التهاب المفاصل الروماتويدي هو مرض التهابي مزمن يصيب المفاصل ويتميز بالتهاب الغشاء الزليلي المستمر والالتهاب الجهازي وتآكل العظام والغضاريف، مما قد يؤدي في النهاية إلى تيبس المفصل وتشوهه. تُستخدم نماذج الحيوانات لالتهاب المفاصل الروماتويدي على نطاق واسع لدراسة مسببات المرض والطرق العلاجية. تم إنشاء نماذج حيوانية مختلفة لدراسة مسببات التهاب المفاصل الروماتويدي ومسبباته والعوامل المؤثرة فيه والبحث عن أهداف علاجية جديدة وتقييم العلاجات الجديدة.

يمكن تقسيم نماذج الحيوانات المصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي بشكل عام إلى فئتين: نماذج مستحثة ونماذج معدلة وراثيًا. تشمل النماذج المستحثة الشائعة التهاب المفاصل الناتج عن الكولاجين (CIA) والتهاب المفاصل الناتج عن العلاج المساعد (AA)، بينما تشمل نماذج الفئران المعدلة وراثيًا نماذج TNF-α المعدلة وراثيًا لدى البشر، إلخ.

مادة Freund المساعدة، التي اخترعها Jules Freund في أربعينيات القرن العشرين، عبارة عن مستحلب زيتي مائي لمستضد يتم تصنيعه عن طريق خلط محلول مائي لمستضد مع عامل زيتي وإضافة مستحلب. وهي المادة المساعدة الأكثر استخدامًا في التجارب على الحيوانات.

ينقسم مساعد فرويند إلى مساعد فرويند الكامل (CFA) الذي يحتوي على المتفطرة السلية ومساعد فرويند غير الكامل (IFA) الذي لا يحتوي على المتفطرة السلية. يتم استخدامهما بشكل أساسي لتحفيز التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) والتهاب المفاصل الناجم عن المساعد (AA) في الفئران.

الشكل 1. التهاب المفاصل الروماتويدي لدى البشر

الشكل 2. التهاب المفاصل الروماتويدي لدى الفئران

1 التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) (للمرجع فقط)

1.1 نموذج الفأرة

يعد نموذج CIA أحد أكثر نماذج فئران التهاب المفاصل الروماتويدي استخدامًا. يمكن أن يؤدي تحصين الحيوانات بالكولاجين من النوع الثاني غير المتجانس إلى إحداث استجابة مناعية ذاتية ضد الكولاجين من النوع الثاني في غضروف المفصل، مع ظهور مظاهر سريرية لالتهاب المفاصل الطرفي المتعدد المفاصل.

طريقة بناء النموذج: يتم إذابة الكولاجين البقري من النوع الثاني (CII) في حمض الأسيتيك الجليدي عند درجة حرارة 4 درجات مئوية طوال الليل. ثم يتم وضع بكتيريا السل (BCG) المقتولة بالحرارة في البارافين السائل لتحضير مادة Freund's Adjuvant الكاملة (CFA). يتم خلط الاثنين واستحلابهما لتحضير مستحلب الكولاجين من النوع الثاني. يتم حقن هذا المستحلب تحت الجلد في قاعدة ذيل الفأر بجرعة 0.1-0.2 مل لتحفيز الالتهاب. في اليوم الحادي والعشرين بعد التطعيم الأولي، يتم إعطاء حقنة معززة من 0.1-0.2 مل من مستحلب الكولاجين من النوع الثاني داخل الصفاق. بعد التطعيم الأول، ستعاني الفئران من تفاعلات التهابية موضعية تلتئم في غضون أسبوع تقريبًا؛ بعد المادة المساعدة، سيصاب الفئران بتورم المفاصل بدءًا من اليوم الرابع والعشرين، ويتقدم من القدمين الخلفيتين إلى القدمين الأماميتين ثم إلى الذيل.

1.2 نموذج الفأر

طريقة بناء النموذج: يتم خلط الكولاجين البقري من النوع الثاني (CII) مع مساعد فرويند غير الكامل (IFA) بكميات متساوية ويتم استحلابه. في اليوم الأول، يتم حقن الفئران داخل الجلد في مواقع متعددة، وبعد أسبوع، تتلقى دفعة داخل الصفاق. يتم الحصول على النموذج في غضون 3-7 أيام بعد التطعيم الثاني. بعد سبعة أيام من التحسس، ستكون مفاصل الكاحل منتفخة قليلاً وحمراء، وستزداد الأعراض سوءًا بعد 3 أسابيع، مع احتمال حدوث تقرحات جلدية؛ بعد 5-6 أسابيع، تتفاقم التغيرات المرضية بشكل أكبر، مع تآكل غضروف المفصل والعظم تحت الغضروفي وتدميره بواسطة البانيوس.

2 التهاب المفاصل الناتج عن العلاج المساعد (AA) (للمرجع فقط)

نموذج AA هو نموذج RA الأكثر استخدامًا على نطاق واسع، مع نوعين: مساعد فرويند غير المكتمل (IFA) ومساعد فرويند الكامل (CFA).

طريقة بناء النموذج: يتم حقن الفئران داخل الجلد لإحداث الالتهاب.يُظهِر النموذج عمومًا أعراض التهابية مستمرة لمدة 10 إلى 20 يومًا بعد التحريض، وتبلغ ذروتها بعد حوالي 20 يومًا. يحدث الالتهاب بشكل أساسي في مفصل الكاحل، والذي يمكن أن يؤثر على باطن القدم والقدم بالكامل. أعراض تورم المفاصل مماثلة لأعراض مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي السريري، ولكن قد تحدث ظاهرة ضعف المناعة.

3 خطوات لنمذجة التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) (للمرجع فقط)

• يتم إذابة الكولاجين البقري من النوع الثاني (CII) في محلول حمض الأسيتيك الجليدي بتركيز 2 ملغ / مل ويتم حفظه طوال الليل في درجة حرارة 4 درجة مئوية.
• يتم استكمال مساعد فرويند غير المكتمل ببكتيريا السل المقتولة بالحرارة بتركيز 2-5 مجم/مل. تركيز البكتيريا السلية في مساعد فرويند الكامل 60718ES المقدم من شركة Yisheng Biology أقل من 10 مجم/مل.
• يتم خلط محلول حمض الأسيتيك الكولاجيني البقري من النوع الثاني مع Complete Freund's Adjuvant بكميات متساوية ويتم استحلابه.
• يتم إعطاء كل فأر تجريبي 4-6 حقن تحت الجلد على الظهر، بإجمالي 0.1-0.2 مل.
• بعد ثلاثة أسابيع، يتم خلط مساعد فرويند غير المكتمل مع محلول حمض الأسيتيك الكولاجيني البقري من النوع الثاني بكميات متساوية ويتم استحلابه، ويتم إعطاء كل فأر 3-5 حقن تحت الجلد في قاعدة الذيل، بإجمالي 0.1-0.2 مل.

4 خطوات لنمذجة التهاب المفاصل الناتج عن العلاج المساعد (AA) (للمرجع فقط)

• قم بإعداد الكواشف ذات الصلة، مع ملاحظة إعداد المجموعات التجريبية ومجموعات المراقبة.
• الملاحظة والتسجيل: بشكل عام، تظهر أعراض التهاب المفاصل لدى أكثر من 80% من الفئران بعد 7-12 يومًا من التطعيم الثاني. يتم تصنيف الأعراض السريرية بناءً على احمرار ونشاط مفصل الفأر، ويتم تسجيل الملاحظات قبل التجربة وفي اليوم الثالث والخامس والسابع والثاني عشر بعد التجربة، مع معايير التصنيف على النحو التالي:

الجدول 1 معايير التسجيل

سجوهر	سالأعراض
0	كان النشاط طبيعيًا، ولم تظهر عليه أي علامات احمرار أو تورم.
1	كان النشاط طبيعيًا مع احمرار الجلد فقط وعدم وجود تورم كبير.
2	يتأثر النشاط بشكل طفيف، وتظهر احمرار في المخالب أو باطن القدم أو مفصل الركبة.
3	يتأثر النشاط، وتشوه طفيف في أصابع القدم والمفاصل وتورم.
4	يتم حظر الحركة، وأصابع القدم والمفاصل حمراء ومتورمة ومتيبسة أو مشوهة بشكل خطير.

• قياس الفأر: استخدم مقياس حجم مخلب الفأر لقياس حجم مفصل الطرف الخلفي للفأر قبل وبعد التجربة. قم بقياس الحجم على مسافة حوالي 5 مم أسفل مفصل الركبة لكل رجل خلفية للفأر ثلاث مرات، وسجل القيمة المتوسطة، ويكون الحجم متناسبًا مع درجة احمرار المفصل وتورمه. يتم إجراء الكشف كل ثلاثة أيام.
• الفحص المرضي: يتم أخذ الفئران من المجموعة التجريبية والمجموعة الضابطة، وإزالة الجلد، وتثبيته بالفورمالديهايد بنسبة 4% لأكثر من 48 ساعة، وإزالة الكلس بحمض النيتريك بنسبة 5% لمدة ساعتين، وغمرها في الزيلين، ودفنها في البارافين. يتم عمل أقسام بقطر 6 مم، وصبغها بـ HE، ومراقبتها باستخدام مجهر ضوئي تقليدي لتحديد معيار تسجيل للتشخيص المرضي.

5 صور لحالات تجريبية (مقتطفة من الأدبيات)