Tanım
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kiti, DNA saflaştırma veya numune ön işlemi olmaksızın tam kan örneklerini doğrudan çoğaltabilen ve taze kan, soğutulmuş (dondurulmuş) kan ve EDTA, heparin, sitrat vb. gibi geleneksel antikoagülanlar içeren ticari kurutulmuş kan boyalarıyla uyumlu bir kittir. Kit, yüksek doğruluk ve PCR inhibitörlerine karşı direnç sağlayan genetik olarak tasarlanmış bir DNA polimeraz kombinasyonu, güçlü uzama faktörüne, amplifikasyon geliştirme faktörüne ve hızlı uzatma koşulları altında 8 kb genomik parçaları verimli bir şekilde çoğaltmak için optimize edilmiş tampon sistemine sahip 2× Hieff® Blood Advanced PCR Tamponu ve 2 kb'nin altındaki parçalar için 3-5 sn/kb uzatma süresi ayarlayarak kan örneği tanımlama ve test etme süresini önemli ölçüde kısaltır.
Özellikler
| Sadakat (Taq'a karşı) | 1 × |
| Sıcak Başlangıç | Evet |
| Çıkıntı | 3'-A |
| Polimeraz | Taq DNA Polimerazı (Kat: 10726) |
Bileşenler
| HAYIR. | İsim | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Yüksek® Kan Gelişmiş PCR Tamponu | 500 μL | 2,5 ml |
| 10188-B | Hieff® Gelişmiş Yüksek Doğruluklu DNA Polimeraz Karışımı | 20 μL | 100 μL |
| 10188-C | Pozitif kontrol primer karışımı (her biri 10 μM) | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | 10× DNA yükleme tamponu | 1 ml | 1 ml |
Talimatlar
Önerilen PCR reaksiyon sistemleri.
| Bileşenler | Hacim (μL) |
| gdH2O | 50 μL'ye kadar |
| 2× Yüksek® Kan Gelişmiş PCR Tamponu | 25 μL |
| İleri Primer (10 μM) | 2 μL |
| Ters Primer (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Gelişmiş Yüksek Doğruluklu DNA Polimeraz Karışımı | 1 μL |
| Kan örneği | X |
2. Primer başına 0,4 μM'lik son konsantrasyon önerilir, çok yüksek konsantrasyonlar spesifik olmayan amplifikasyona neden olur.
3. Optimum tam kan şablon konsantrasyonu %0,5 ila %20 arasındadır ve önerilen kullanım başlangıç deneme koşulu olarak %10'dur, yani 50 μL reaksiyon sistemine şablon olarak 5 μL tam kan eklenir ve kan pıhtılarının aspirasyonundan kaçınılır. Whatman® filtre kartlarında saklanan kurumuş kan lekeleri için, kan lekeleri içeren yaklaşık 1 mm2'lik yuvarlak kağıt parçaları alınabilir ve ön işlem yapılmadan doğrudan PCR reaksiyonuna çoğaltılabilir.
Tepki programı
| Döngü adım | Sıcaklık. | Zaman | Döngüler |
| İlk denatürasyon | 95℃ | 5 dk | 1 |
| Denatürasyon | 95℃ | 15 saniye | 30-35 |
| Tavlama | 60℃ | 15 saniye | |
| Eklenti | 72℃ | 3-10 sn/kb | |
| Son eklenti | 72℃ | 5 dk | 1 |
Tavlama sıcaklığı genel bir Tm değeridir veya primer Tm değerinin 1-2°C altındadır. Amplifikasyon ürünü daha az spesifikse, optimum tavlama koşullarını bulmak için bir tavlama sıcaklığı gradyanı oluşturulabilir.
10 sn/kb'lik uzatma süresi 8 kb'nin altındaki hedef parçaların çoğunu çoğaltabilir ve 3-5 sn/kb'lik uzatma süresi 2 kb'nin altındaki parçaların çoğunu çoğaltabilir. Amplifikasyon verimliliği düşükse, süre uygun şekilde 20-30 sn/kb'ye kadar uzatılabilir ve 60 sn/kb'yi geçmemelidir.
Nakliye ve Depolama
Ürünler -15℃'de saklanmalıdır. ~ -25℃ için 1 yıl
Rakamlar
Notlar
1. Kan şablonunun toplam reaksiyon hacminin %10’u kadar kullanılması, yani 50 μL reaksiyon sistemine şablon olarak 5 μL tam kan eklenmesi, kan pıhtılarının aspirasyonundan kaçınılması önerilir.
2. 10 sn/kb'lik uzatma süresi 8 KB'nin altındaki hedef parçaların çoğunu çoğaltabilir ve 3-5 sn/kb, 2 KB'nin altındaki parçaların çoğunu çoğaltabilir. Amplifikasyon verimliliği düşükse, süre 30 sn/kb'ye kadar uzatılabilir.
3. PCR reaksiyonundan sonra, kan hücresi parçalarının çökelmesi için reaksiyon ürününün 4000 rpm’de (1000×g) 1-3 dakika santrifüj edilmesi ve üst fazın aşağı akış analizi için alınması önerilir.
4. Bu ürün doğrudan tıbbi teşhis amacıyla kullanılamaz.
5. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen laboratuvar önlüğü giyin ve tek kullanımlık eldiven takın.
Ödeme ve Güvenlik
Ödeme bilgileriniz güvenli bir şekilde işlenir. Kredi kartı ayrıntılarını saklamıyoruz veya kredi kartı bilgilerinize erişimimiz yok.
Sorgu
Ayrıca sevebilirsiniz
SSS
Ürün yalnızca araştırma amaçlıdır ve insanlarda veya hayvanlarda terapötik veya teşhis amaçlı kullanım için tasarlanmamıştır. Ürünler ve içerikler, Yeasen Biotechnology'nin sahip olduğu patentler, ticari markalar ve telif haklarıyla korunmaktadır. Ticari marka sembolleri, tüm bölgelerde tescilli olmayıp, menşe ülkesini gösterir.
Bazı uygulamalar üçüncü tarafların ek fikri mülkiyet haklarına ihtiyaç duyabilir.
Yeasen, araştırmalarımızın güvenlik ve etik standartları sağlarken kritik soruları ele alması gerektiğine inanarak etik bilime kendini adamıştır.