50℃'de hızlandırılmış kararlılık için test edilen RT-qPCR önceden karıştırılmış çözeltisine hazırlandı. Aynı zamanda, 105, 104 ve 103 Yeni koronavirüs psödovirüs şablonunun mL başına kopyaları çoğaltıldı.Sonuçlar, ürün morfolojisi, Ct değeri ve floresan değerinin dondurarak kurutma öncesi ve sonrasında önemli bir değişim göstermediğini, dondurarak kurutma ürününün iyi bir stabiliteye sahip olduğunu göstermiştir.
Şekil 4: RT-qPCR dondurularak kurutulmuş ürünlerin hızlandırılmış kararlılık test verileri- RT-LAMP dondurularak kurutulmuş ürünler: 30 gün boyunca 45℃'de hızlandırılan dondurularak kurutulmuş ürünler, stabil morfolojiye ve performansa sahiptir
RT-LAMP ön karışımı YEASEN ile hazırlandı 14405ES ve 11297ES ve performans testi dondurarak kurutmadan sonra gerçekleştirildi. Pozitif reaksiyon deliği turuncu ve negatif reaksiyon deliği macenta idi, bu da büyük bir kontrast gösteriyordu ve sonuç açıkça yorumlandı. Ayrıca, dondurarak kurutulmuş ürünlerin morfolojisi 45℃'de 30 günlük hızlandırmadan sonra önemli ölçüde değişmedi. Sonuçlar dondurarak kurutulmuş ürünün şekil ve performans açısından kararlı olduğunu gösterdi.
Ürün bilgisi
| Sınıflandırma | Namin | Katalog No. |
| qPCR/RT-qPCR için gliserol içermeyen enzim ürünleri | Hifair™ Lyo Multiplex Tek Adımlı RT-qPCR Kiti -11831ES | 11831ES |
| Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polimerazı, Gliserol içermez | 14316ES | |
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| RT-LAMP için gliserol içermeyen enzim ürünleri | Hifair® III Ters Transkriptaz, 600U/μl, Gliserol içermez | 11297ES |
| Liyofilize Bst Plus DNA Polimeraz (60 U/μL, Gliserol İçermez) | 14405ES |