类风湿关节炎（RA）是一种慢性炎症性关节疾病，以持续性滑膜炎、全身炎症、骨和软骨侵蚀为特征，最终可导致关节强直和畸形。RA动物模型被广泛应用于发病机制和治疗方法的研究。已建立了各种动物模型用于研究RA的病因、发病机制、影响因素，以及研究新的治疗靶点和评估新的疗法。

类风湿关节炎动物模型大致可分为诱导性模型和转基因模型两大类，常见的诱导性模型有胶原诱导性关节炎（CIA）、佐剂诱导性关节炎（AA），转基因小鼠模型有人类TNF-α转基因模型等。

弗氏佐剂是20世纪40年代由弗伦德（Jules Freund）发明的，是将抗原水溶液与油剂混合，加入乳化剂制成的油包水抗原乳剂，是动物实验中最常用的佐剂。

弗氏佐剂分为含结核杆菌的完全弗氏佐剂（CFA）和不含结核杆菌的不完全弗氏佐剂（IFA），主要用于诱发小鼠胶原性关节炎（CIA）和佐剂性关节炎（AA）模型。

图 1. 人类类风湿性关节炎

图2. 小鼠类风湿性关节炎

1 胶原性关节炎（CIA）（仅供参考）

1.1 小鼠模型

CIA模型是目前应用最为广泛的RA小鼠模型之一，用异源II型胶原对动物进行免疫，可诱发关节软骨中针对II型胶原的自身免疫反应，临床表现为多关节周围关节炎。

模型构建方法：将牛Ⅱ型胶原（CII）溶于冰醋酸中，4℃过夜溶解，再将热灭活的结核杆菌（BCG）置于液体石蜡中配制完全弗氏佐剂（CFA），二者混合乳化，制成Ⅱ型胶原乳剂。将此乳剂0.1-0.2mL皮下注射于小鼠尾根部，以诱发炎症。初次免疫后第21天，腹腔注射Ⅱ型胶原乳剂0.1-0.2mL加强注射。初次免疫后小鼠会出现局部炎症反应，约一周内痊愈；使用佐剂后，小鼠从第24天开始出现关节肿胀，由后足发展到前足，再到尾部。

1.2 大鼠模型

模型建立方法：将牛Ⅱ型胶原（CII）与不完全弗氏佐剂（IFA）等体积混合乳化，第一天给大鼠进行多点皮内注射，一周后腹腔加强注射，第二次免疫后3-7天制模。致敏后7天踝关节轻度肿胀、发红，3周后症状加重，可出现皮肤溃烂；5-6周后病理改变进一步加重，关节软骨及软骨下骨被血管翳侵蚀破坏。

2 佐剂性关节炎（AA）（仅供参考）

AA模型是目前应用最广泛的大鼠RA模型，有不完全弗氏佐剂（IFA）和完全弗氏佐剂（CFA）两种。

模型构建方法：对大鼠进行皮内注射以诱发炎症。模型一般在造模后10-20天出现持续炎症症状，20天左右达高峰，炎症主要在踝关节，可影响足底及整个足部，关节肿胀症状与临床类风湿关节炎患者相似，但可出现免疫功能紊乱现象。

3 胶原诱导性关节炎（CIA）建模步骤（仅供参考）

• 将牛 II 型胶原蛋白 (CII) 溶解于冰醋酸溶液中，浓度为 2 mg/mL，并在 4°C 下放置过夜。
• 不完全弗氏佐剂中添加了热灭活的结核杆菌，浓度为2-5mg/mL，益生生物提供的60718ES完全弗氏佐剂中结核杆菌浓度小于10mg/mL。
• 将牛II型胶原蛋白醋酸溶液与完全弗氏佐剂等体积混合、乳化。
• 每只实验小鼠背部皮下注射4~6次，总计0.1~0.2 mL。
• 三周后将不完全弗氏佐剂与牛II型胶原乙酸溶液等体积混合并乳化，每只小鼠尾根部皮下注射3～5次，总计0.1～0.2mL。

4 佐剂性关节炎（AA）建模步骤（仅供参考）

• 准备相关试剂，注意实验组和对照组的设置。
• 观察记录：一般在第二次免疫后7-12天，80%以上的小鼠会出现关节炎症状。临床症状根据小鼠关节红肿、活动度进行分级，分别在实验前和实验后第3、5、7、12天进行观察记录，分级标准如下：

表 1 评分标准

年代核	年代症状
0	活动正常，无红斑和肿胀的迹象。
1	活动正常，仅皮肤发红，无明显肿胀。
2	活动能力轻微受到影响，爪子、脚垫或膝关节有发红现象。
3	活动受到影响，爪趾及关节轻微变形、肿胀。
4	运动不畅，脚趾、关节严重红肿、僵硬或变形。

• 小鼠测量：用小鼠爪体积测量仪在实验前后测量小鼠后肢关节体积。测量每只小鼠后腿膝关节下方约5mm处的体积三次，记录平均值，体积与关节红肿程度成正比。每三天检测一次。
• 病理检查：取实验组及对照组小鼠，剥去皮肤，用4％甲醛固定48小时以上，用5％硝酸脱钙2小时，二甲苯浸泡，石蜡包埋，制成6mm厚切片，HE染色，常规光学显微镜观察，建立病理诊断评分标准。

5 实验病例图片（摘自文献）