分子诊断是通过检测人体内的内源性基因或外源性（病原体）基因的存在、缺陷或异常表达，以对人体状况或疾病做出特异性诊断的方法和过程，以 DNA、RNA 或蛋白质分子为诊断材料。主要的分子诊断技术包括聚合酶链式反应 (PCR)、荧光原位杂交 (FISH)、基因芯片和基因测序技术。与杂交和高通量测序技术相比，PCR 技术的主要优势在于其灵敏度更高、特异性更强、操作简便、易于传播。虽然 PCR 技术在可检测基因数量方面存在一定的局限性，但短期内仍将是分子诊断的主流技术。
分子诊断PCR扩增工作流程和原材料概述
1、核心酶材料-Taq DNA聚合酶
随着应用检测领域的扩大和市场需求的增加，野生型Taq DNA聚合酶已不能完全满足要求。
- 优越的稳定性：配制成含有引物和探针的完全预混溶液，经37°C处理7天后，低浓度检测无变化。
图1：以HBV核酸为模板，用10726ES制备qPCR完全预混液，除模板外所有组分在37℃下进行7天加速稳定性检测。结果显示，在高、中、低浓度下Ct值和荧光值均无明显变化，说明用10726ES制备的预混液性能稳定。
- 低宿主 gDNA 残留：每 100 U 中残留的大肠杆菌基因组 DNA 少于 0.5 个拷贝。
图 2：大肠杆菌基因组 DNA 的线性范围：30 fg/μL 至 300 pg/μL，相关系数 R2 为 0.9999。（B）三批 Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA 聚合酶中残留的大肠杆菌基因组 DNA 每 100 U 少于 0.5 个拷贝。
2、核心酶原料—逆转录酶
逆转录酶作为RT-qPCR反应的关键组分之一，必须具备更快的逆转录速度、更高的合成产量、更好的耐热性。为获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶，
- 可承受58℃反应温度，适合复杂RNA模板的逆转录
图3：海飞尔®V逆转录酶与进口品牌T*逆转录酶在55℃和58℃孵育30分钟后检测残留酶活力，结果显示海飞尔®V逆转录酶在58℃孵育30分钟后仍保持70%的活性，明显优于进口品牌。
- RT-qPCR 检测率优于其他品牌，检测范围为 1 pg 至 1 μg
图4：以浓度范围从1 pg到1 μg（7个梯度）的293T细胞总RNA为模板，使用Hifair® V一步法RT-gDNA酶切SuperMix进行逆转录，进行qPCR（Cat#11142）、V*、T*，得到的cDNA再进行qPCR定量分析，结果表明11142ES的灵敏度可达1 pg，检测率优于竞争产品。
3、其他酶及酶抑制剂：RNase抑制剂、UDG酶
核糖核酸酶 抑制剂：
尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG酶）：尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG酶）与dUTP配合使用，可建立PCR防污染体系，益生的耐热低UDG酶可避免常规UDG酶灭活后残留活性，导致含dU的扩增产物在室温下降解，还可避免分子酶中存在背景细菌而导致PCR结果出现假阳性，这对于准确识别感染性病原体，辅助临床诊断感染及传染病具有重要意义。
Taq DNA聚合酶抗体：非特异性扩增是影响PCR性能的主要问题之一，热启动技术可以有效降低非特异性扩增，抗体修饰的热启动酶封闭效率高，性能优异，常温下稳定，酶活释放速度快。逸生生物研发的双抗体热启动Taq酶不仅封闭了Taq酶5'→3'聚合酶活性，还同时封闭了5'→3'外切酶活性，这样双重封闭既能有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增，也能防止探针或引物降解而产生非特异性信号，使试剂的稳定性成倍提升。
4、通用高性能单管qPCR Master Mix
- 通用性好：适用于多种类型的多种引物和探针（已验证40余种不同类型的靶标），具有优异的扩增性能；
- 升 超全预混料稳定性： 37℃保存14天，4℃保存28天，反复冻融50次；
- 灵敏度高、特异性好： 灵敏度可检测出0.25拷贝/μL，特异性48孔无负峰；
- 支持快程序：兼容快速程序，30min即可出结果；
- dUP/UDG防污染系统： 引入dUTP/UDG防污染系统，有效防止气溶胶污染；
- 多平台、多系统应用： Bio-Rad CFX96、ABI Q5、7500、Slan、天龙等
图5：全合一预混试剂稳定性研究，对16710ES进行3种不同处理方式（4℃、37℃、冻融循环），实验组分别在4℃和37℃下处理7天，冻融循环50次，对照组（-20℃保存）在4种多重扩增体系下（组1、2、4为四重扩增体系，组3为三重扩增体系）进行稳定性评估，结果显示实验组与对照组Ct值（ΔCt）偏差在±0.5以内，荧光值偏差在15%以内，证明
5、通用高性能RT-qPCR预混液
一步法RT-qPCR试剂融合了逆转录酶和热启动酶的优越性能，辅以优化的缓冲体系，可快速灵敏地检测个位数拷贝模板，经过呼吸道疾病、动物疫病、科研体系等多个客户市场的验证，可满足各应用方向的需求。
- 通用性好：适用于病原微生物、人类基因组、植物等物种的核酸qPCR扩增与检测；
- 高灵敏度：精心优化的缓冲体系，将低浓度模板的检测灵敏度提高至250拷贝/mL；
- dUP/UDG 防污染系统：引入dUTP/不耐热UDG防污染体系，高效降解产品气溶胶污染，降低假阳性，保证结果真实；
- 支持快程序： 兼容快速程序，40min即可出结果；
- 超强稳定性： 37℃保存14天，反复冻融10次。
检测灵敏度评估
图 6：利用
产品推荐
| 产品類型 | 产品名称 | 货号 |
| PCR酶系列 | Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA 聚合酶，5 U/μL | 10726ES |
| Hifair® V 逆转录酶(200 U/μL) | 11300ES | |
| 尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG / UNG），热不稳定，1 U / μL | 10303ES | |
| 小鼠 RNase 抑制剂 (40 U/µL) | 10603ES | |
| dNTP 混合物（各 25 mM） | 10125ES | |
| 超低宿主残留超洁净PCR单酶系列 | Hieff UCF.ME® 热启动敏感 Taq DNA 聚合酶 (5 U/μL) | 14314ES |
| Hifair UCF.ME® V 逆转录酶 (200 U/μL) | 14608ES | |
| UCF.ME® 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (UDG/UNG)，热不稳定，1 U/μL | 14466ES | |
| 佛罗里达大学。ME® 鼠 RNase 抑制剂（40 U/µL） | 14672ES | |
| Lyo-Ready PCR单酶系列 | Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA 聚合酶，不含甘油（5U/μL） | 14316ES |
| Hifair® V 逆转录酶，不含甘油（600 U/μL） | 11301ES | |
| 尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG），热不稳定（1 U/μL，不含甘油） | 10707ES | |
| 小鼠RNase抑制剂（200 U/µL，无甘油） | 10703ES | |
| RT-qPCR 预混液 | Hifair® C203P1 多重一步法 RT-qPCR 探针试剂盒（UDG Plus） | 16630ES |
| Hifair® V 多重一步法 RT-qPCR 探针试剂盒（UDG Plus） | 11899ES | |
| Hifair® Lyo Multiplex 一步式 RT-qPCR 试剂盒 | 11831ES | |
| qPCR 预混液 | Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix（单管） | 16710ES |
| Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix（UDG plus） | 13891ES | |
| Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus） | 11827ES | |
| Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus） | 11853ES | |
| Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix（UDG plus） | 11893ES |