Doğal Protein A, Staphylococcus aureus'ta bulunan bir hücre duvarı yüzey proteinidir, izole edilen protein G'ye benzerdir. cins G veya C Streptokok, bağla en memeli IgG ile etkileşimli öncelikle ile , FC'nin bölge immünoglobulin (Ig) proteinleri, ancak bağlanma özgüllükleri bakımından farklılık gösterir. Çeşitli antikorların (monoklonal antikor ve poliklonal antikor) ayrılması ve saflaştırılması için kullanılabilir. Protein A ve Protein G, farklı immünoglobulin alt sınıflarına bağlanma özellikleri bakımından farklılık gösterir (ayrıntılar için Ek 1'e bakın).
Bu ürün, yalnızca Ig afinitesi özelliklerini korumakla kalmayıp aynı zamanda doğal proteinin kendisinin majör olmayan bağlanma alanını da kaldırarak spesifik olmayan bağlanmayı azaltan genetiği değiştirilmiş protein A kullanır. Matris olarak yüksek oranda çapraz bağlı agaroz jeli ve ligand olarak modifiye alkali dirençli rekombinant protein A olan SuRi rProtein A Agaroz Reçinesi yüksek fizikokimyasal kararlılığa sahiptir. Kullanımı kolay ve yaygın olarak kullanılan bu ürünle, tek adımlı afinite kromatografisi ile asit, serum ve kültür ortamı örneklerinden yüksek saflıkta antikor elde edilebilir.

Bileşenler

Özellikler

Nakliye Ve Depolamak

Ürünler buz aküsü ile gönderilmektedir.   2~8℃'de stabil bir şekilde saklanabilir 5 yıl boyunca.

Talimatlar

1. Tampon hazırlama

Aşağıdakilerin yapılması önerilir: Tamponlar kullanımdan önce 0,22 μm veya 0,45 μm filtre membranı ile filtrelenmelidir. Denge/bağlama/yıkama tamponu: 0,15 M NaCl, 20 mM Na2 HPO4, pH 7.0

Elüsyon tamponu: 0,1 M glisin, pH 3,0

Nötralize edici tampon: 1 MTris-HCl, pH 8.5

2. Örnek hazırlama

Emin olmak O , örnek çözüm sahip olmak , uygun iyonik kuvvet Ve pH önce yükleniyor , kolon, herhangi biri ile serum örneğini, asitleri veya hücre kültürü solüsyonunu bir bağlama/yıkama tamponuyla seyrelterek veya örneği bir bağlama/yıkama tamponu.

3. Sütun Paketleme

SuRi rProtein'i yükleyin A Agaroz Reçinesini uygun bir kromatografik kolona dökün, kabarcık oluşmamasına dikkat edin.

4. Örnek saflaştırma

1) Denge: Kromatografik kolon dır dengeli bir şekilde bağlayıcı Tampon 5'in kez , kolon hacim, Bu yüzden O ambalaj aynı tampon sistemindedir Hedef proteini etkiler ve proteini koruma rolünü üstlenir.

2) Örnek yükleniyor: The örnek oldu yüklendi ile , iyi dengelenmiş rProtein A Agaroz Reçine ile emin olmak tam dolu temas etmek hedef protein ve reçine arasında iyileşmeyi iyileştirin hedef proteinin oranını belirleyin ve efluantı toplayın test edilmek.

3) Yıkama: Su ile yıkayın 10-15 katı kolon hacim of'un yıkama Tampon, kaldırmak , kirlilik protein meğer ki özel olarak adsorbe edilmiş, yıkama solüsyonunu toplayın.

4) Elüsyon: Elüsyon ile 5-10 kez kolon hacim of'un elüsyon Tampon, TOPLAMAK eluent, O dır, , hedef protein bileşen.

5) CIP temizliği Ve koruma: Genel olarak kullanmak 0,1-0,5 M NaOH 3CV'den büyük ve , temas etmek zaman dır 15 dk; Daha sonra Nötr olana kadar 5CV dengeleme solüsyonu ile durulayın. Son olarak, bu %20 ile dengelenmiş etanol 5 katının sütunu hacim, Ve Daha sonra saklandı  içinde %20  etanol  ile ilgili ,  Aynı  hacim  de  4°C  ile  önlemek  ,  paketleme  itibaren  yapı Bakterilerle kirlenmiş.

5. SDS-PAGE tespiti

The örnekler elde edildi içinde , arınma işlem (içermek orijinal örnekler, atık su bileşenler, yıkama Ve (elüsyon bileşenleri vb.) saflaştırma etkisini belirlemek için SDS-PAGE ile tespit edildi.

Notlar

1. Ürünü buzdolabına koymayınız.
2. rProteinAAgaroz Reçinesi kullanılmadan önce birkaç kez tamamen ters çevrilmeli, böylece agaroz reçinesi eşit şekilde karışmalıdır.
3. Tüm işlemler sırasında numunenin 4°C’de veya buz üzerinde çalıştırılması gerekmektedir.
4. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen operasyon sırasında laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.
5. Sadece araştırma amaçlıdır.

Ekli tablo 1: Bağlanma yeteneğinin özetif proteinleri A ve G'den Ig'ye farklı türler

SuRi rProtein Bir Agaroz Reçine