Tanım
Bu kit, fare dokusunun (fare kuyruğu, fare kulağı, fare parmağı, kas vb.) PCR amplifikasyonunu doğrudan ve hızlı bir şekilde gerçekleştirebilir ve güçlü bir örnek uyumluluğuna sahiptir. Güçlü bir lizis tamponuyla donatılmış olan bu kit, örnekleri hızla lizis edebilir ve genomik DNA'yı serbest bırakabilir. Lizat, saflaştırma olmadan doğrudan PCR reaksiyon sistemine eklenebilir ve işlem uygundur. Ayrıca, bu kit düşük örnek girişi gerektirir ve deneyler için 5 mg fare dokusu veya 1-5 mm fare kuyruğu kullanılabilir.
Bu kit tarafından sağlanan 2× Fare Doğrudan PCR Karışımı, 2 kat konsantrasyona sahip sıcak başlatmalı bir PCR reaksiyon çözeltisidir. Şablon ve primerler hariç PCR amplifikasyonu için kullanılan tüm bileşenleri içerir, bu da işlem sürecini büyük ölçüde basitleştirir ve kontaminasyon olasılığını azaltır. Kit, transgen tanımlama, fare genotipleme vb. için kullanılabilir.
Özellikler
- Daha az numune gerekli: 5 mg fare dokusu veya 1-5 mm fare kuyruğu
- Kolay şablon hazırlama: öğütmeye gerek yok, DNA'yı rafine etmeye ve arındırmaya gerek yok, daha yüksek akış, zamandan ve paradan tasarruf
- Optimize edilmiş PCR sistemi: PCR reaksiyon inhibitörünün daha yüksek özgüllüğü ve daha güçlü toleransı ile
Uygulamalar
- Transgenik farelerin tanımlanması
- Farelerin genotiplendirilmesi
- Fare gen nakavt analizi
Özellikler
| Ürün özellikleri | Kit |
| Sıcak başlangıç | Dahili Sıcak Başlatma |
| Taşıma koşulları | Buz Paketleri |
| Ürün türü | Doğrudan PCR Kiti |
| Uygula ile (başvuru) | Fare kuyruğu, Fare kulağı, Sıçan parmağı, İç organlar, Deri vb. |
Bileşenler
| Bileşenler No. | İsim | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Tampon Ml | 5×1 mL | 20×1 mL |
| 10185-B | Tampon MT | 0,6 ml | 2×1,25 mL |
| 10185-C | 2× Fare Doğrudan PCR Karışımı | 500 μL | 2×1 mL |
- a) Tampon ML, güçlü protein denatürantları içeren bir lizis tamponudur, lütfen eldiven giyin.
- b) Tampon MT, Tampon ML'nin lizis fonksiyonunu durdurmak için kullanılan bir durdurma tamponudur.
- c) 2× Fare Doğrudan PCR Karışımı: Sıcak başlatmalı Taq DNA polimeraz, dNTP karışımı, MgCl2, reaksiyon tamponu, PCR reaksiyon arttırıcı, optimize edici, stabilizatör, elektroforez gösterge boyası vb. içerir.
Depolamak
- Bileşen A: Ürün, 2°C~8°C'de bir yıl saklanabilir. Uzun süre birden fazla kullanım için lütfen çapraz kontaminasyondan kaçının.
- Bileşen B/C: Ürün şurada saklanmalıdır:-25℃ ~ -15℃ bir yıl süreyle. Lütfen tekrarlanan dondurma-çözme işlemlerinden kaçının.
Rakamlar
1. Hedef gen (1 kb içinde) amplifikasyon sonucu
Şekil 1.1 kb içindeki hedef gen amplifikasyonu için uygundur.
2. Uzatma hızı gösterimi
Şekil 2. 500 bp geninde, uzama hızı 1 sn/kb kadar hızlı olabilir.
"TFPI, hipervirülan klad 2 C. difficile'den TcdB için bir kolon kript reseptörüdür. Hücre . 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010." adresinden alıntılanmıştır.
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, ve diğerleri. TFPI, hipervirülan klad 2 C'den TcdB için bir kolon kript reseptörüdür. zor. Hücre. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Bruton tirozin kinazı, NLRP3 inflamazom aktivasyonu yoluyla diyabetik böbrekte makrofaj kaynaklı inflamasyonu düzenler. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Yaygın sorun | Olası sebep | Çözüm |
| Pozitif kontrolde ve test edilecek örneklerde bant görülmedi. | PCR reaksiyon sistemi veya reaksiyon koşulları uygun değildi. | PCR için optimum reaksiyon koşullarını araştırmak amacıyla gradyan PCR'yi kullanın. |
| PCR reaktiflerinin uygunsuz şekilde saklanması aktivite kaybına neden olur. | 2× Fare Doğrudan PCR Karışımı -20°C'de saklanmalı ve kullanım sırasında tekrar tekrar dondurulup çözülmemelidir. Sık kullanılırsa, kısa bir süre için 4°C'de saklanabilir. | |
| Primer tasarım sorunları. | Primerleri yeniden tasarlayıp kontrol etmeyi deneyin. | |
| Pozitif kontrol ilgi çekici bir banda sahiptir ve test edilecek numunenin bandı yoktur veya zayıf bir bandı vardır. | Uygunsuz depolama veya uzun süreli depolama reaktif aktivitesinin kaybolmasına neden olabilir. | Taze reaktifler kullanın. |
| Fazla miktarda doku lizatı ekleyin. | Reaksiyon sistemini artırın veya lizat miktarını azaltın. | |
| Örnek lizis karışımı uygunsuz şekilde saklanmış veya çok uzun süre saklanmış ve DNA genomu bozulmuştur. | Lizat karışımı 4°C’de 2-3 gün saklanabilir.PCR için taze hazırlanmış lizat karışımını kullanmaya çalışın. | |
| Eklenen şablon miktarı uygun değil. | Reaksiyon sisteminin %1-10 aralığında eklenen şablon miktarı optimize edildi. | |
| PCR döngülerinin sayısı yetersiz. | PCR döngülerinin sayısını artırın, tercihen 35-40 döngü. Şablonun karmaşıklığı nedeniyle, PCR reaksiyonları saflaştırılmış DNA şablonuna göre 5-10 döngü daha fazla yapılmalıdır. | |
| Spesifik olmayan amplifikasyon | PCR tavlama sıcaklığı çok düşük, döngü sayısı, primer konsantrasyonu veya şablon konsantrasyonu çok yüksek. | PCR tavlama sıcaklığını artırın ve PCR döngü sayısını, primer konsantrasyonunu veya şablon konsantrasyonunu azaltın. |
| PCR primer uyumsuzlukları. | PCR primerlerini yeniden tasarlayın. | |
| PCR reaksiyon sisteminin hazırlanması sırasında sıcaklığın çok yüksek olması veya hazırlık tamamlandıktan sonra geçen sürenin çok uzun olması. | PCR reaksiyon sisteminin hazırlanması düşük sıcaklıkta yapılır ve PCR amplifikasyon reaksiyonu, hazırlık tamamlandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede gerçekleştirilir. | |
| Hedef bant negatif kontrolde görünür | İşletme aletlerinin veya reaktiflerin kirlenmesi. | Deneydeki tüm reaktifler veya ekipmanlar otoklavlanmalıdır. Hedef dizinin numune tabancasına emilmesini veya santrifüj tüpünden dökülmesini önlemek için dikkatli ve nazik davranın. |
| Numuneler arasında çapraz bulaşma. | Her bir numune alıcı yalnızca bir numune için kullanılır; veya bir numune aldıktan sonra, numune alıcının kenarını %2'lik sodyum hipoklorit solüsyonuna daldırın, tekrar tekrar durulayın ve ardından kalıntıları temiz bir kağıt havluyla kurulayın. |
Ödeme ve Güvenlik
Ödeme bilgileriniz güvenli bir şekilde işlenir. Kredi kartı ayrıntılarını saklamıyoruz veya kredi kartı bilgilerinize erişimimiz yok.
Sorgu
Ayrıca sevebilirsiniz
SSS
Ürün yalnızca araştırma amaçlıdır ve insanlarda veya hayvanlarda terapötik veya teşhis amaçlı kullanım için tasarlanmamıştır. Ürünler ve içerikler, Yeasen Biotechnology'nin sahip olduğu patentler, ticari markalar ve telif haklarıyla korunmaktadır. Ticari marka sembolleri, tüm bölgelerde tescilli olmayıp, menşe ülkesini gösterir.
Bazı uygulamalar üçüncü tarafların ek fikri mülkiyet haklarına ihtiyaç duyabilir.
Yeasen, araştırmalarımızın güvenlik ve etik standartları sağlarken kritik soruları ele alması gerektiğine inanarak etik bilime kendini adamıştır.