Yaklaşık 22 nt uzunluğundaki kodlamayan RNA sınıfı olan MicroRNA, yaygın olarak ilgi görmektedir ve bitkilerde ve hayvanlarda gen ekspresyonunun düzenlenmesinde çok önemli bir rol oynamaktadır. Bu kit, miRNA floresansının kantitatif tespiti için SYBR Green I kimerik floresan yöntemini kullanır. 2×Hieff™ miRNA Universal qPCR Master Mix, miRNA'nın kantitatif tespiti için özel olarak geliştirilen yeni nesil bir ön karışım floresan kantitatif PCR tespit reaktifidir. Özel ROX Pasif Referans Boyası içerir. Çoğu qPCR cihazı için uygundur, farklı cihazlarda ROX konsantrasyonunu ayarlamaya gerek yoktur, sadece reaksiyon sisteminin hazırlanmasında primerler ve şablonlar ekleyin, çoğaltılabilir. DNA Polimeraz, reaksiyonu daha spesifik, daha hassas hale getirmek ve daha geniş bir aralıkta doğru bir şekilde kantifize edilebilmek için özel bir Tampon sistemiyle birleştirilmiş kimyasal olarak modifiye edilmiş ısıyla aktive edilen Polimerazı kullanır.
Bu ürünün, optimum deneysel sonuçlar elde etmek için Hifair™ miRNA 1. Zincir cDNA Sentez Kiti (Kuyruk) (Kat# 11148) ile birlikte kullanılması önerilir.

Özellikler

• Platform genelinde: Önceden karıştırılmış renkler kullanılarak ROX konsantrasyonunu değiştirmeye gerek yok
• Yüksek hassasiyetli tespit oranı: 10 pg DNA tespit edilebilir
• İyi amplifikasyon performansı: Mükemmel amplifikasyon verimliliği
• Yüksek özgüllük: Aynı ailedeki miRNA'lar arasındaki tek baz farklılıklarını ayırt edebilme

Uygulamalar

• Gen ifadesi

Özellikler

Bileşenler

Depolamak

Ürün -25℃ ~ -15℃ arasında 1 yıl saklanmalıdır.

Rakamlar

Şekil 1. İyi amplifikasyon performansı: mükemmel amplifikasyon verimliliği.

miR-let-7b-5p, miR-let-7c-5p, miR-let-7e-5p ve miR-let-7f-5p genleri şablon olarak insan 293T hücreleri ve fare karaciğer Toplam RNA'sı kullanılarak çoğaltıldı.Sonuçlar, benzer ürünlerle karşılaştırıldığında Hifair™ miRNA 1. Zincir cDNA Sentez Kiti'nin (Kat# 11148ES), Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix'in (Kat# 11171ES) reaksiyon sistemine mükemmel bir performansla uyduğunu gösterdi.

Şekil 2. Yüksek özgüllük: Aynı ailedeki miRNA'lar arasındaki tek baz farklılıklarını ayırt edebilme.

İnsan hsa-let-7 ailesi, birbirinden farklı birkaç baz veya hatta sadece tek bir baz farkı olan birden fazla miRNA'ya sahiptir. Bu miRNA'ları farklı primerlerle çoğaltın ve Formül 2- Δ CT x %100 hesaplanmış eşleşme oranını kullanın. Sonuçlar, yakından ilişkili alt tip aile üyelerinin etkili bir şekilde ayırt edilebileceğini gösterdi.