1.背景介绍

链霉亲和素是来源于链霉菌(Streptomyces avidinii)的生物素结合蛋白,其非特异性结合能力远低于亲和素,与在中性pH下带净正电荷、含有约7%碳水化合物的蛋清亲和素相比,链霉亲和素具有在中性pH下几乎不带净电荷、不含碳水化合物等更优异的化学性质,因此被广泛用作亲和素的替代品。

2.产品特点

四聚体结构:链霉亲和素以同型四聚体形式存在,大小为66KDa;

高亲和力:每个链霉亲和素分子可以与四个生物素分子高度特异地结合,且它们之间的亲和力极强;

广泛应用: 链霉亲和素-生物素复合物的解离常数在纳摩尔范围内,这是分子生物学应用中常用的性质;在大多数应用中,它可以与抗体蛋白互换使用;

高品质萃取: 由纯化而得 阿维丁链霉菌

图 1. 链霉亲和素

产品 应用

应用 1:含链霉亲和素的纯化树脂

1)应用原理

基于链霉亲和素与生物素相互作用的特点,链霉亲和素与6%琼脂糖高度交联,独特的制备工艺赋予其更高的理化性质,使其能够承受更高的压力,在相对较高的流速下即可实现目标蛋白的纯化,更适合大规模工业化蛋白纯化。

图2. 链霉亲和素树脂纯化原理

2)Yeasen 致力于为您提供高效的产品,为您纯化更完美的蛋白质。

图 3. 经链霉亲和素树脂纯化的蛋白质

3)常见问题

问题

可能的原因

推荐的解决方案

色谱柱背压过高

填料堵塞

清洁树脂。

裂解缓冲液中含有细小的固体颗粒,建议上样前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,或离心去除。

样品太粘稠。

样品含有高浓度的核酸,延长裂解时间直至粘度降低,或添加 DNase I(最终浓度为 5 μg/ml)、Mg2+ (最终浓度为 1 mM),在冰上孵育 10-15 分钟

缓冲液太粘稠

有机试剂或蛋白质稳定剂(如甘油等)可能造成背压升高,降低操作流速。

洗脱组分中无目的蛋白质

过度切割会使目标蛋白质变性

使用温和的裂解条件。实验条件基于经验。

目标蛋白质聚集产生沉淀

将 DTT 添加到预细胞裂解溶液中,最终浓度为 1-10 mM。

目标蛋白未完全洗脱

洗脱体积太小

增加洗脱液体积并降低洗脱流速。

洗脱缓冲液的 pH 值发生变化

使用新鲜配制的洗脱液

洗脱液孵育时间不够

增加洗脱缓冲液与凝胶的孵育时间。

应用2:荧光基团和酶结合物标记的链霉亲和素。

图 4. 不同的结合链霉亲和素

1)酶联免疫吸附测定
  • 辣根过氧化物酶 (HRP) 结合链霉亲和素

Ⅰ.采用高纯度链霉亲和素与辣根过氧化物酶经特殊结合技术制成;

Ⅱ.保持过氧化物酶较高的比活性。应用:免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学(ICC)、原位杂交(ISH)等。

建议浓度:WB(化学发光法)0.01-0.1 µg/mL;ELISA、HC/ICC、WB(底物显色)1-2µg/mL

  • 碱性磷酸酶 (AP) 结合链霉亲和素

Ⅰ.具有特定的共价键,适用于固相分析、组织/细胞染色系统和印迹应用;

Ⅱ.该结合物稳定、活性高。

应用:免疫组织化学 (IHC)、免疫细胞化学 (ICC)、酶联免疫斑点试验 (ELISPOT)、酶联免疫吸附试验 (ELISA)、原位杂交 (ISH) 和印迹应用。

建议浓度:ELISA、IHC/ICC 为 1-2 µg/mL;WB 为 0.1-1 µg/mL

2)荧光团结合链霉亲和素
  • Fluor® 荧光素偶联链霉亲和素

Ⅰ.建议常规进行免疫荧光检查;

Ⅱ.纯度高,具有极低的非特异性结合特性;

Ⅲ.对生物素有较高的亲和力;

应用:免疫荧光(IF)、原位杂交(ISH)、流式细胞术(Flow Cyt)。

建议浓度:0.5-2 µg/mL (IF)

  • DyLight™ 染料结合链霉亲和素

Ⅰ.可用于免疫荧光、原位杂交、流式细胞术等应用中检测生物素化的二抗等大分子;

Ⅱ.纯度高,具有极低的非特异性结合特性;

Ⅲ.对生物素有极高的亲和力;

Ⅳ.光稳定性高,对pH不敏感,荧光更明亮;

应用:免疫荧光(IF)、原位杂交(ISH)、流式细胞术(Flow Cyt)。

建议浓度:0。5-2 微克/毫升(中频)

产品信息

产品系列

产品编号

产品名称

规格

链霉亲和素

35099ES

链霉亲和素(粉末)

100毫克/1克

35101ES

链霉亲和素 (5mg/ml)

1 毫克/5 毫克/10 毫克/100 毫克/1 克

酶结合链霉亲和素

35105ES

HRP 链霉亲和素

100 μL

35106ES

AP链霉亲和素

100 μL

荧光标记的链霉亲和素

35102ES

DyLight 405™ 链霉亲和素

100 μL

35103ES

氟化物商标 488 结合链霉亲和素

100 μL

35104ES

氟化物商标 647 结合链霉亲和素

100 μL

35107ES

氟化物商标 584 结合链霉亲和素

100 μL

35108ES

Cy3 结合的链霉亲和素

1毫克

链霉亲和素纯化系列

20512ES

链霉亲和素琼脂糖树脂 6FF

5毫升/5毫升×5/100毫升

20513ES

BiotSep 链霉亲和素 6FF 层析柱,1ML

1毫升/1毫升×5

20514ES

BiotSep 链霉亲和素 6FF 层析柱,5ML

5毫升/5毫升×5

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