Hifair™ V Multiplex Tek Adımlı RT-qPCR Prob Kiti (Udg Artı) şablon olarak RNA'ya dayalı bir multipleks kantitatif PCR kitidir. Deney sürecinde ters transkripsiyon ve kantitatif PCR aynı tüpte gerçekleştirildiğinden deneysel işlem basitleştirilmiş ve kontaminasyon riski azaltılmıştır.

Bu kitte, ilk iplik cDNA'sı ısıya dayanıklı Hifair ile verimli bir şekilde sentezlendi^T.M. V Ters Transkriptaz ve UNICON tarafından kantitatif olarak çoğaltıldı^T.M. HotStart Taq DNA Polimerazı. Kit esas olarak optimize edilmiş MP tamponu, enzim karışımı vb. içerir. Tampon çözeltisi zaten Mg içerir²⁺ ve dNTP. Ek olarak, spesifik olmayan PCR amplifikasyonunu etkili bir şekilde engelleyebilen ve çoklu qPCR reaksiyonlarının amplifikasyon verimliliğini artırabilen faktörler eklenir, bu da amplifikasyon verimliliğini garanti edebilir ve çoklu amplifikasyon reaksiyonlarına kadar gerçekleştirilebilir. dUTP/UDG sistemi, aerosol kontaminasyonu riskini etkili bir şekilde önlemek için eklendi.

Özellikler

Yüksek hassasiyet：Dikkatlice optimize edilmiş tampon sistemi, düşük konsantrasyonlu şablonların tespit hassasiyetini 250 kopya/mL'ye kadar artırır；

Süper stabilite: Ürün 18 ay boyunca gerçek zamanlı stabilite testlerinden geçti.

dUP/UDG kirlilik önleme sistemi：Ürünlerin aerosol kirliliğini etkili bir şekilde azaltmak, yanlış pozitifleri azaltmak ve otantik sonuçları garantilemek için dUTP/UDG kirlilik önleme sistemi tanıtıldı；

Hızlı programı destekler: Hızlı programla uyumludur, 40 dakikada sonuç üretebilir;

Bileşenler

Not: 1) 2×Hifair^T.M. V MP Arabellek kısaltmasıdır Hifair^T.M. V Multiplex Tek Adımlı RT-qPCR Prob Tamponu, dNTP'ler, dUTP, Mg'yi içerir2+, dengeleyiciler, güçlendiriciler ve daha fazlası.

2) Hifair^T.M. V Enzim Karışımı esas olarak içerir ısıya dayanıklı Hifair^T.M. V ters transkriptaz, UNICONT.M. HotStart Taq DNA polimerleri ve UD Gazı.

Depolamak

TO ürün gerekir olmak saklandı de -25°C~-15°C için 18 ay.

Talimatlar

Reaksiyon Kompozisyonu

Not：Kullanmadan önce iyice karıştırdığınızdan emin olun, şiddetli titreşimlerden kaynaklanan aşırı kabarcıklardan kaçının.

a) Astar/Sondaj konsantrasyon: Astar multipleks primer içeren karışım, Duruma bağlı olarak optimum primer konsantrasyonu 0,1 ile 1,0 μM arasında olabilir.Multipleks prob etiketleme farkı floresan grubunu içeren prob karışımı, duruma bağlı olarak optimum prob konsantrasyonu 0,05 ile 0,05 arasında olabilir.5 μM.

c) Şablon seyreltmesi: qPCR oldukça hassastır ve şablonun seyreltilmesi önerilir. Kontrol Ct değeri 20 ile 35 arasında uygundur.

D) Sistem hazırlığı: Filtre elemanı ile başınızı kaldırın. Çapraz kontaminasyon ve aerosol kontaminasyonundan kaçının.

Optimize Edilmiş Döngü Protokolü

Not：a) Sever transkripsiyon: Sıcaklık 42'yi seçebilir°C veya 50°C 10-15 dakika boyunca.

b) Amplifikasyon reaksiyonu: Tasarlanan primerlerin Tm değerine göre sıcaklık ayarlanır.

C) Floresan sinyal edinimi: Lütfen deneysel prosedürü cihaz kılavuzunda belirtilen gereksinimlere göre ayarlayın.

3. Başvuru teçhizat

Rox ile ekipman：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Hızlı, StepOne™, StepOne Plus™

Düşük Rox'lu Ekipmanlar：ABI 7500, 7500 Hızlı, ViiA™7, QuantStudio™ 3 ve 5, QuantStudio™ 6,7,12k Esnek

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

Rox'suz ekipman：

Biyo-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Ependorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Roche Uygulamalı Bilim LightCycler® 480, LightCycler® 2.0, Lightcycler® 96

Termo Bilimsel PikoReal Döngüleyici; Sefeid AkıllıBisiklet®; Aydınlanma Eko qPCR

Notlar

Sağlığınızı ve güvenliğinizi sağlamak için lütfen laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi gerekli KKD'yi giyin.！

Lütfen RNasefree sarf malzemelerini kullanın için deney.

Duyarlılık testi

-20°C'de 18 ay boyunca saklanan 13650 (deney grubu) ve raf ömrü içindekiler (kontrol grubu) aynı anda, ORF genini ve N genini hedef alan pseudovirüs SARS-CoV-2'nin gradyan seyreltmesi (500 kopya/ml, 250 kopya/ml) için test edildi. Her konsantrasyon için sekiz tekrar kuyusu test edildi ve %100 tespit oranı sağlandı. Ayrıca, amplifikasyon eğrisi tepe şekillerinde ve Ct değerlerinde önemli bir fark yoktu.

Gerçek zamanlı kararlılık testi

18 ay boyunca -20°C'de saklanan 13650 ve raf ömrü içindekiler. Her iki grup da aynı anda 20 tekrar kuyusu ile 1000 kopya/ml konsantrasyonda SARS-CoV-2 pseudovirus ORF geni ve N geni için test edildi. Her ikisi için de tespit oranı %100'dü ve amplifikasyon eğrilerinin şekli veya Ct değerlerinde önemli bir fark yoktu.

Şekil 1. REditör: 13650 raf ömrü içinde；mavi：13650 -20°C'de 18 ay saklandı。

Tekrarlanan dondurma-çözme döngülerinden sonra istikrarlı performans

13650 reaktifini, normalde -20°C'de saklanan reaktiflerle birlikte kuru buz kullanılarak 30 ve 50 dondurma-çözme döngüsüne tabi tutarak ve aynı anda SARS-CoV-2 psödovirüs ORF geni için test yaparak elde edilen sonuçlar, 13650 reaktifinin performansının 50 dondurma-çözme döngüsünden sonra etkilenmediğini gösterdi.

Şekil 2. Kırmızı: 13650, -20°C'de normal olarak saklandı; Mor：13650 ila 30 donma-çözülme döngüsü；Yeşil：13650 ila 50 dondurma-çözülme döngüsü.

Standart ve Hızlı Protokollerle Uyumlu

13650ES kullanılarak, SARS-CoV-2 pseudovirüsünün ORF geni ve N geni, hem standart hem de hızlı protokollerle aynı reaksiyon sistemi altında tespit edildi. Sonuçlar, 4-pleks sisteminde, iki protokol arasında amplifikasyon eğrisi tepe şekilleri ve Ct değerlerinde bir fark olmadığını gösterdi.

Belgeler:

Kılavuzlar