Geliştirilmiş ECL Kemilüminesan Substrat Kiti, doğrudan veya dolaylı olarak yaban turpu peroksidazı (HRP) ile etiketlenen antikorları ve ilişkili antijenleri tespit etmek için tasarlanmıştır. Geliştirilmiş ECL Kemilüminesan Substrat Kitinin prensibi, proteinlerin veya nükleik asitlerin elektroforezden sonra basılı membrana aktarılması ve membrandaki hedef proteinlerin HRP ile etiketlenen birincil antikor ve ikincil antikor tarafından bağlanması veya membrandaki nükleik asitlerin HRP ile etiketlenen problar tarafından doğrudan veya dolaylı olarak bağlanmasıdır. Membran yıkandıktan sonra, ürün tarafından hazırlanan ECL çalışma solüsyonu, membranı oda sıcaklığında birkaç dakika inkübe etmek için kullanıldı. Baskılı membran, plastik sargıyla sarıldı ve X-ışını pozlama kasetine sabitlendi. Daha sonra X-ışını filmi karanlık bir odada membrana bastırılır ve birkaç saniyeden birkaç saate kadar maruz bırakılır. Geliştirme ve sabitlemeden sonra, protein veya nükleik asit bantları X-ışını filminde net bir şekilde görüntülenebilir.

Bu kit, yeni bir oksidan tanıtırken pozlama arka planını azaltan benzersiz bir lüminesans substrat sistemine sahiptir ve kitin stabilitesini büyük ölçüde iyileştirerek oda sıcaklığında bir yıla kadar stabil kalmasını sağlar. X-ışınına ek olarak, floresan CCD taraması doğrudan esas olarak WB tespiti ve kemilüminesans bağışıklık tespit sistemi için de kullanılabilir.

Özellikler

Yüksek hassasiyet ve yüksek sinyal-gürültü oranı ile orta seviye antijenleri tespit edebilir.

Hızlı ve parlak bir şekilde parlayan basılı film bandı, floresan lamba altında gözlemlenebilir.

Özellikle hedef bolluğunun yüksek olduğu konvansiyonel protein örneklerinin tespiti için uygundur.

Yeni oksidan, oda sıcaklığında bir yıla kadar stabildir.

Uygulamalar

Kemilüminesans ELISA

Batı lekesi

Nokta Blot-DNA/RNA

Southern blot-DNA

Northern blot-RNA

Özellikler

Bileşenler

Nakliye ve Depolama

Ürün oda sıcaklığında gönderilir ve oda sıcaklığında bir yıl saklanabilir. Uzun süre kullanılmayacaksa 2℃~8℃ geçerlilik süresini uzatmak.

Notlar: 36222-A ışıktan uzakta muhafaza edilmelidir!

Talimatlar (örneğin röntgen filmi)

1.Rutin elektroforez, transfer membran, HRP ile işaretli antikor veya HRP ile işaretli nükleik asit probu inkübasyonu ve membran yıkama.

Notlar: ECL lüminesan solüsyonu HRP'nin renk substratı olduğundan, tespit sistemi HRP enzim etiketli antikor veya nükleik asit probuna dayalı olmalıdır.

2. Membranın son kez yıkanması sırasında, lüminesan çalışma solüsyonu taze olarak hazırlandı (100-200 μL lüminesan çalışma solüsyonu/cm2 membran): Aynı hacimde Reaktif A ve B alın, daha sonra kullanmak üzere iyice karıştırın.

Notlar: Reaktif A ve Reaktif B'yi alın, farklı uçlar kullanmalısınız. Çalışma sıvısını hemen kullanmanız önerilir. Oda sıcaklığında birkaç saat sonra hala kullanılabilir, ancak hassasiyet biraz azalır.

3. Membranı çıkarmak için düz cımbız kullanın, losyonu boşaltmak için filtre kağıdına koyun, membranı tamamen kurutmayın. Membranı tamamen lüminesan çalışma solüsyonuna daldırın, lüminesan çalışma sıvısıyla yeterli temas sağlayın. Oda sıcaklığında 1-2 dakika inkübe edin ve hemen tablet maruziyetine hazırlayın.

4.Membranları cımbızla alın ve lüminesan çalışma sıvısını boşaltmak için filtre kağıdının üzerine koyun. Ancak lüminesan sıvıyı yıkamayın.

5. X-ışını filmi obscurasının iç yüzeyine membrandan daha büyük bir plastik ambalaj parçası koyun. Baskılı membranı plastik ambalaja takın, plastik ambalajı baskılı membranın etrafına tamamen katlayın ve gaz kabarcığını çıkarın ve katlayın, fazla plastik ambalajın kenarını kesebilirsiniz. Fazla ışıklı çalışma sıvısını emmek için filtre kağıdı kullanın. Baskılı membranı kaplayan plastik ambalajı, protein bandı yukarı bakacak şekilde bantla obscura içinde sabitleyin.

6. Karanlık odadan bir parça X-ışını filmi alındı ​​ve sarılı membrana yerleştirildi. Film preslendi ve 30 saniye - 2 dakika pozlandı. Daha sonra film geliştirildi ve sabitlendi.

Not: Pozlama süresi, pozlama yoğunluğuna göre ayarlanmalıdır.Eğer arka plan çok yüksekse, aynı anda iki röntgen filmi kullanın.

Diğer maruz kalma yöntemleri

CCD fotoğrafçılığının kullanımı durumunda: membran çalışma sıvısına yerleştirilebilir, talimatlara göre önyüklemeden sonra filmi çıkarın, fotoğraf çekin. Ayrıca, makinenin ölçüm parametreleri sinyal-gürültü oranını iyileştirmek için duruma göre ayarlanabilir.

Notlar

1. Membran transferinde, sızdırmazlıkta ve inkübasyonda kabarcıklardan kaçınılmalıdır. Ayrıca, eldiven giymek membranda parmak izi kalmasını önleyecek ve temiz kalmasını sağlayacaktır.

2. Uzun süreli pozlama veya aşırı protein arka planı derinleştirecek ve bant gücü değişiminin doğrusal ilişkisini kaybetmesine neden olacaktır. Az pozlama bantları bulanıklaştıracaktır.

3. Bazı plastik ambalajlar, baskılı membranı sararken floresansı söndürebilir. Yüksek kaliteli plastik ambalaj seçilmelidir.

4. Aynı yıkama membranı kutusuna birden fazla membran yerleştirmekten kaçınınız, çünkü karşılıklı adsorpsiyon veya sürtünme derin bir arka plana neden olabilir.

5. Filmdeki bantların pozisyonu ve boyutu, görünür önceden boyanmış protein belirteçleri ve floresan-otoradyografi pozlama etiketleri kullanılarak doğru bir şekilde belirlenebilir.

6. Biyotin-avidin sistemini kullanın ve arka planın çok yüksek olmasına neden olabilecek süt kapatma kullanmaktan kaçının.

7. Metal oksit parçacıkları membranda granüler noktalara neden olabilir. Paslı makas ve cımbız kullanmaktan kaçının. Plastik düz cımbız kullanın.

8. Sodyum azid (NaN3) HRP aktivitesini inhibe edebileceğinden, HRP işaretli prob veya antikorun geri kazanımında NaN3 kullanımından kaçınılmalı, gerekirse %0,01’den fazla olmamalıdır.

9. Bu ürünün, yaygın kimyasal işlemlere göre özel bir toksisitesi yoktur.

10. Sağlığınızı ve güvenliğinizi sağlamak için lütfen laboratuvar önlüğü ve eldiven gibi gerekli KKD'yi giyin.！

11. Sadece araştırma amaçlıdır!

Belgeler:

Güvenlik Bilgi Formu

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Kılavuzlar

36222_Manual_HB221212_TR

Alıntılar ve Referanslar:

[1] He X, Li J, Zhou G, ve diğerleri. İnhibitör internöronlarda sinaptik plastisite ile hipokampal ritimlerin ve hafızanın kapılanması. Nöron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] Wang X, Zhang S, Jin D, ve diğerleri. μ-opioid reseptör agonisti, MOR/AKT/Slug yolu aracılığıyla mesane kanserinde dolaşımdaki tümör hücresi oluşumunu kolaylaştırır: randomize kontrollü denemeyi de içeren kapsamlı bir çalışma.Kanser Topluluğu (Londra). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. KAE ile birleştirilmiş CaCO3 nanopartikülleri, kalsiyum aşırı yüklenmesi kanser tedavisini mümkün kılar. Biyomalzemeler. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[4] Xu Z, Xu J, Sun S, ve diğerleri. Mecheliolide, hepatosellüler karsinomda ROS aracılı ERS kaynaklı immünojenik hücre ölümünü ortaya çıkarır. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, ve diğerleri. Eritrositlerde arsenik tutulumu ve aşırı eritrofagositoz, bozulmuş redoks homeostazı nedeniyle düşük selenyum durumuyla ilişkilidir. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, ve diğerleri. Mikobakteriyel enfeksiyonun ekzosomal ncRNA profillemesi, miRNA-185-5p'yi tüberküloz için yeni bir biyobelirteç olarak tanımladı. Kısa Biyoinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Hu P, Li H, Sun W, ve diğerleri. Kolesterol ile ilişkili lizozomal bozukluk hematolojik malignitenin hücre ölümünü tetikler: LW-218'in sitotoksik etkileri üzerine dinamik analiz. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Wang X, Ni J, You Y, ve diğerleri. SNX10 aracılı LPS algılama, bir kaspaz-5 bağımlı sinyalleme kaskadı yoluyla bağırsak bariyeri disfonksiyonuna neden olur. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] Jiang K, Chen H, Fang Y ve diğerleri. Ekzomal ANGPTL1, Kupffer hücre salgılama düzenini düzenleyerek ve MMP9 kaynaklı vasküler sızıntıyı engelleyerek kolorektal kanser karaciğer metastazını zayıflatır. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Yayımlanma tarihi 2021 Ocak 7. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] Zhang S, Yang Z, Bao W ve diğerleri. SNX10 (nexin 10'u ayırma), SRC'nin otofajik bozunmasını kontrol ederek kolorektal kanser başlangıcını ve ilerlemesini engeller. Otofaji. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Fusobacterium nucleatum'un ekstraselüler vezikülleri, RIPK1 aracılı hücre ölüm yolunu hedef alarak bağırsak bariyerini tehlikeye atar. Bağırsak Mikropları. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)