UltraNuclease, aynı zamanda kısıtlayıcı olmayan bir endonükleaz, geniş spektrumlu nükleaz olarak da bilinir, nükleik asitlerdeki herhangi bir nükleotid arasındaki iç fosfodiester bağlarını hidrolize ederek 2-5 baz uzunluğunda 5'-monofosfat oligonükleotidler üreten Serratia Marcescen'den türetilen spesifik olmayan bir endonükleazdır. Çok geniş bir koşul aralığında (6 M Üre, 0,1 M Guanidin HCl, %0,4 Triton X-100, %0,1 SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF) çeşitli formlardaki DNA ve RNA'yı parçalayabilir ve biyolojik ürünlerden nükleik asitleri uzaklaştırmak için yaygın olarak kullanılır. UltraNuclease daha sonra ilgili yöntemlerle de uzaklaştırılabilir.

Bu kit, denatüre ve denatüre olmayan UltraNuclease kalıntılarını tespit etmek için çift antikorlu sandviç enzim bağlı immünosorbent testi (sandviç ELISA) prensibini kullanır. İlk olarak, mikro plakayı katı faz antikor oluşturmak için bir anti-UltraNuclease tavşan poliklonal antikoru ile kaplayın. İkinci olarak, katı faz antikor mikro plakasına UltraNuclease standardı ve test örneği ekleyin, ardından biyotin etiketli Anti-UltraNuclease poliklonal antikor ekleyin ve son olarak antikor + antijen + antikor-Biotin + SA-HRP kompleksi oluşturmak için yaban turpu peroksidaz etiketli streptavidin (SA-HRP) ekleyin. Daha sonra, kompleksi yıkadıktan sonra renk reaksiyonunu gözlemlemek için komplekse TMB substratı eklendi. TMB, HRP enziminin katalizinde maviye dönüşür ve son olarak asit varlığında sarıya dönüşür ve renk tonu, numunedeki UltraNuclease miktarı ile pozitif olarak ilişkilidir.

Bu kitin tespit kantifikasyon aralığı 0,047-3 ng/mL'dir; alt tespit limiti ise 23,5 pg/mL'dir.

Özellik

• Yüksek hassasiyet: İşlem sırasında ve son biyolojik örneklerde 23 pg/ml kadar düşük UltraNuclease kalıntılarını tespit eder.
• Doğruluk sağlar: UltraNuclease kalıntıları %80-110 oranında geri kazanımla doğru bir şekilde tespit edilebilir.
• Özgüllük: YEASEN UltraNuclease ile birlikte kullanılabilir ve kalıntıları doğru bir şekilde tespit edebilir.
• Stabil: Partiler arası fark düşüktür, kit özelliği 6 gün boyunca 37℃'nin altında etkilenmez.
• Kolay sinyal toplama: Biotin-Streptavidin sistemini kullanarak sinyal stabil bir şekilde büyütülebilir.
• Tam set: Set içerisinde tüm temel bileşenler mevcuttur, kullanımı uygun maliyetlidir.

Başvuru

• Biyolojik ürünlerde kalıntı UltraNükleaz testi

Şartname

Bileşenler

Nakliye ve Depolama

UltraNuclease ELISA kiti bir buz torbasıyla gönderilir ve 2°C ~8°C'de saklanabilir. Açılmamış ürün bir yıl geçerlidir. Reaktif açıldıktan sonra, altı ay geçerlidir. Bu ürünü asla dondurmayın.

Hazırlanan reaktiflerin saklanması:

1. Seyreltilmiş yıkama tamponu ve seyreltme tamponu 2°C ~8°C'de 1 hafta saklanabilir

2. Standart 36701-C sıvıdır ve 2°C ~8°C'de 1 yıl boyunca saklanır

3. Hazırlanan tespit antikoru ve durdurma tamponu 2°C ~8°C'de 1 ay saklanabilir.

Rakamlar

• Özgüllük Gösterimi

Şekil 1. UltraNuclease ELISA kitinin özgüllüğü yukarıdaki şekilde gösterilmiştir.

Kitteki antikorlarla spesifik olmayan reaksiyon için 8 taklit örnek tahmin edildi. 8 örnek ile negatif örnek arasında anlamlı bir fark yoktu. （*: Negatif örnekten anlamlı fark；NS: Negatif örnekten anlamlı fark yok）

• Hassas Ekran

A)

B)

Şekil 2. UCF.ME™ UltraNuclease ELISA'nın hassasiyeti yukarıdaki gibi test edildi planı.

Standart eğrideki her konsantrasyonda 6 kopya test edildi ve tüm CV% değerleri %5'ten düşüktü (Şekil 2A). 3 analist UCF.ME™ UltraNuclease ELISA deneyini yürüttü ve CV% değerleri %15'ten düşüktü (Şekil 2B).

• Doğruluk Doğrulaması

A)

B)

Şekil 3. UCF.ME™'nin doğruluğu UltraNuclease ELISA Aşağıdaki şemaya göre denendi.

UltraNuclease, 1,5 ng/mL'lik son bir spike konsantrasyonu ile bağımsız olarak 5 μg/mL hücre lizis solüsyonlarına (HEK293, E.coli, CHO ve Vero) eklendi. Farklı hücre örneklerindeki doğruluk, diğer satıcılardan daha iyi olduğunu gösterdi (Şekil 3A). UltraNuclease, gerçek bir örneğe (müşteri tarafından sağlanan) eklendi ve 3ng/mL'den 0,093ng/mL'ye kadar 2 kat seyreltildi. Spike geri kazanımı %80~%110 arasındaydı (Şekil 3B).