Üstat Canace^T.M. Urasil+ Yüksek Sadakat DNA polimerazı, yeni nesil bir yüksek doğruluklu DNA Pfu DNA Polimeraza dayalı Polimeraz. Hieff Canace^T.M. Urasil+ yüksek doğruluklu DNA Polimerazı, karmaşık şablonlar için hızlı ve doğru PCR reaksiyonları sağlar. Doğruluğu önemli ölçüde iyileştirilmiştir ve dUTP içeren primerler/şablonlar/dNTP'ler kullanılarak meydana gelen amplifikasyon başarısızlığını tamamen ortadan kaldırır. Ürün, optimize edilmiş bir enzim tamponu ve PCR güçlendirici bileşenlerin eklenmesiyle donatılmıştır, bu da enzimi oldukça verimli hale getirir ve karmaşık şablonların amplifikasyonu için uygun, çok çeşitli şablonlara uyarlanabilir hale getirir.

Ürün Bileşenleri

Nakliye ve Depolama

Bileşenler buz aküleriyle birlikte gönderilmekte olup -20°C'de 1 yıl süreyle saklanabilmektedir.

Ürün Uygulaması

dUTP içeren primerler/şablonlar/dNTP'ler kullanılarak yüksek doğrulukta kütüphane amplifikasyonu.

Dikkat Edilmesi Gerekenler

1. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.

2. Sadece araştırma amaçlıdır!

Talimatlar

Üstat Canace^T.M. Urasil+ Yüksek Sadakat DNA polimerazı, geleneksel yüksek sadakat enzimlerinden biraz farklı bir şekilde kullanılır. Lütfen kullanmadan önce talimatları dikkatlice okuyun.

1. Önerilen reaksiyon sistemi

Tüm işlemler buz üzerinde yapılmalıdır. 2×Canace^T.M. Urasil+ PCR tamponu çözüldükten sonra iyice karıştırılmalıdır. Sistem yapılandırmasından önce, lütfen PCR cihazını önceden ısıtın. Bileşenlerin eklenmesinden sonra, örneği bir pipetle iyice karıştırın ve tüpün dibine doğru döndürün, ardından amplifikasyon için önceden ısıtılmış PCR cihazına yerleştirin. Kullanımdan sonra, tüm bileşenleri depolama için -20 °C'ye geri koyun.

Tablo 1. PCR amplifikasyon reaksiyonu

[Notlar]:

1)Reaktifler: Kullanmadan önce her bileşeni yeterince çözün;

2)Şablonlar: Saflaştırılmış yüksek kaliteli DNA şablonlarının kullanımı, amplifikasyonun verimliliğini ve başarı oranını önemli ölçüde artırabilir;

3)dNTP'ler: Önerilen son dNTP konsantrasyonu 200 μM'dir. Kitte sağlanan dNTP'ler dUTP içermez. Özel koşullar dUTP içeren şablonların hazırlanmasını gerektiriyorsa, 400 μM'lik bir son konsantrasyona kadar ek dUTP eklenebilir.

4)Polimeraz konsantrasyonu: 1 U/50 μL önerilir. 0,5-2 U/50 μL arasında optimize edilebilir, 2 U/50 μL'yi aşmayın. Polimerazın 3 '→5' ekzonüklit aktivitesi nedeniyle primerleri parçalamasını önlemek için, son adımda reaksiyon sistemine polimeraz eklenmesi önerilir.

5)Mg2+ son konsantrasyonu: Sistemin son konsantrasyonu 2 mM'dir. Özel ihtiyaçlarınız varsa lütfen firmamızdan düşük Mg2+ konsantrasyonlu veya Mg2+ içermeyen tampon sağlamasını isteyin.

2. Önerilen reaksiyon prosedürü

Tablo 2. PCR amplifikasyon reaksiyon prosedürü

[Notlar]：

1)İlk denatürasyon sıcaklığı ve süresi: 98℃ önerilir. Plazmit DNA gibi basit şablonlar için önerilen süre 30 saniye, kütüphaneler için 1 dakika, cDNA ve genomik DNA gibi karmaşık şablonlar için 3 dakika ve yüksek GC içerikli şablonlar için 5-10 dakikadır.

2)Tavlama sıcaklığı ve süresi: 60℃ önerilir veya sıcaklık gradyanı, ihtiyaçlara göre primer tavlama için optimum sıcaklığı bulmak üzere ayarlanabilir. Önerilen tavlama süresi 20 saniyedir ve 10-30 saniye içinde ayarlanabilir. Çok uzun tavlama süresi, amplifikasyon ürünlerinin jel üzerinde dağılmasına yol açabilir.

3)Uzatma sıcaklığı ve süresi: 72℃ önerilir. Uzatma süresi gerçek ihtiyaçlara göre ayarlanır.