—无血清培养基补充剂

1.背景

人血清白蛋白(HSA)是人体血浆中最丰富的蛋白质,是激素、脂质等物质的转运体,其主要生理功能是调节血浆pH值、维持血浆渗透压。人血清白蛋白是一种由585个氨基酸组成的单链蛋白,分子量为66.5kDa。

白蛋白可以提供对细胞生长至关重要的氮和必需氨基酸,并有助于维持细胞培养环境中的渗透压平衡。此外,白蛋白还可以作为细胞附着的底物,帮助稳定pH值,甚至保护细胞免受压力和损伤。白蛋白通常以不同的浓度添加到细胞培养基中——取决于细胞类型和培养应用。它还可以作为激素、维生素和其他生长因子的载体蛋白。此外,HSA可用作疫苗中的稳定剂和/或佐剂。

图 1. 人血清白蛋白的结构 [1]

2.血清白蛋白的来源

重组人血清白蛋白 与胎牛血清(FBS)、血浆衍生白蛋白(pHSA)和牛血清白蛋白(BSA)相比,重组人白蛋白具有更高的纯度和更好的批次稳定性,高品质的重组人白蛋白不含其他杂质和非天然修饰,无任何血源性病毒感染风险,是细胞和组织培养领域的完美选择。

表1. 重组人血清理化性质比较
白蛋白和天然人白蛋白pHSA

物理化学性质

R重组

等离子体

氨基酸序列

相同的

糖苷修饰

没有任何

分子量

66.554 (千道尔顿)

66.550 (千道尔顿)

等电点

4.8

药物结合活性

相似的

热稳定性

熔点65℃

酯酶活性

相同的

晶体结构

相同的

3.应用 R重组 年代埃鲁姆 一个白蛋白

3.1. 白蛋白是无血清培养基补充剂

白蛋白是许多无血清细胞培养系统的重要组成部分,例如杂交瘤细胞和中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞的培养系统。白蛋白可以加入细胞支架中,为细胞提供必需的营养物质和生长因子来源,促进细胞存活和增殖。人血清白蛋白用作细胞培养基补充剂,以维持用于生产单克隆抗体、重组蛋白和其他生物制品的细胞的生长和健康。白蛋白还可以使细胞培养环境更加稳定和可控,降低与动物源血清相关的批次间差异和污染风险。

3.2. 哺乳动物细胞培养

白蛋白可与多种生物活性物质结合,使其成为一种关键的运输分子。白蛋白还能清除对细胞存活有害的活性氧。这些特性使白蛋白成为促进细胞生长和体外维持各种真核细胞的绝佳选择。重组人白蛋白非常适合各种不同的干细胞、原代细胞和生产细胞类型,包括免疫细胞、VERO、间充质干细胞、HEK293、二倍体细胞、CHO 和其他细胞类型。

3.3. 疫苗生产与制备

HSA 是稳定疫苗的重要成分,可为多种疫苗类型提供多种益处,包括减毒活病毒、灭活或杀死的病毒、病毒样颗粒和亚单位疫苗。HSA 的显著特性之一是它能够覆盖疏水和亲水表面,从而防止疫苗在从生产到配制再到储存的整个生命周期中发生不良的非特异性吸附。通过其结合能力(能够进行离子和疏水相互作用),HSA 可以保护暴露的疫苗表面免受不必要的聚集和颗粒形成,否则可能会损害疫苗效力。

3.4. 体外/体内疾病诊断

HSA 是多种疾病的生物标志物,包括癌症、类风湿性关节炎、缺血、肝病、肥胖症和糖尿病。

3.5 人血白蛋白在干细胞治疗中的应用

白蛋白长期以来一直是细胞培养基的重要组成部分。它促进多种细胞类型生长的能力已得到充分证实,包括间充质干细胞 (MSC)、胚胎干细胞 (ESC)、诱导性多能干细胞 (iPSC) 和免疫细胞。在细胞培养中,白蛋白不仅仅是一种营养来源。它充当多功能储存器,保护必需金属和其他分子实体,从而为细胞持续生长和活力创造最佳环境。

除了用于细胞培养,白蛋白还可用于干细胞冷冻保存。白蛋白的表面包被能力可确保冷冻过程中细胞的安全。此外,白蛋白的缓冲能力可维持细胞完整性所需的 pH 平衡,而其稳定能力可使细胞保持悬浮状态,从而延长其在冷冻保存期间的活力。

此外,白蛋白还可作为药物载体,延长药物在体内的循环时间,增强药物疗效。

4.白蛋白在培养基中的作用机理

4.1 结合脂肪酸

白蛋白是血浆中 99% 非酯化脂肪酸 (FA) 的载体。白蛋白具有 7 个高亲和力和 20 多个低亲和力 FA 结合位点。亚油酸、亚麻酸和油酸等脂肪酸不溶于水溶液,必须通过载体分子输送到细胞。循环白蛋白通常可以携带 1 或 2 个游离脂肪酸。脂肪酸的结合也有助于稳定白蛋白。作为细胞培养添加剂,白蛋白的活性部分取决于它结合并输送到细胞的特定脂肪酸。

4.2 金属离子的结合

金属离子是细胞培养必不可少的成分。HSA 是关键金属离子 Cu 2+ 和 Zn 2+ 的关键转运体。此外,铜原子可以发生单价氧化还原反应并催化自由基的产生,使铜具有细胞毒性。在体内,细胞外铜离子与白蛋白结合,削弱了铜的潜在毒性。每个白蛋白分子都有一个高亲和力的铜结合位点,当铜与该位点结合时,它不会参与与自由基相关的氧化还原反应。白蛋白还可以结合其他二价阳离子,如 Ca、Mg、Mn、Cd、Co 和 Ni。

4.3 HSA 的抗氧化特性

HSA 的抗氧化活性主要归因于四种主要金属结合位点的氧化还原特性。游离铜 2+,铁 2+和其他金属离子与氧反应生成ROS ,也能与H2O2相互作用产生有害的羟基自由基。另一方面,白蛋白与金属离子的结合限制了这些离子参与ROS生成的能力。

在生物反应器中进行的工业规模真核细胞培养含有溶解氧和游离金属,如铁、铜、钴和镍,这些金属会产生降解细胞膜的 ROS。添加 BSA 或 HSA 可降低 ROS 压力,从而产生健康的细胞培养物。另一方面,白蛋白与这些金属(尤其是铜、锌、钒和硒)的结合可促进细胞对这些金属的吸收,刺激培养物生长,并显著提高真核细胞中重组蛋白的产量。

4.4 结合吡哆醛

氨基酸是细胞培养基的关键成分。吡哆醛及其衍生物 5' 磷酸吡哆醛 (PLP) 可与氨基酸发生非酶促反应并形成席夫碱。这些席夫碱非常不稳定,与金属离子接触时会导致氨基酸降解和细胞生长抑制。游离吡哆醛部分通过与白蛋白结合而被隔离,从而防止吡哆醛在体外与氨基酸发生反应并破坏氨基酸。

4.5 结合核黄素

核黄素是另一种与游离氨基酸发生反应并降解游离氨基酸的因子。在水溶液中,核黄素可以与色氨酸结合形成复合物。在光照条件下,这种复合物会分解成有毒产物。白蛋白可以与核黄素及其磷酸盐(黄素单磷酸盐)结合并保护它们免于降解。白蛋白具有单个色氨酸结合位点。

5.产品特点

Yeasen 提供多种重组血清白蛋白,包括人、小鼠、大鼠、猴等物种。

高纯度:>99%,经SDS-PAGE和HPLC检测。
无动物来源:不含动物源成分,不存在任何血源性病毒感染的风险。
批次均匀度高、稳定性高
应用广泛: 可应用于不同类型细胞的培养。

    6.订购信息

    产品名称

    猫#

    规格

    重组人血清白蛋白(rHSA)

    (植物表达,细胞培养级,冻干粉)

    20901ES

    1克/5克/10克

    重组人血清白蛋白(HSA)

    (液体,细胞培养级)

    92618ES

    1克/5克/10克

    重组鼠血清白蛋白,His标签

    92628ES

    25微克/100微克/500微克

    重组猕猴血清白蛋白,His标签

    92627ES

    25微克/100微克/500微克

    重组大鼠血清白蛋白,His标签

    92625ES

    25微克/100微克/500微克

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