Globin mRNA Tükenme Probu (İnsan) insan Globin mRNA'sını çıkarmak için tasarlanmıştır. Globin mRNA'sını yetişkin, bebek ve embriyodan etkili bir şekilde çıkarabilirgüzel HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 ve HBZ dahil olmak üzere kaynaklar. Bu ürün Hieff NGS ile kullanılır^T.M. MaxUp rRNA Tükenme Kiti (İnsan/Fare/Sıçan) (Yeasen#12253) toplam RNA'dan rRNA ve Globin mRNA'yı etkili bir şekilde çıkarmak için. Bu kit hem sağlam hem de bozulmuş RNA örnekleri için uygundur. rRNA ve Globin mRNA çıkarıldıktan sonra RNA örnekleri, mRNA ve kodlamayan RNA'nın yüksek verimli dizileme analizinde kullanılabilir, bu da dizileme sonuçlarında geçerli veri oranını ve cDNA sentezini veya diğer alt akış uygulamalarını önemli ölçüde artırır.

Ürün Uygulaması

100 ng~1 μg toplam RNA örneği insan için uygundur, fare ve sıçan kanı kaynağı ve hem sağlam hem de kısmen parçalanmış RNA örnekleri için.

Ürün Bileşenleri

Nakliye ve Depolama

Tüm bileşenler kuru buzla gönderilir ve -20°C'de bir yıl saklanabilir..

Figür

Toplam 500ng ve 100ng İnsan kanı toplam RNA'sı sırasıyla rRNA çıkarılması ve kombine rRNA & Globin çıkarılmasına tabi tutuldu. Kütüphane oluşturma ve dizilemeden sonra, Globin mRNA içeriği karşılaştırıldı.

Dikkat Edilmesi Gerekenler

1. Lütfen RNase kontaminasyonundan arındırılmış sarf malzemeleri kullanın ve deney alanını düzenli olarak temizleyin. ThermoFisher'ın RNAZap'ını kullanmanız önerilir^T.M. RNase kontaminasyonunu gidermek için yüksek verimli nükleik asit giderme spreyi.

2. RNA örneği genomik DNA kontaminasyonundan arındırılmış olmalıdır. Örnekte gDNA kalırsa, DNase I ile sindirilmeli ve kullanımdan önce saflaştırılmalıdır.

3. RNA örneğinin maksimum giriş hacmi 10 μL'dir. Örnek hacmi büyükse, önce konsantre edilebilir.

4. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.

5. Sadece araştırma amaçlıdır!

Talimatlar

1. Probun RNA'ya Hibridizasyonu

1.1 10 ng–1 μg toplam RNA'yı bir PCR tüpünde nükleaz içermeyen su ile 10 μL'lik son hacme kadar seyreltin. RNA'yı saklayın buz üstünde.

1.2 Bir araya getirmek Aşağıdaki RNA/Prob hibridizasyon reaksiyonu buz üstünde Tablo 1'e göre.

Tablo 1 RNA/Prob hibridizasyon reaksiyonu

1.3 En az 10 kez yukarı aşağı yavaşça pipetleyerek iyice karıştırın. Tüpün kenarındaki sıvıyı toplamak için tüpü bir mikro santrifüjde kısaca aşağı doğru döndürün.

1.4 Tüpü bir termocycler'a yerleştirin ve ısıtılmış kapağı 105°C'ye ayarlayarak Tablo 2'deki programı çalıştırın.

Tablo 2 RNA/Prob hibridizasyonunun reaksiyon programı

2. RNase H Sindirimi

2.1 Aşağıdaki RNase H sindirim reaksiyonunu birleştirin buz üstünde Tablo 3'e göre.

Tablo 3 RNase H sindirim reaksiyonu

2.2 En az 10 kez yukarı aşağı yavaşça pipetleyerek iyice karıştırın. Tüpün kenarındaki sıvıyı toplamak için tüpü bir mikro santrifüjde kısaca aşağı doğru döndürün.

2.3 Tüpü bir termosikler cihazına yerleştirin ve aşağıdaki programı çalıştırın: kapak 50°C; 37°C, 30 dakika; 4°C, tutun.

3. DNaz BEN Sindirim

3.1 Aşağıdaki DNase I sindirim reaksiyonunu Tablo 4'e göre buz üzerinde gerçekleştirin.

Tablo 4 DNase Ⅰ sindirim reaksiyonu

3.2 En az 10 kez yukarı aşağı yavaşça pipetleyerek iyice karıştırın. Tüpün kenarındaki sıvıyı toplamak için tüpü bir mikro santrifüjde kısaca aşağı doğru döndürün.

3.3 Tüpü bir termosikler cihazına yerleştirin ve aşağıdaki programı çalıştırın: kapağı kapalı; 37°C, 30 dakika; 4°C, tutun.

4. RNA Saflaştırma

4.1 Hieff NGS'yi dengeleyin^T.M.RNA Temizleyiciyi (Kat#12602) oda sıcaklığına getirin ve kullanmadan önce boncukları iyice çalkalayarak yeniden süspanse edin.

4.2 Ekle 110 µL (2,2×) Adım 3.3'teki RNA çözeltisine boncuklar ekleyin ve en az 10 kez yukarı aşağı pipetleyerek iyice karıştırın.

4.3 RNA'nın boncuklara bağlanması için oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.

4.4 Boncukları üstteki sıvıdan ayırmak için tüpü manyetik bir stand üzerine yerleştirin. Çözelti berraklaştığında (yaklaşık 3 dakika), üstteki sıvıyı atın. Pipet uçlarıyla boncuklara dokunmamaya dikkat edin.

4.5 Tüpü manyetik standın üzerinde tutun. Tüpe 200 µL taze hazırlanmış %80 etanol ekleyin. Oda sıcaklığında 30 saniye inkübe edin ve ardından üstteki sıvıyı atın. Pipet uçlarıyla boncuklara dokunmamaya dikkat edin.

4.6 Toplam iki yıkama için 4.5. Adımı bir kez tekrarlayın.

4.7 10 µL ile kalan etanolü çıkarın - pipet uçları. Tüpü manyetik standın üzerine koyun ve kapağı açık halde 5 dakikaya kadar boncukları havada kurutun.

4.8 Tüpü manyetik standdan çıkarın. 11 μL Nükleazsız Su ekleyerek boncuklardan RNA'yı elüe edin. En az 10 kez yukarı aşağı pipetleyerek iyice karıştırın ve tüpü kısaca döndürün.

4.9 Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin. Tüpü, çözelti berraklaşana kadar (~3 dakika) manyetik standa yerleştirin.

4.10 Üstteki sıvıdan 10 µL’yi nükleaz içermeyen bir tüpe aktarın.

Not: Bu noktada durmanız gerekirse, numuneler -80°C'de saklanabilir.