Konkanavalin A (ConA) boncukları, Konkanavalin A ile kovalent olarak bağlanmış süperparamagnetik polimer mikrokürelerdir (tahıl bitkilerinin tohumlarından izole edilen bir bitki mannozu/glikoz bağlayıcı lektin) yüzeylerinde. Bu boncuklar birkaç tane sahip olmak monodispersite ve güçlü manyetik reaktivite gibi dikkate değer özellikler. Ca²⁺ ve Mg²⁺ iyonları mevcut olduğunda, ConA manyetik boncuklar, ConA globulin A ile terminal α-D-mannoz ve α-D-glikoz grupları arasındaki afiniteyi kullanarak polisakkaritler, glikoproteinler ve glikolipidler gibi çeşitli biyomolekülleri etkili ve hızlı bir şekilde ayırabilir ve saflaştırabilir.

ConA manyetik boncuklar, hücreleri ayırmak veya sabitlemek için kullanışlı bir yöntem sunarak, sonraki yıkama adımları sırasında minimum hücre kaybını garanti eder. Ek olarak, çekirdeklerin toplanması ve sabitlenmesi için kullanılabilirler. Dahası, bu boncuklar, ChIP-seq deneylerinde kullanılan devrim niteliğindeki yaklaşımlar olan CUT & Run ve CUT & Tag gibi yenilikçi tekniklerde kullanışlılık bulur.

Özetle, ConA manyetik boncuklar biyomoleküllerin etkili bir şekilde saflaştırılması, hücrelerin uygun şekilde ayrılması ve sabitlenmesi, çekirdeklerin toplanması ve son teknoloji deneysel tekniklerde uygulama için güçlü araçlardır.

Özellikler

Özellikler

Şekiller ve Tablolar

Tablo 1. Yeasen ConA boncukları yüksek yakalama oranına sahiptir. Mikrokürelere oranla kullanılan Concanavalin A (ConA) miktarının, CUT&Tag deneylerinde hücre bağlanmasından sonra manyetik boncukların aşırı kümelenmesini önlerken maksimum bağlanma kapasitesini sağladığı doğrulanmıştır. Örneğin, 10 μL ConA kaplı boncuk kullanmak, %98'i aşan bir bağlanma verimliliğiyle E7 seviyelerine eşdeğer miktarda hücreyi bağlayabilir.

Şekil 1. Yeasen ConA boncukları yüksek dağılım gösterir. Boncuk etiketleme sürecinde, partiden partiye değişikliklerden etkilenmeden verimli bir kapatma sağlamak için biyolojik olmayan bir sızdırmazlık maddesi seçilmiştir. Bu, manyetik boncukların mükemmel bir şekilde kapatılmasını garanti eder ve ConA kaplı boncukların depolanması sırasında yüksek monodispersitelerini korur, bu da sonraki deneylerde karbonhidrat moleküllerine verimli bir şekilde bağlanmaları için faydalıdır.

Şekil 2. Yeasen Con A Boncukları kullanılarak CUT&Tag kromatin sinyal dağılımı.

Depolamak

Bu ürün 2~8℃'de 2 yıl saklanmalıdır.

Talimatlar

Aşağıdaki işlemler glikoproteinlerin saflaştırılmasını veya hücrelerin izolasyonunu örnek olarak alır: KES&ETİKETLE deneyler Protokol için Yeasen Cat# 12598ES'ye bakın.

1. Tamponların hazırlanması

1) Müşteri tarafından sağlanan

1. Dahil Olmayan Gerekli Malzemeler: Manyetik Stand, Eppendorf tüpleri, PCR tüpleri, manyetik standlar, termosiklerler vesaire.
2. Dengeyi sağlayın Boncuklar En az 30 dakika oda sıcaklığında bekletin.Boncukları vorteksleyerek veya şişeyi çalkalayarak iyice süspanse edin.

1. Örnek işleme（ memeli hücrelerini örnek olarak alalım ）

1. Memeli hücrelerini hazırlayın (1,0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ hücreler), santrifüj (4℃，600×g, 3~5 dk) ve dikkatlice atmak Üstteki sıvı.
2. 140 μL Bağlayıcı tampon ekleyin, iyice karıştırın ve hücreleri tekrar süspanse edin, santrifüj edin ve toplayın (4℃, 600×g, 3~5 dk), dikkatlice atmak Üstteki sıvı.
3. 90 μL Bağlayıcı tampon ekleyin, iyice karıştırın ve hücreleri tekrar süspanse edin.
   Dikkat: Sıkıca yapışmış memeli hücreleri, tripsin gibi bir enzim kullanılarak kısmi sindirimle elde edilebilir. Hayvan dokuları, bitki hücreleri veya mantar hücreleri için, dağılmış hücreler veya protoplastlar elde etmek genellikle belirli özelliklerine göre uyarlanmış özel işlemler gerektirir.

1. ConA boncuklarını hazırlayın

1. ConA boncuklarını tamamen süspansiyon haline gelene kadar yavaşça pipetleyin, 10 Boncuk süspansiyonunun μL'si yeni bir 200 μL santrifüj tüpüne aktarılır.
2. 40 μL Bağlayıcı Tamponu ekleyin, iyice karıştırın ve manyetik stand üzerinde 1 dakika bekletin ve manyetik boncuklar santrifüj tüpünün yan duvarına adsorbe olduktan sonra üstteki sıvıyı atın.
3. 10 μL Bağlayıcı tampon ekleyin, iyice karıştırın ve ConA boncuklarını tekrar süspanse edin.

1. Örnek bağlama

1. Hazırlanan hücre örneğini önceden işlenmiş boncuklara ekleyin, yeniden süspanse edilmiş boncukları nazikçe pipetleyin, ardından ters çevrilmiş bir karıştırıcıda (oda sıcaklığında 30 dakika veya 4℃'de bir gece) inkübe edin.
2. 1 dakika manyetik stand üzerinde bekletilir, manyetik boncukların santrifüj tüpünün yan duvarına tutunması beklenir, üstteki sıvı dikkatlice dökülür.
3. Eklemek Hücre-ConA boncuk kompleksine 500 μL Elüsyon tamponu ve Yavaşça pipetleyin boncukları tekrar askıya alın, sonra 1 dakika manyetik stand üzerinde bekletilir, manyetik boncukların santrifüj tüpünün yan duvarına tutunması beklenir, üstteki sıvı dikkatlice dökülür.
4. 3. adımı üç veya dört kez daha tekrarlayın.

1. Elüsyon

1. Glikoproteinler için 50~250 μL Elüsyon tamponu ekleyin, yeniden süspanse edilmiş boncukları nazikçe pipetleyin, sonra ters çevrilmiş bir karıştırıcıda (oda sıcaklığında 10~30 dakika) inkübe edin. Ters çevrilmiş karışımdan sonra, 1 dakika manyetik bir stand üzerinde bekletin, SDS-PAGE veya Western blot'a geçmek için süpernatantı yeni bir 1,5 mL tüpe toplayın.
2. Hücre için elüsyona gerek yoktur.

Notlar

1. Dengeyi sağlayın KonA oda sıcaklığında boncuklar Kullanmadan önce.
2. Donmaktan kaçının, aksi takdirde boncuk malzemesi bozulur veya aktivitesi kaybolur.
3. ConA'nın aktif olabilmesi için Ca2+ ve Mn2+ iyonlarının varlığına ihtiyaç vardır, bu nedenle deney sırasında EDTA veya diğer metal iyon şelatlayıcıları içeren reaktiflerden kaçınılmalıdır.
4. Hücrelerle inkübe edildiğinde ConA boncukları kümeleşebilir; bu normaldir ve manyetik boncukların normal kullanımını etkilemez.
5. Bu ürün yalnızca araştırma amaçlıdır.
6. Lütfen güvenliğiniz için laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldivenlerle çalışın.

Manuel