Tanım
Bitki dokusu doğrudan PCR kiti, geniş adaptasyon ve güçlü stabilite ile farklı bitki yapraklarını PCR ile doğrudan çoğaltabilen bir kittir. Kit, çeşitli bitki örneklerini hızla lize edebilen ve genomik DNA'yı serbest bırakabilen benzersiz bir lizis tampon sistemi kullanır. Serbest bırakılan genomik DNA, PCR reaksiyonunda protein, RNA veya ikincil metabolitleri çıkarmadan doğrudan bir şablon olarak kullanılabilir. Ek olarak, kit az miktarda örnek gerektirir, deneyler için 1 mm kadar düşük bitki yaprakları kullanılabilir.
Bu kitte sağlanan 2×Plant Master Mix güçlü amplifikasyon uyumluluğuna sahiptir ve verimli ve spesifik amplifikasyon için doğrudan numunenin lizatını şablon olarak kullanabilir. Bu reaktif, şablon ve primerler hariç PCR amplifikasyonu için kullanılan tüm bileşenleri içeren 2 katlı konsantre bir PCR reaksiyon karışımıdır, bu da çalışma sürecini büyük ölçüde basitleştirir ve kontaminasyon olasılığını azaltır.
Kit, transgenik bitkilerin tanımlanması, bitki genotiplemesi vb. amaçlarla kullanılabilir.
Nakliye
Ürünler buz aküsü ile birlikte gönderilmektedir.
Depolamak
1. Reaktif 10187-A [Tampon P1] 4℃'de 1 yıl saklanabilir.
2. Lizatı nötralize etmek için kullanılan Reaktif 10187-B [Tampon P2], numunenin daha uzun süre saklanması için faydalıdır ve 4℃'de 1 yıl saklanabilir.
3. Reaktif 10187-C [2× Bitki Ana Karışımı] -20℃'de 1 yıl saklanabilir. Tekrarlanan dondurma ve çözme işlemlerinden kaçının.
Dikkat Edilmesi Gerekenler
1. Yaprak deneyleri yaparken taze toplanmış yaprak dokusu kullanılması önerilir. Uzun süreli dondurulmuş bir doku ise -80°C'de saklanması gerekir. Şablon bozulmasını önlemek ve PCR etkinliğini etkilemek için tekrarlanan dondurma ve çözme işlemlerinden mümkün olduğunca kaçınılmalıdır. Yaprak dokusu genç yapraklar için uygundur. Olgun bir yaprak ise yaprağın ana damarının dokusunu kullanmaktan kaçının.
2. En iyi amplifikasyon verimliliği için parçanın 1 kb uzunluğundan daha kısa olan kısımlarda çoğaltılması önerilir.
3. Örnekleme yaparken, uygun boyutta bir örnek almak için bir delgeç veya bıçak kullanın. Örnekler farklı olduğunda, örnek işlenmeden önce her seferinde delgeç veya bıçak temizlenmelidir.
4. Yaprak dokusu için 1-10 mm yapraklar alınması önerilir, çok küçük yaprak uzunluğu düşük PCR amplifikasyon verimine yol açacaktır, çok fazlası PCR reaksiyonunu engelleyecektir, bitki yapraklarını işlemek için termal çatlatma, pipet ucuyla ezme ve öğütücüyle ezme yöntemini kullanın. İşlemden sonra çalkalanması ve santrifüjlenmesi gerekir. Test için üstteki sıvıyı aldığınızdan emin olun. Çökelme PCR reaksiyonunu ciddi şekilde engelleyecektir.
5. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.
6. Bu ürün SADECE araştırma amaçlıdır!
| Yaygın Sorunlar | Olası nedenler | Çözümler |
| Pozitif kontrolde ve test edilecek örneklerde bant görülmedi. | PCR reaksiyon sistemi veya reaksiyon koşulları uygun değildi. | PCR için optimum reaksiyon koşullarını araştırmak amacıyla gradyan PCR'yi kullanın. |
| PCR reaktiflerinin uygunsuz şekilde saklanması onları inaktif hale getirir. | 2×PCR Mix -20℃'de saklanmalıdır, kullanırken tekrar tekrar dondurulup çözülmemelidir. Sık kullanılırsa, kısa bir süre için 4°C'de saklanabilir. | |
| Primer tasarım sorunları. | Primerleri yeniden tasarlayıp kontrol etmeyi deneyin. | |
| Pozitif kontrol ilgi çekici bir banda sahiptir ve test edilecek numunenin bandı yoktur veya zayıf bir bandı vardır. | Lizis tamponu ile nötralizasyon tamponu arasındaki oran uygun değildir ve lizis karışımı PCR sisteminin pH değerini etkileyecektir. | Normal şartlarda nötralize edilmiş lizis karışımının pH'ı 7-8 civarında olmalıdır (lizis ürünü ve Tampon P2 kesinlikle 5:1 oranına uyularak nötralize edilmelidir). |
| Örnek lizis karışımı uygunsuz bir şekilde veya çok uzun süre saklanmış ve DNA genomu bozulmuştur. | Lizat karışımı 4°C’de 5 gün saklanabilir, PCR için taze hazırlanmış bir lizat karışımı kullanmaya çalışın. | |
| Eklenen şablon miktarı uygun değil. | Reaksiyon sisteminin %5'inden az olacak şekilde eklenen şablon miktarını optimize edin. | |
| PCR döngülerinin sayısı yetersiz. | PCR döngülerinin sayısını uygun şekilde artırın, tercihen 35-40 döngü. Şablonun karmaşıklığı nedeniyle, saflaştırılmış DNA şablonu kullanmaktan genellikle 5-10 daha fazla PCR reaksiyonu döngüsü kullanmak daha iyidir. | |
| Spesifik olmayan amplifikasyon | PCR tavlama sıcaklığı çok düşük, döngü sayısı, primer konsantrasyonu veya şablon konsantrasyonu çok yüksek. | PCR tavlama sıcaklığını artırın ve PCR döngü sayısını, primer konsantrasyonunu veya şablon konsantrasyonunu azaltın. |
| PCR primer uyumsuzluğu. | PCR primerlerini yeniden tasarlayın. | |
| PCR reaksiyon sistemi hazırlanırken sıcaklık çok yüksek veya hazırlamadan sonra belirlenen süre çok uzun. | PCR reaksiyon sisteminin hazırlanması düşük sıcaklıkta yapılır ve PCR amplifikasyon reaksiyonu, hazırlık tamamlandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede gerçekleştirilir. | |
| Hedef bant negatif kontrolde görünür | İşletme aletlerinin veya reaktiflerin kirlenmesi. | Deneyde kullanılan tüm reaktifler veya ekipmanlar otoklavlanmalıdır.Hedef dizinin numune tabancasına emilmesini veya santrifüj tüpünden dökülmesini önlemek için tutarken dikkatli ve nazik olun. |
| Numuneler arasında çapraz bulaşma. | Her bir örnekleyici yalnızca bir örnek için kullanılır; veya bir örnek aldıktan sonra, örnekleyici bıçağını %2'lik sodyum hipoklorit çözeltisine daldırın, tekrar tekrar durulayın ve ardından kalıntıları temiz bir kağıt havluyla kurulayın. |
Ödeme ve Güvenlik
Ödeme bilgileriniz güvenli bir şekilde işlenir. Kredi kartı ayrıntılarını saklamıyoruz veya kredi kartı bilgilerinize erişimimiz yok.
Sorgu
Ayrıca sevebilirsiniz
SSS
Ürün yalnızca araştırma amaçlıdır ve insanlarda veya hayvanlarda terapötik veya teşhis amaçlı kullanım için tasarlanmamıştır. Ürünler ve içerikler, Yeasen Biotechnology'nin sahip olduğu patentler, ticari markalar ve telif haklarıyla korunmaktadır. Ticari marka sembolleri, tüm bölgelerde tescilli olmayıp, menşe ülkesini gösterir.
Bazı uygulamalar üçüncü tarafların ek fikri mülkiyet haklarına ihtiyaç duyabilir.
Yeasen, araştırmalarımızın güvenlik ve etik standartları sağlarken kritik soruları ele alması gerektiğine inanarak etik bilime kendini adamıştır.