Quick T4 DNA Ligaz, NGS kütüphanesi oluşturma sürecinde DNA parçalarının ve adaptörlerinin bağlanması için kullanılabilen tek bir enzim ürünüdür. Bu ürün yüksek verimli dizileme ile doğrulanmıştır ve mükemmel kaliteye sahiptir. Deneysel sistem ayarlamasına ihtiyaç duymayan müşteriler için Hieff NGSTM Hızlı DNA Bağlama Modülü (Cat#12607) satın alınması önerilir.

Ürün Bileşenleri

Nakliye ve Depolama

Ürün buz aküleri ile birlikte gönderilmekte olup -20°C'de iki yıl saklanabilmektedir.

Birim Tanımı

20 μL ligasyon reaksiyon sisteminde, 6 μg λDNA-Hind Ⅲ 16℃'de 30 dakika reaksiyona sokulduğunda, DNA parçalarının %50'den fazla ligasyonunu sağlamak için gereken enzim miktarı bir ünite (U) olarak tanımlandı.

Dikkat Edilmesi Gerekenler

1. Tampon erirken az miktarda çökelti oluşursa, kullanmadan önce lütfen ters çevirin ve iyice karıştırın;

2. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.

3. Bu ürün SADECE araştırma amaçlıdır!

Talimatlar

1. Mevcut ana akım DNA kütüphanesi yapım kitleri genellikle uç onarımı ve A-Kuyruklama işleminden sonra saflaştırılmaz ve doğrudan adaptör ligasyonu gerçekleştirir. Lütfen reaksiyon sistemi için aşağıdaki hazırlığa bakın. İyice vorteksleyin, kısa bir süre döndürün ve 20°C'de 15 dakika inkübe edin.

[Not]: *Kit içerisinde %50 PEG 6000 bulunmamaktadır, kendiniz hazırlamanız gerekmektedir.

**Adaptör miktarları için aşağıdaki tabloya bakınız.

***Kullanılan Quick T4 DNA Ligaz miktarı ihtiyaca göre 1-5 μL eklenebilir.

2. Kullanılan adaptörlerin kalitesi ve konsantrasyonu, doğrudan ligasyon verimliliğini ve kütüphane verimini etkiler. Çok fazla adaptör kullanımı daha fazla adaptör dimeri üretebilirken, daha az kullanım ligasyon verimliliğini ve kütüphane verimini etkileyebilir. Aşağıdaki tablo, bu kiti kullanarak farklı Giriş DNA durumlarında kullanılan adaptörlerin önerilen miktarını listeler.

[Not]: Giriş DNA molü (pmol)≈ Giriş DNA(ng)/ [0,66 × Giriş DNA ortalama uzunluğu(bp)].

Adaptör ligasyonu hesaplama örneği: Giriş DNA'sı 100 ng ve uzunluğu 300 bp olduğunda ne kadar adaptör eklenmelidir?

Adım 1: Giriş DNA'sının mol sayısını hesaplayın. Formül: Giriş DNA molü (pmol)≈ Giriş DNA'sı (ng)/ [0,66 × Giriş DNA ortalama uzunluğu (bp)]; Giriş DNA molü (pmol)=100 ÷ (0,66×300) = 0,5 pmol;

Adım 2: Yukarıdaki tabloya göre, eklenen adaptörün mol sayısını hesaplayın.; Giriş DNA'sı 100ng olduğunda, adaptörlerin molar oranı: giriş DNA'sı 100:1'dir ve eklenen adaptörlerin mol sayısı = 100×0,5 pmol = 50 pmol;

Adım 3: Adaptör ekleme hacmini hesaplayın. Adaptör konsantrasyonu = 15 μmol/L (başka bir şirketin adaptörünü kullanıyorsanız, konsantrasyonunu talimatlarına göre belirlemeniz gerekir); Eklenen adaptör hacmi = eklenen adaptörün mol sayısı (50 pmol) ÷ adaptörün konsantrasyonu (15 μmol/L) = 3,34 μL (Not: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Özetle adaptörün eklenebileceği hacim 3,4 μL’dir. (Not: Adaptörün eklenebileceği maksimum hacim 5 μL’yi geçmemektedir).