Tanım
Hieff Trans™ evrensel transfeksiyon reaktifi, en son nanoteknolojiye dayalı olarak geliştirilen çok amaçlı, kullanışlı ve etkili bir lipozom transfeksiyon reaktifidir. Birincil hücreler de dahil olmak üzere DNA, RNA ve oligonükleotidlerin transfeksiyonu için uygundur. Nöronlar da dahil olmak üzere transfeksiyonu zor hücreler yüksek transfeksiyon verimliliğine sahiptir. Benzersiz formülü doğrudan ortama eklenmesine olanak tanır ve serumun varlığı transfeksiyon verimliliğini etkilemez, bu da serum çıkarılmasının hücrelere verdiği hasarı azaltır. Transfeksiyondan sonra nükleik asit-transfeksiyon reaktifi kompleksini çıkarmak veya taze ortamla değiştirmek gerekli değildir ve taze ortam, hücrelerin besin durumuna göre 4-6 saat sonra da değiştirilebilir.
Ürün Bileşenleri
| Bileşen Numarası | Bileşenler | Kedi#/Boyut | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Evrensel-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 mL |
| 40808-B | Evrensel-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 mL |
Nakliye ve Depolama
Ürün buz paketleriyle birlikte gönderilir ve 2-8℃'de bir yıl saklanabilir. Dondurmayınız!
Dikkat Edilmesi Gerekenler
1) Transfeksiyon işlemi sırasında hücre birleşmesinin %70-%90'a ulaşması daha iyi olup, spesifik plaka yoğunluğu hücrelerin durumuna göre belirlenmektedir.
2) Transfeksiyon komplekslerinin hazırlanması, DNA ve transfeksiyon reaktiflerinin serumsuz ortamda seyreltilmesini gerektirir.
3) Transfeksiyon sırasında ortama antibiyotik eklenemez.
4) Yüksek saflıkta DNA veya RNA kullanımı daha yüksek transfeksiyon verimi elde etmeye yardımcı olur, plazmidlerdeki endotoksin ise transfeksiyonun düşmanıdır.
5) 2-8ºC’de saklayınız, kapağını uzun süre tekrar tekrar açmamaya dikkat ediniz.
6) İlk kullanımda maksimum transfeksiyon verimini elde etmek için nükleik asit konsantrasyonu ve reaktif hacmi optimize edilmelidir.
7) Bu ürün yalnızca bilimsel araştırma amaçlıdır!
Talimatlar
DNA Transfeksiyonu
[Not] Kullanılan transfeksiyon reaktifi miktarı hücre tipi ve diğer deneysel koşullardan etkilenir. İlk kez optimum kullanım miktarını optimize etmek için bir gradyan ayarlanması önerilir.
1) Hücreler plakalara yerleştirilir ve transfeksiyon sırasında hücre birleşim oranı %70-%90 olmalıdır.
2) Universal-B solüsyonunu aşağıdaki tabloya göre Opti-MEM besiyeri ile seyreltin ve yavaşça karıştırın.
3) DNA premiksini elde etmek için DNA'yı Opti-MEM besiyeri ile seyreltin, ardından Universal-A solüsyonunu ekleyin ve seyreltilmiş DNA elde etmek için yavaşça karıştırın.
4) Seyreltilmiş DNA’yı seyreltilmiş Universal-B solüsyonuna ekleyin (1:1 oranında).
5) Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.
6) DNA-lipozom kompleksini damla damla hücrelere ekleyin ve yavaşça karıştırın.
7) Gen ekspresyon analizi yapılana kadar 37°C, %5 CO2'li inkübatörde 48-96 saat inkübe edin.
siRNA'nın transfeksiyonu
siRNA transfeksiyonu prosedürü, DNA transfeksiyonu prosedürüyle aynıdır; ancak siRNA seyreltilirken Universal-A solüsyonunun (adım 3) eklenmesine gerek yoktur.
Tablo 1 Farklı hücre kültürü kaplarındaki transfeksiyon miktarı (sadece referans amaçlı)
| Hücre kültürü kapları | 96-kuyu | 24-kuyu | 6-kuyu | |
| Yapışık hücreler | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Universal-B solüsyonunu aşağıdaki tabloya göre Opti-MEM besiyeri ile seyreltin ve yavaşça karıştırın. | Opti-MEM ortamı | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Evrensel-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| DNA premiksini elde etmek için DNA'yı Opti-MEM besiyeriyle seyreltin, ardından Universal-A solüsyonunu ekleyin ve seyreltilmiş DNA elde etmek için yavaşça karıştırın. | Opti-MEM ortamı | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 mikrogram | 0,5 mikrogram | 2,5 mikrogram | |
| Evrensel-A(2 μL/μg DNA) | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Seyreltilmiş DNA'yı seyreltilmiş Universal-B solüsyonuna ekleyin (1:1 oranında). | Seyreltilmiş DNA çözeltisi | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Evrensel-B | 5 μL | 25 μL | 125 μL | |
| Oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin. | ||||
| DNA-Lipozom Kompleksi | Bileşenler(her kuyu) | 96-kuyu | 24-kuyu | 6-kuyu |
| Optimum-MEM | 10 μL | 50 μL | 250 μL | |
| DNA(0,5–5 μg/μL) | 0,1 mikrogram | 0.5 mikrogram | 2,5 mikrogram | |
| Evrensel-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Evrensel-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| DNA-lipozom kompleksini damla damla hücrelere ekleyin ve yavaşça karıştırın. | DNA-Lipozom Kompleksi | 10 μL | 50 μL | 250 μL |
[Not] Tabloda kullanılan miktar yalnızca referans amaçlıdır. Kullanılan DNA ve Universal-B solüsyonunun belirli miktarı, hücre tipine ve diğer deneysel koşullara göre optimize edilmelidir. Oranın 1:0,5-1:5 arasında tutulması önerilir.
(1) S: Nükleik asit transfeksiyon reaktif kompleksi hazırlanırken serum bulunabilir mi?
A: Serumun varlığı lipozomların oluşumunu etkileyecektir. Nükleik asit transfeksiyon reaktif kompleksleri hazırlanırken serumsuz ortam (genellikle MEM ortamı) kullanılması önerilir.
(2) S: Transfeksiyon reaktifi dondurulabilir mi?
C: Bu reaktif 2-8°C’de saklanmalı ve kapağın tekrar tekrar ve uzun süre açılmasından kaçınılmalıdır, çünkü kapağın uzun süre açılması lipozom oksidasyonuna neden olacak ve transfeksiyon etkinliğini etkileyecektir.
(3) S: Hieff Trans™ Evrensel Transfeksiyon Reaktifini kullanırken nelere dikkat etmeliyim?
A: 1) Transfeksiyon işlemi sırasında hücre birleşmesinin %70-%90'a ulaşması daha iyi olup, spesifik plaka yoğunluğu hücrelerin durumuna göre belirlenmektedir.
2) Transfeksiyon komplekslerinin hazırlanması, DNA ve transfeksiyon reaktiflerinin serumsuz ortamda seyreltilmesini gerektirir.
3) Transfeksiyon sırasında ortama antibiyotik eklenemez.
4) Yüksek saflıkta DNA veya RNA kullanımı daha yüksek transfeksiyon verimi elde etmeye yardımcı olur, plazmidlerdeki endotoksin ise transfeksiyonun düşmanıdır.
5) 2-8ºC’de saklayınız, kapağını uzun süre tekrar tekrar açmamaya dikkat ediniz.
6) İlk kullanımda en yüksek transfeksiyon verimini elde etmek için nükleik asit konsantrasyonu ve reaktif hacmi optimize edilmelidir.
(4) S: Transfeksiyondan sonra sonlandırılması gerekiyor mu?
A: Gerek yok. Transfeksiyondan sonra nükleik asit-transfeksiyon reaktif kompleksini çıkarmak veya taze ortamla değiştirmek gerekli değildir ve taze ortam, hücrelerin besin durumuna göre 4-6 saat sonra da değiştirilebilir.
(5) S: Transfeksiyon reaktifi viral vektör paketlemesinin transfeksiyonu için kullanılabilir mi?
A: Evet.Viral vektör paketlemesinin etkinliği, transfeksiyonun etkinliğine bağlı olmayıp, aynı zamanda paketleme plazmidlerinin seçimi ve plazmidler arasındaki orana da bağlıdır.
Ödeme ve Güvenlik
Ödeme bilgileriniz güvenli bir şekilde işlenir. Kredi kartı ayrıntılarını saklamıyoruz veya kredi kartı bilgilerinize erişimimiz yok.
Sorgu
Ayrıca sevebilirsiniz
SSS
Ürün yalnızca araştırma amaçlıdır ve insanlarda veya hayvanlarda terapötik veya teşhis amaçlı kullanım için tasarlanmamıştır. Ürünler ve içerikler, Yeasen Biotechnology'nin sahip olduğu patentler, ticari markalar ve telif haklarıyla korunmaktadır. Ticari marka sembolleri, tüm bölgelerde tescilli olmayıp, menşe ülkesini gösterir.
Bazı uygulamalar üçüncü tarafların ek fikri mülkiyet haklarına ihtiyaç duyabilir.
Yeasen, araştırmalarımızın güvenlik ve etik standartları sağlarken kritik soruları ele alması gerektiğine inanarak etik bilime kendini adamıştır.