Çift sarmallı RNA (dsRNA), mRNA'nın in vitro transkripsiyonu sırasında bir yan ürün olarak ortaya çıkar. Bu yan ürün, insan vücudunda immünojenik özelliklere sahiptir ve bir bağışıklık tepkisi uyandırabilir, dolayısıyla mRNA seviyelerini azaltabilir. Bu, dsRNA'yı, tamamen ortadan kaldırılması ve kalıntı varlığının sıkı bir şekilde kontrol edilmesini gerektiren sorunlu bir işlem kirliliği haline getirir.

Bu endişeyi gidermek için, Çift Zincirli RNA (dsRNA) ELISA tespit kiti, kalan dsRNA'nın kantifikasyonu için çift antikor sandviç enzim bağlı immünolojik testinin (ELISA) deneysel prensiplerini kullanır. Kit sadece düzenli dsRNA'ların tespitinde değil, aynı zamanda peudo UTP, N1-Me-peudo UTP'nin tespitinde de kullanılabilir ve 5-OMe-UTP modifiye edilmiş dsRNA'lar.

Prosedür, hem bir standart hem de test örneğinin daha önce anti-dsRNA antikorlarıyla kaplanmış bir enzim plakasına (36717-A olarak belirtilir) eklenmesini içerir. Daha sonra, biyotin etiketli dsRNA tespit antikorları (36717-F) seyreltilmiş bir formda eklenir. Son olarak, antikorlar, antijenler, biyotin ve SA-HRP'den oluşan bir kompleks oluşturmak için Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) eklenir.

Plaka yıkamanın ardından, TMB kromojenik solüsyonunun (36717-K) eklenmesi renk gelişimini başlatır. HRP enzim katalizinin etkisi altında, TMB renksizden maviye dönüşür ve bu daha sonra durdurma solüsyonunun (36717-L) uygulanmasıyla durdurulur. Sonuç olarak, bu dönüşüm sarı bir renk tonuyla sonuçlanır ve bu rengin yoğunluğu numunede tanımlanan dsRNA miktarıyla pozitif olarak ilişkilidir.

Bu kit, biyolojik ürün saflaştırma sürecinin optimizasyonunu, ara aşamalarda safsızlık kontrolünü ve nihai ürün değerlendirmesi için salım testini sağlayarak çok yönlü bir amaca hizmet eder.

Pürün Validasyon Rapor

Bileşenler

Nakliye ve Depolama

Kit bir buz torbasıyla birlikte gönderilir ve 2°C ~8°C'de saklanabilir. Açılmamış ürün bir yıl geçerlidir. Reaktif açıldıktan sonra, altı ay geçerlidir. Bu ürünü asla dondurmayın.

Talimatlar

1. Deney öncesi hazırlık

1) Bu kitte bulunmayan ancak deney için gerekli olan deneysel malzemeler:

a. RNase içermeyen uçlar;

b. RNase içermeyen santrifüj tüpü;

c. Tozsuz kağıt;

d. RNase içermeyen numune ön işlem plakası;

e. Deiyonize su veya çift damıtılmış su.

2) Gerekli ancak sağlanmayan alet ve ekipmanlar:

a. Çok işlevli mikro plaka okuyucu (450nm ve 650nm'yi kapsayan çift dalga boyu algılama modu dahil; algılama dalga boyu olarak 450nm'yi ve referans dalga boyu olarak 650nm'yi kullanma kapasitesine sahip);

b. Tam otomatik plaka yıkama makinesi, vorteks karıştırıcı, sabit sıcaklık karıştırıcı, santrifüj;

c. Farklı özelliklerde hassas mikropipetler ve çok kanallı mikropipetler;

d. Zamanlayıcı, 4℃ buzdolabı;

e. Mikroplaka çalkalayıcı.

2. Sonuç analizi

a. Test edilecek numunenin OD değeri, standart eğrinin en yüksek noktasındaki OD değerini aşarsa, numunenin seyreltilmesi ve yeniden ölçülmesi gerekir.

b. Eğri Geliştirme Prosedürü: Standart konsantrasyonları x eksenine ve karşılık gelen kalibre edilmiş standart absorbans değerlerini y eksenine çizerek standart bir eğri oluşturun. Çeşitli çizim ve istatistiksel yazılım araçları standart eğrilerin oluşturulmasında ve bilinmeyen örnek konsantrasyonlarının belirlenmesinde yardımcı olabilir. Bu deney için dört parametreli veya beş parametreli bir uydurma yöntemi kullanılması önerilir.Son olarak, standart eğriyi referans alarak ve numunenin seyreltme faktörünü göz önünde bulundurarak numunedeki kalan dsRNA miktarını hesaplayın.

c. Sağlanan standart eğri açıklayıcı bir örnektir (sadece referans amaçlıdır). Gerçek örnek içeriği, aynı deneysel standart için özel olarak oluşturulmuş bir standart eğri kullanılarak belirlenmelidir.

3. Deney akış şeması

Şekil 5 Deney akış şeması

4. Ürün performansı

Bu kitin performansı tam olarak değerlendirilmiştir. Ayrıntılar için lütfen ilgili performans doğrulama raporunu almak üzere teknik personelle iletişime geçin.

5. Notlar

1. Bu kiti kullanmadan önce lütfen kullanım kılavuzunu dikkatlice okuyunuz.
2. Lütfen bu ürünü geçerlilik süresi içerisinde kullanınız ve farklı partilerden gelen ilgili reaktifleri karıştırmak yasaktır.
3. Kullanımdan önce tüm reaktiflerin oda sıcaklığına getirilmesi gerekir.
4. Kendi güvenliğiniz ve sağlığınız için lütfen laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldiven giyin.
5. Bu ürün yalnızca bilimsel araştırma amaçlıdır.
   
   

   Belgeler:

   Güvenlik Bilgi Formu

   Manuel