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ECL试剂是辣根过氧化物酶（HRP）的化学发光底物，是目前Western blotting检测中最灵敏的试剂，目前市面上ECL试剂普遍存在淬灭、背景高、不稳定、低丰度蛋白检测困难等问题，影响最终的实验结果。
产品特性
- 超强灵敏度 — 检测从皮克到低飞克级别的抗原。
- 更高的信噪比 — 精确的发光基板可降低背景噪音。
- 抗体效率更高 — 优化底物系统以获得更高的抗体结合亲和力。
- 高性价比 — 更低的价格，更高的性能。
- 卓越的稳定性 — 新的氧化剂确保在4°C下稳定储存长达一年。
产品原理
ECL试剂检测的核心原理是氧化反应发光：发光底物的主要成分鲁米诺在碱性条件下，通过辣根过氧化物酶（HRP）的催化，被H2O2氧化，形成激发态中间体3-氨基邻苯二甲酸，当其回到基态时，发射出光子，最大发射波长为425nm，这些光子信号可被X射线胶片或CCD成像装置捕捉到。
选择指南
那么，您应该选择哪种产品进行实验？
表 1.ECL 试剂选择指南
| | 增强型 ECL 增强型 | 超级ECL 超敏感型 | 超级耐久 耐用型 | 最大信号 超高灵敏度型 |
| 适用样品 | 以高丰度常规蛋白质样本为目标 | 目标丰度低，样本有限 | 目标丰度低，样本有限 | 丰度极低的目标，珍贵的样品 |
| 检测灵敏度 | 中皮克级 | 低皮克级 | 中飞克级 | 低飞克水平 |
| 信号持续时间 | < 2 小时 | < 12 小时 | < 24 小时 | < 8 小时 |
| 适用检测系统 | 所有试剂均适用于X射线胶片、CCD成像装置 | |||
| 一抗稀释浓度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
| 二抗稀释浓度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000
| 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
| 推荐膜 | 数控膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
| 储存稳定性 | 室温下1年 | 4℃保存1年，室温保存半年 | ||
| 优点 | 同级别灵敏度中信号最强 | 最高性价比，适合大多数WB实验 | 信号持续时间最长，非常适合多次曝光 | 灵敏度极佳，非常适合微量蛋白质的检测 |
注意：建议的抗体稀释浓度基于 1 mg/mL 的抗体库存浓度。
产品应用
图1 检测效果比较
图2 检测效果比较
图 3.检测效果比较
已出版文献
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S 等。表达亮氨酸-tRNA-合酶-2的B细胞有助于结直肠癌的免疫逃避。免疫。2022；55(6):1067-1081.e8。doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017（影响因子：43.474）
[2] 吴哲,刘丹,潘丹等.微型AcidibacillusthiooxidansCas12f1的结构与工程设计[J].自然催化,2023,6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C 等。巨噬细胞 IRX3 促进饮食引起的肥胖和代谢炎症。Nat Immunol。2021；22(10):1268-1279。doi:10.1038/s41590-021-01023-y (影响因子：25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G 等。抑制性中间神经元的突触可塑性对海马节律和记忆的门控。神经元。2021；109(6):1013-1028.e9。doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014（影响因子：17.173）
价格优势
图 7.价格比较
常见问题
| 遇到的问题 | 原因分析 | 推荐解决方案 |
| 胶片有反转图像 | 胶片有反转图像 | 胶片有反转图像 |
| 胶片上有棕色或黄色条纹 | ||
| 荧光猝灭 | 操作时间过长，膜逐渐干燥 | 防止膜干燥 |
| 塑料包装、显影剂或定影剂的污染 | 养成良好的实验习惯 | |
| 反应体系中HRP不足 | 增加HRP标记物质 | |
| 胶片上无条带或信号弱 | 转移效率低 | 提高转移效率，使用预染Marker进行判断 |
| 抗原/抗体不足或不匹配 | 增加抗原/抗体量或选择合适的抗原/抗体 | |
| X 射线胶片问题 | 如果曝光后 X 射线胶片完全变黑（不透明），则表明胶片已完全曝光；使用新的 X 射线胶片 | |
| 开发人员/修复者问题 | 预先曝光胶片进行检查；如果有问题，请更换新的显影剂/定影剂 | |
| 反应体系中HRP含量过高 | 稀释 HRP 标记物质 | |
| 高背景 | 一抗和二抗浓度过高 | 降低抗体浓度，延长阻断时间 |
| 抗体未彻底清洁 | 增加洗涤次数 | |
| 阻塞不完全 | 优化阻塞条件 | |
| 使用了错误的阻断剂 | 使用不同的阻断剂 | |
| 过度接触 | 减少曝光时间 | |
| 抗体特异性差 | 用高质量抗体代替 | |
| 反应体系中HRP含量过高 | 稀释 HRP 标记物质 | |
| 有空位的带子 | 高浓度抗原和二抗 | 稀释样品并重新运行凝胶，或冷却混合的显色溶液并将其应用于膜以立即快速显影。 |
| 不规则带状 | 转移过程中出现气泡或甲醇水化不均匀（针对 PVDF 膜） | 优化转移条件。 |
| 电影广告 | HRP 标记物质的聚集体 | 用0.2μm膜过滤HRP标记物 |
| 非特异性条带 | 反应体系中HRP含量过高 | 稀释 HRP 标记物质 |
| SDS 导致非特异性蛋白质结合 | 实验过程中请勿使用 SDS | |
| 抗体特异性差 | 用高质量抗体代替 | |
| 阻断不足 | 增加封闭时间或使用不同的封闭剂 |
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
| 超级ECL检测试剂 | 36208ES60/76 | 100 毫升/50 毫升 |
| 增强型 ECL 化学发光底物试剂盒 | 36222ES60/76 | 100 毫升/500 毫升 |
| SuperSignal SuperDura 延长使用寿命基板 | 36223ES10/60/70/76 | 10毫升/100毫升/200毫升/500毫升 |
| SuperSignal MaxiSignal 最大灵敏度底物 | 36224ES10/60/70/76 | 10毫升/100毫升/200毫升/500毫升 |