The Manyetik Kalan DNA Örnek Hazırlık Seti dır uygun için , ön işlem ile ilgili kalan DNA içinde çeşitli biyolojik Örneklerde benzersiz manyetik boncuklar ve dikkatli bir şekilde kullanılarak, örneklerdeki konak hücre kalıntı DNA'sının eser miktarlarının ayrılması ve saflaştırılması en üst düzeye çıkarılabilir. optimize edilmiş tampon sistemi.

Manyetik Kalıntı DNA Örnek Hazırlama Kiti çeşitli konak hücre kalıntı DNA'sı ile kullanılabilir CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit dahil olmak üzere tespit kitleri (Cat#41301ES), HEK293 Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (Cat#41302ES), Vero Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (Kat#41303ES), ve E.coli Konak Hücre DNA Kalıntısı Tespit Kiti (Kat#41304ES).

Ürün Bileşenleri

Nakliye ve Depolama

1. Bölüm I, 1 yıl boyunca 4°C'de bir buz torbasıyla birlikte gönderilir veya Uzun süreli depolama için -20°C.

2. II. kısım oda sıcaklığında sevk edilir ve oda sıcaklığında 1 yıl saklanır.

3. Bölüm III kuru buzda sevk edilir ve -20°C'de saklanır 1 yıl boyunca.

4. Ürünü teslim aldıktan sonra, Bölüm I, Bölüm II ve Bölüm III'ün üç bileşeninin eksiksiz olup olmadığını kontrol edin ve bunları derhal ilgili depolama sıcaklığında saklayın.

Dikkat Edilmesi Gerekenler

1. Lütfen kullanmadan önce kullanım kılavuzunu dikkatlice okuyun ve kullanım kılavuzuna sıkı sıkıya bağlı kalın. Numune işleme işleminin temiz bir tezgahta veya biyolojik güvenlik kabininde yapılması önerilir.

2. Oda sıcaklığında saklanan çözeltide (özellikle oda sıcaklığının düşük olduğu kış aylarında) çökelme veya bulanıklık olup olmadığına dikkat edin, kullanım etkisini etkilememek için çözelti berraklaşana kadar 37°C'de su banyosu yapabilirsiniz.

3. Elüsyon sırasında kalıntı manyetik boncuklar kalabilir, bu nedenle numune alırken manyetik boncukları aspire etmekten kaçının.

4. Bu ürünü kullanırken çapraz kontaminasyonu önlemek için lütfen uçları sık sık değiştirin.

5. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için, bu ürünle çalışırken lütfen laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven gibi kişisel koruyucu ekipman (KKE) kullanın.

6. Bu ürün SADECE araştırma amaçlıdır!

Ön Hazırlık

1. Kendi sağladığınız ekipmanlar: girdap çalkalayıcı, su banyosu veya metal banyosu, santrifüj, manyetik ayırma rafı, Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A otomatik nükleik asit çıkarıcı veya diğer marka tam otomatik nükleik asit çıkarıcı.

2. Kendi sağladığınız sarf malzemeleri: 10μL-1000μL düşük adsorpsiyonlu filtre uçları, 1,5 mL düşük adsorpsiyonlu santrifüj tüpleri, PCR tüpleri veya 96-kuyulu plakalar ve bunlara karşılık gelen tüp kapakları veya membranlar.

3. Kendi hazırladığınız reaktifler: mutlak etanol (analitik sınıf), 1×PBS tamponu (pH 7,4, Mg ve Ca iyonlarından arındırılmış), ultra saf su.

4. İlk kullanımda, Yıkama Çözeltisi A* ve Yıkama Çözeltisi B* şişelerine etikette veya kullanım kılavuzunda belirtilen hacimde susuz etanol ekleyin, kullanmadan önce iyice karıştırın ve iyice işaretleyin. Şişedeki etanol seviyesini korumak için kullandıktan sonra şişeyi sıkıca kapatın.

Manuel kalıntı DNA ekstraksiyonu

1. Örnek işleme

1.1 Eğer numune aşı gibi nispeten yüksek DNA içeriğine sahipse, lütfen numuneyi 1×PBS tamponuyla (pH 7,5) uygun bir oranda seyreltin.4, Mg ve Ca iyonlarından arındırılmış) ve sonra çıkarın (numunenin seyreltilmesi, tespit değerinin standart eğrinin doğrusal aralığında olmasını sağlamak ve daha sonra tespitin doğruluğunu garantilemek içindir. ve genellikle 100 kat seyreltme düşünülebilir).

1.2 Test edilecek numune kuru bir tozdur, seyreltin 10 mg/mL veya 100 mg/mL ile ultra saf su Kullanmadan önce.

1.3 Numunenin matrisi karmaşık ise uygun seyreltmeyi belirlemek için standart bir ekleme ve geri kazanım deneyi yapılmalıdır.

2. 1,5 mL tüpe 100 μL numune ekleyin, Daha sonra 100 μL lizis tamponu, 10 μL proteinase K ekleyin, karıştırın ve 10 saniye karıştırın.

[Notlar]: Protein örneğinin konsantrasyonu 0-100 mg/mL ise 10 μL proteinase K ekleyin ve protein örneğinin konsantrasyonu 100-200 mg/mL ise 20 μL proteinase K ekleyin.

3. 60°C'de inkübe edin 20 dakika boyunca.

4. Sonra ekleyin 400 μL Bağlayıcı çözeltiden 9 μL glikojen ve 6 μL Poli A potasyum tuzu eklenip iyice karıştırılır.

5. 20 μL manyetik boncuk ekleyin, vorteksleyin ve iyice karıştırın ve 10 dakika bekletin. Lütfen vorteksleyin ve 10 saniye karıştırın her 3 dakikada bir.

[Notlar]: Manyetik boncukların iyice yeniden süspanse edildiğinden emin olmak için kullanımdan önce vortekslenmesi gerekir. Numuneleri bir seferde 4-5 kez ekledikten sonra tekrar karıştırmanız önerilir.

7. Çözeltiyi aşağı indirmek için kısa bir süre santrifüjleyin ve santrifüj tüpünü 1-2 dakika manyetik rafa yerleştirin. Manyetik boncuklar tamamen emildikten sonra sıvıyı dikkatlice çıkarın.

8. 500 μL Yıkama Çözeltisi A ekleyin (Kullanmadan önce mutlak etanol eklenip eklenmediğini kontrol edin), manyetik boncukların dağıldığından ve santrifüj tüpünün duvarında manyetik boncukların birikmediğinden emin olmak için çalkalayın veya karıştırın.

9. Kısa bir süre santrifüjleyin ve santrifüj tüpünü 1-2 dakika manyetik bir rafa yerleştirin. Manyetik boncuklar tamamen emildikten sonra sıvıyı dikkatlice çıkarın.

10. 500 μL Yıkama Çözeltisi B ekleyin (Kullanmadan önce mutlak etanol eklenip eklenmediğini kontrol ediniz), Manyetik boncukların dağıldığından ve santrifüj tüpünün duvarında manyetik boncukların birikmediğinden emin olmak için çalkalayın veya karıştırın.

11. Kısa bir süre santrifüjleyin ve santrifüj tüpünü 1-2 dakika manyetik bir rafa yerleştirin. Manyetik boncuklar tamamen emildikten sonra sıvıyı dikkatlice çıkarın.

12. Kalan sıvının mümkün olduğunca uzaklaştırılmasını sağlamak için tüpü 10 saniye santrifüj edin. Hızlıca manyetik bir rafa yerleştirin ve kalan sıvıyı aspire etmek için 10 μL'lik bir pipet kullanın.

13. Tüpün kapağını açın ve oda sıcaklığında 3 dakika bekletin. etanol tamamen buharlaşana kadar. Manyetik boncukların yüzeyinde herhangi bir yansıma veya çatlak oluşmaması etanolün tamamen buharlaştığını gösterir.

14. Tüpü manyetik standdan çıkarın, 65°C'de önceden ısıtılmış eluattan 50-100 μL ekleyin, çalkalayın ve iyice karıştırın. Sonra kısa bir süre santrifüj edin, 65°C'de 5 dakika inkübe edin, her 2-3 dakikada bir çalkalayın ve karıştırın.

15. Tekrar kısa bir santrifüj yapın, santrifüj tüpünü 2 dakika boyunca manyetik bir standa koyun. Manyetik boncuklar tamamen adsorbe olduktan sonra, DNA solüsyonunu dikkatlice yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve -20°C'de veya uzun süreli saklama için -80°C'de saklayın.