Arka Plan Açıklaması

Protein saflaştırma, hedef proteini deneysel örnekteki toplam proteinlerden izole etme işlemidir, ancak hedef proteinin biyolojik aktivitesini ve kimyasal bütünlüğünü korur. Vektörlerin inşası sırasında, bazı gerekli ifade unsurlarına ek olarak, kodon optimizasyonu ve etiket seçimi de dikkate alınmalıdır. Doğru etiketi seçmek yalnızca protein saflaştırma ve protein çözünürlüğünü teşvik etmek için faydalı olmakla kalmaz, aynı zamanda proteinin yapısını ve işlevini ve alt akış uygulamalarını da etkilememelidir. Bu bölüm His ve GST etiketlerini tanıtmaya odaklanmaktadır.

Tablo 1. His ve GST Etiket Girişi

Etiket	Boyut kDa	Sekans	Saflık	Çözünürlük	Etiket Kaldırma	Etiket Bölme Enzimi
Onun	~0,84	HHHHHH	+	+	Gerekli değil	TEV Proteazı
GST	26	211'den oluşan amino asitler	++	++	Gerekli	3C Proteaz/PSP

His Tag Protein Afinite Saflaştırması

HisSep Ni-NTA Agaroz Reçinesi, matris olarak yüksek oranda çapraz bağlı agaroz jeline, ligand olarak tetra-koordine nitrilotriasetik asit (NTA) ile kimyasal olarak birleştirilmiş ve nikel iyonlarının (Ni) şelatlanmasından sonra dayanmaktadır.²⁺), oktahedronun merkezinde nikel iyonları bulunan çok kararlı bir oktahedral yapı oluşturur. Bu yapı, nikel iyonlarını küçük molekül saldırılarından koruyabilir. Ni-IDA reçinesiyle karşılaştırıldığında daha kararlıdır ve zorlu koşullar altında belirli konsantrasyonlarda indirgeyici maddelere, denatüre edici maddelere veya bağlayıcı maddelere dayanabilir. Ni-TED reçinesiyle karşılaştırıldığında, hedef proteinler için daha büyük bir adsorpsiyon kapasitesine sahiptir. Laboratuvarlarda His etiketli proteinleri saflaştırmak için vazgeçilmez reçinelerden biri haline gelmiştir.

Şekil 1. His reçinesinin ürün prensip diyagramı.

Tablo 2. Yeasen Arıtma Ürünü Seçim Rehberi

Ürün Numarası	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Ürün Adı	HisSep Ni-NTA Agaroz Reçinesi	HisSep Ni-NTA Agaroz Reçine 6FF	HisSep Ni-NTA 6FF Kromatografi Kolonu, 5 mL / 1 mL	HisSep Ni-NTA MagBeads
Matris	Çapraz bağlı %6 Agaroz Jel	Yüksek çapraz bağlı %6 Agaroz Jel	Yüksek çapraz bağlı %6 Agaroz Jel	Manyetik Agaroz Mikroküreler
Basınç Direnci	0,1 MPa, 1 çubuk	0,3 MPa, 3 çubuk	0.3 MPa, 3 çubuk	Yok
Kapasite	＞40 mg 6×His etiketli protein/mL matris	＞40 mg 6×His etiketli protein/mL matris		> 40 mg 6×His etiketli protein/mL manyetik boncuklar
Arınma Önerisi	Matris ortalama basınç dayanıklılığına sahip, inkübasyon yöntemine uygun, yerçekimi kolonu küçük ölçekli saflaştırma	Yüksek basınç dayanımına sahip matris, protein saflaştırma cihazı ile endüstriyel büyük ölçekli protein saflaştırmasında kullanılabilir		Manyetik ayırma yoluyla hızlı ve kolay protein saflaştırması
Hoşgörü	8 M üre, 6 M hidroklorik asit, 0,5-1 mM DTT, 1 mM EDTA, vb.
Başvuru	His-etiketli protein saflaştırması, ilk tercihtir, yüksek yük, ortalama tolerans, özellikle prokaryotik ifade saflaştırma sistemi için uygundur

Ek: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) Ürün Özellikleri

1. Geleneksel önceden paketlenmiş kolonlar ve reçinelerle karşılaştırıldığında, numunelerin birden fazla santrifüjlenmesine ve numune akış hızının kontrol edilmesine gerek yoktur, bu da arıtma süresini büyük ölçüde azaltır.
2. Tek aşamalı saflaştırma ile hedef proteinin %95'inden daha fazla saflığa ulaşması sağlanabilir.
3. Yüksek hedef protein verimi: Verim %70-80'lere ulaşabilir.
4. 5 defaya kadar tekrar kullanılabilir.
5. Hedef proteinin konsantrasyonunu ve hacmini ayarlamak kolaydır.
6. Protein kaybı azdır ve protein denatürasyonu veya çökelmesi riski yoktur.

GST Etiket Protein Afinite Saflaştırma Ortamı

GST etiketli protein afinitesi kromatografisi, GST füzyon proteini ile sabit glutatyon (GSH) arasındaki kovalent afiniteyi kükürt bağları aracılığıyla kullanır ve GSH değişim elüsyonu ilkesine göre saflaştırır. Bu saflaştırmada, bir glutatyon, jelin koluyla bir kükürt bağı aracılığıyla birleştirilir ve daha sonra glutatyon ile glutatyon S-transferaz (yani GST-etiketi) arasındaki özgül etki kuvveti, GST etiketli füzyon proteininin jeldeki glutatyon koluyla birleşmesini sağlamak için kullanılır, böylece etiketli protein diğer proteinlerden ayrılır. Glutatyon genellikle oksitlenmiş formda GSSG ve indirgenmiş formda GSH'dir. GSH elüsyonunu kullandığımızda, GSH, füzyon proteiniyle birleşmek için jelin glutatyonuyla rekabet eder ve böylece hedef proteini elüe eder.

GSTSep Glutatyon Agaroz Reçinesi, 12 atomlu bir kol aracılığıyla matris olarak indirgenmiş glutatyonun %6 agaroz jeliyle kimyasal olarak kovalent olarak birleştirilmesiyle yapısal olarak üretilen bir GST etiketli protein saflaştırma reçinesidir. Bu tasarım, reçinenin saflaştırma verimliliğini büyük ölçüde artırarak, ortamın mililitresi başına 20 mg'dan fazla GST füzyon proteini taşımasını sağlamıştır. Ürün iyi bir özgüllüğe ve maliyet performansına sahiptir ve çeşitli glutatyon S-transferaz, glutatyona bağımlı proteinler ve glutatyon rekombinant türevlerini tek adımda saflaştırmak için kullanılabilir.

Tablo 3. Yeasen GST Arıtma Ürünü Seçim Rehberi

Ürün Numarası	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Ürün Adı	GSTSep Glutatyon Agaroz Reçinesi	GSTSep Glutatyon Agaroz Reçine 4FF	GSTSep Glutatyon 4FF Kromatografi Kolonu, 1 mL / 5 mL	GSTSep Glutatyon MagBoncuklar
Matris	Çapraz bağlı %6 Agaroz Jel	Yüksek çapraz bağlı %4 Agaroz Jel	Yüksek çapraz bağlı %4 Agaroz Jel	Manyetik Agaroz Mikroküreler
Basınç Direnci	0,1 MPa, 1 çubuk	0,3 MPa, 3 çubuk	0,3 MPa, 3 çubuk	Yok
Kapasite	>20 mg GST protein (40 kDa)/mL matris	>10 mg GST protein (40 kDa)/mL matris		5-10 mg GST etiket füzyon proteini/mL manyetik boncuklar
Başvuru	Yüksek yük, Matris ortalama basınç direncine sahip, inkübasyon yöntemi, yerçekimi kolonu küçük ölçekli saflaştırma için uygun, laboratuvar ölçekli müşteriler için önerilir	Uygulama Düşük yük, yüksek matris basınç direnci, protein saflaştırma cihazı ile endüstriyel büyük ölçekli protein saflaştırması için kullanılabilir, ölçeklendirmesi daha kolaydır		Manyetik ayırma yoluyla en düşük yük, hızlı ve kolay protein saflaştırması

Ek: GSTSep Glutatyon MagBeads (Kat#20562ES) Ürün Özellikleri

1. Biyolojik numunelerden yüksek saflıktaki hedef proteinleri tek adımda manyetik ayırma yoluyla doğrudan saflaştırın, saflaştırma sürecini büyük ölçüde basitleştirin ve saflaştırma verimliliğini artırın, bilimsel araştırma ve endüstriyel alanlarda uygun GST füzyon protein saflaştırması için uygundur.
2. Bu manyetik boncuğu GST Pull-down deneylerinde kullanmak, manyetik ayırma işleminin çoklu santrifüjleme ve uzun inkübasyon süreleri gerektirmemesi nedeniyle, geleneksel kromatografi yöntemlerine kıyasla işlemin daha basit, daha hızlı ve daha otomatik hale gelmesini sağlar.

Ürün Bilgileri

Ürün Konumlandırma	Ürün Adı	Ürün Numarası	Şartname
His Tag Protein Saflaştırma	HisSep Ni-NTA Agaroz Reçine	20502ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	HisSep Ni-NTA Agaroz Reçine 6FF	20503ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	HisSep Ni-NTA 6FF Kromatografi Kolonu, 5 mL	20504ES08/25	5 mL/5x5 mL
	HisSep Ni-NTA 6FF Kromatografi Kolonu, 1 mL	20505ES03/08	1 mL/5x1 mL
	HisSep Ni-NTA MagBeads	20561ES08/25	5 mL/25 mL
GST Etiket Protein Saflaştırma	GSTSep Glutatyon Agaroz Reçinesi	20507ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	GSTSep Glutatyon Agaroz Reçine 4FF	20508ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	GSTSep Glutatyon 4FF Kromatografi Kolonu, 1 mL	20509ES03/08	1 mL/5x1 mL
	GSTSep Glutatyon 4FF Kromatografi Kolonu, 5 mL	20510ES08/25	5 mL/5x5 mL
	GSTSep Glutatyon MagBeads	20561ES08/25	5 mL/25 mL