Tanım
Hifair™ AdvanceFast 1. Zincir cDNA Sentez Kiti (Boya Yok), Hifair™ temel alınarak geliştirilen hızlı bir ters transkripsiyon kitidir. III 1. Zincir cDNA Sentez Kiti (Boya Yok), PCR amplifikasyonu ve RT-qPCR deneyleri için uygundur. Hifair™ ile karşılaştırıldığında III 1. Zincir cDNA Sentez Kiti (Boya Yok), stabil tespit oranları, özgüllük ve verim güvencesi sunarken, toplam ters transkripsiyon süresini potansiyel olarak 6 dakikanın altına düşürerek deney süresini önemli ölçüde kısaltır.
Kit, RNA şablonunda kalan genomik DNA kontaminasyonunu ortadan kaldırabilen ve daha güvenilir sonraki sonuçları garantileyen gDNA Digester Mix içerir. Kit, iki tür cDNA sentez primeri sağlar: Random Primers N6 ve Oligo (dT)18Kullanıcılar Rastgele Primerler N6, Oligo (dT) arasında seçim yapabilirler18, veya Gen Spesifik Primerler ihtiyaçlarına göre ters transkripsiyon primerleri olarak. Sentezlenen tek zincirli cDNA ürünü, sonraki PCR veya qPCR reaksiyonları için doğrudan kullanılabilir.
Özellikler
| Kat.No. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Boyut | 10T/100T |
Bileşenler
| Bileşenler No. | İsim | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (Boyasız) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | 5×gDNA Sindirim Karışımı | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Rastgele Primerler (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primerler (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | RNase içermeyen su | 200 μL | 2×1 mL |
Depolamak
Bu ürün -25~-15℃'de saklanmalıdır. 1 yıl.
Talimatlar
- Eğer deney, kalan genomik DNA'nın çıkarılmasını gerektiriyorsa
1)gDNA Sindirimi
RNase içermeyen bir santrifüj tüpünde, aşağıdaki karışımı hazırlayın ve iyice karışması için yavaşça pipetleyin. 42℃'de 2 dakika inkübe edin.
| Bileşenler | Hacim (μL) |
| RNase içermeyen su | 10 μL'ye kadar |
| 5× gDNA Sindirim Karışımı | 2 μL |
| Toplam RNA* | 10 pg-5 μg |
| veya mRNA* | 10 pg-500 ng |
* Toplam RNA giriş miktarının 2 μg'ı geçmemesi önerilir. Hedef genin ifade düzeyi düşükse, giriş miktarı maksimum 5 μg Toplam RNA'ya kadar artırılabilir.
2）Ters Transkripsiyon Reaksiyon Sistemi Hazırlanması (20 μL Sistem)
| Bileşenler | Hacim (μL) |
| önceki adımdaki reaksiyon çözümü | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (Boyasız) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primerler (50 μmol/L)** | 2 μL |
| veya Rastgele Primerler (* qPCR için) (50 μmol/L)** | veya 2 μL |
| RNase içermeyen su | 20 μL'ye kadar |
* Primer miktarı şablon girdisinin miktarına göre ayarlanabilir. Ters transkripsiyon ürünü qPCR deneyleri için kullanılıyorsa, önerilen miktara göre sisteme Random Primer eklenebilir.
** Öncelikle 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (Boyasız) eklenmesi, iyice karıştırılması ve ardından primerin gDNA Digester'dan etkilenmemesini sağlamak için ters transkripsiyon primerinin eklenmesi önerilir.
3）Ters Transkripsiyon Prosedürü Ayarları
| Sıcaklık. | Zaman |
| 55℃* | 5 dk** |
| 85℃ | 5 saniye |
* Yüksek GC içerikli veya karmaşık şablonlar için ters transkripsiyon sıcaklığı 60℃'ye kadar çıkarılabilir.
** Bu ürün 14 kb'nin altındaki cDNA dizilerini sentezleyebilir. Daha uzun cDNA ürünlerine ihtiyacınız varsa, ters transkripsiyon süresini uygun şekilde uzatabilirsiniz.
- Eğer deney genomik DNA'nın çıkarılmasını gerektirmiyorsa
1）Ters Transkripsiyon Reaksiyon Sistemi Hazırlanması (20 μL Sistem)
| Bileşenler | Hacim (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (Boyasız) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Primerler (50 μmol/L)** | 2 μL |
| veya Rastgele Primerler (* qPCR için) (50 μmol/L)** | veya 2 μL |
| Toplam RNA* | 10 sayfa -5 μg |
| veya mRNA | 10 sayfa - 500 ng |
| RNase içermeyen su | 20 μL'ye kadar |
* Toplam RNA giriş miktarının 2 μg'ı geçmemesi önerilir. Hedef genin ifade seviyesi düşükse, giriş miktarı maksimum 5 μg Toplam RNA'ya çıkarılabilir.
** Primer miktarı şablon girdisi miktarına göre ayarlanabilir. Ters transkripsiyon ürünü qPCR deneyleri için kullanılıyorsa, sisteme önerilen miktara göre Random Primer eklenebilir.
2）Ters Transkripsiyon Prosedürü Ayarları
| Sıcaklık. | Zaman |
| 55℃* | 5 dk** |
| 85℃ | 5 saniye |
* Yüksek GC içerikli veya karmaşık şablonlar için ters transkripsiyon sıcaklığı 60℃'ye kadar çıkarılabilir.
** Bu ürün 14 kb'nin altındaki cDNA dizilerini sentezleyebilir. Daha uzun cDNA ürünlerine ihtiyacınız varsa, ters transkripsiyon süresini uygun şekilde uzatabilirsiniz.
Notlar
- Tüm işlemler buz üzerinde ve RNase kontaminasyonundan kaçınılacak şekilde yapılmalıdır.
- Bu ürün yalnızca araştırma amaçlıdır.
- Lütfen güvenliğiniz için laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldivenlerle çalışın.
Belgeler:
Ödeme ve Güvenlik
Ödeme bilgileriniz güvenli bir şekilde işlenir. Kredi kartı ayrıntılarını saklamıyoruz veya kredi kartı bilgilerinize erişimimiz yok.
Sorgu
Ayrıca sevebilirsiniz
SSS
Ürün yalnızca araştırma amaçlıdır ve insanlarda veya hayvanlarda terapötik veya teşhis amaçlı kullanım için tasarlanmamıştır. Ürünler ve içerikler, Yeasen Biotechnology'nin sahip olduğu patentler, ticari markalar ve telif haklarıyla korunmaktadır. Ticari marka sembolleri, tüm bölgelerde tescilli olmayıp, menşe ülkesini gösterir.
Bazı uygulamalar üçüncü tarafların ek fikri mülkiyet haklarına ihtiyaç duyabilir.
Yeasen, araştırmalarımızın güvenlik ve etik standartları sağlarken kritik soruları ele alması gerektiğine inanarak etik bilime kendini adamıştır.