التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض التهابي مزمن يصيب المفاصل، يتميز بالتهاب مستمر في الغشاء الزليلي، والتهاب جهازي، وتآكل في العظام والغضاريف، مما قد يؤدي في النهاية إلى تيبس المفصل وتشوهه. تُستخدم نماذج حيوانية لالتهاب المفاصل الروماتويدي على نطاق واسع لدراسة مسببات المرض وطرق العلاج. وقد أُنشئت نماذج حيوانية مختلفة لدراسة مسببات التهاب المفاصل الروماتويدي، ومسبباته، والعوامل المؤثرة فيه، ولبحث أهداف علاجية جديدة وتقييم علاجات جديدة.

يمكن تقسيم نماذج الحيوانات المصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي بشكل عام إلى فئتين: نماذج مُستحثة ونماذج مُعدّلة وراثيًا. تشمل النماذج المُستحثة الشائعة التهاب المفاصل المُستحث بالكولاجين (CIA) والتهاب المفاصل المُستحث بالعلاج المساعد (AA)، بينما تشمل نماذج الفئران المُعدّلة وراثيًا نماذج مُعدّلة وراثيًا لعامل نخر الورم ألفا (TNF-α) لدى البشر، إلخ.

مُساعد فرويند، الذي اخترعه جول فرويند في أربعينيات القرن العشرين، هو مستحلب مُستضد زيتي في الماء، يُصنع بخلط محلول مُستضد مائي مع عامل زيتي وإضافة مُستحلب. وهو أكثر المُساعدات استخدامًا في التجارب على الحيوانات.

يُقسّم مساعد فرويند إلى مساعد فرويند كامل (CFA) يحتوي على المتفطرة السلية، ومساعد فرويند غير كامل (IFA) خالٍ من المتفطرة السلية. ويُستخدمان بشكل رئيسي لتحفيز التهاب المفاصل المُحفَّز بالكولاجين (CIA) والتهاب المفاصل المُحفَّز بالمادة المساعدة (AA) لدى الفئران.

الشكل 1. التهاب المفاصل الروماتويدي البشري

الشكل 2. التهاب المفاصل الروماتويدي لدى الفئران

1 التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) (للمرجع فقط)

1.1 نموذج الفأر

يُعد نموذج CIA أحد أكثر نماذج فئران التهاب المفاصل الروماتويدي استخدامًا. يمكن أن يُحفز تحصين الحيوانات بالكولاجين المتغاير من النوع الثاني استجابة مناعية ذاتية ضد الكولاجين من النوع الثاني في غضروف المفصل، مع ظهور أعراض سريرية لالتهاب المفاصل الطرفي المتعدد المفاصل.

طريقة بناء النموذج: يُذاب الكولاجين البقري من النوع الثاني (CII) في حمض الأسيتيك الجليدي عند درجة حرارة 4 درجات مئوية طوال الليل. ثم يُوضع بكتيريا السل (BCG) المقتولة حرارياً في البارافين السائل لتحضير مساعد فرويند الكامل (CFA). يُخلط المادتان ويُستحلبان لتحضير مستحلب الكولاجين من النوع الثاني. يُحقن هذا المستحلب تحت الجلد عند قاعدة ذيل الفأر بجرعة 0.1-0.2 مل لتحفيز الالتهاب. في اليوم الحادي والعشرين بعد التطعيم الأولي، تُعطى حقنة معززة من مستحلب الكولاجين من النوع الثاني بجرعة 0.1-0.2 مل داخل الصفاق. بعد التطعيم الأول، ستُصاب الفئران بردود فعل التهابية موضعية تلتئم في غضون أسبوع تقريبًا؛ بعد التطعيم المساعد، سيُصاب الفئران بتورم في المفاصل بدءًا من اليوم الرابع والعشرين، ويتطور من القدمين الخلفيتين إلى القدمين الأماميتين ثم إلى الذيل.

1.2 نموذج الفأر

طريقة بناء النموذج: يُخلط الكولاجين البقري من النوع الثاني (CII) مع مساعد فرويند غير الكامل (IFA) بكميات متساوية، ثم يُستحلب. في اليوم الأول، تُحقن الفئران داخل الجلد في مواقع متعددة، وبعد أسبوع، تُعطى جرعة معززة داخل الصفاق. يُحصل على النموذج خلال 3-7 أيام من التطعيم الثاني. بعد سبعة أيام من التحسس، تكون مفاصل الكاحل منتفخة قليلاً ومحمرة، وتزداد الأعراض سوءًا بعد 3 أسابيع، مع احتمالية ظهور تقرحات جلدية. بعد 5-6 أسابيع، تتفاقم التغيرات المرضية، مع تآكل غضروف المفصل والعظم تحت الغضروفي وتدميرهما بسبب السبل.

2 التهاب المفاصل الناجم عن العلاج المساعد (AA) (للمرجع فقط)

نموذج AA هو نموذج RA الأكثر استخدامًا على نطاق واسع، مع نوعين: مساعد فرويند غير المكتمل (IFA) ومساعد فرويند الكامل (CFA).

طريقة بناء النموذج: تُحقن الفئران داخل الجلد لإحداث الالتهاب. يُظهر النموذج عادةً أعراض التهابية مستمرة لمدة ١٠-٢٠ يومًا بعد الحقن، وتبلغ ذروتها بعد حوالي ٢٠ يومًا.يتركز الالتهاب بشكل رئيسي في مفصل الكاحل، وقد يؤثر على باطن القدم والقدم بأكملها. تتشابه أعراض تورم المفصل مع أعراض مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي السريري، ولكن قد تحدث أعراض ضعف المناعة.

3 خطوات لنمذجة التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) (للمرجع فقط)

• يتم إذابة الكولاجين البقري من النوع الثاني (CII) في محلول حمض الأسيتيك الجليدي بتركيز 2 ملغ / مل ويتم الاحتفاظ به طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
• يُضاف إلى مُساعد فرويند غير المكتمل بكتيريا السل المقتولة حرارياً بتركيز يتراوح بين 2 و5 ملغم/مل. تركيز بكتيريا السل في مُساعد فرويند 60718ES الكامل، الذي تُقدمه شركة ييشينغ بيولوجي، أقل من 10 ملغم/مل.
• يتم خلط محلول حمض الأسيتيك الكولاجيني البقري من النوع الثاني مع Complete Freund's Adjuvant بكميات متساوية ويتم استحلابه.
• يتم إعطاء كل فأر تجريبي 4-6 حقن تحت الجلد على الظهر، بإجمالي 0.1-0.2 مل.
• بعد ثلاثة أسابيع، يتم خلط مساعد فرويند غير المكتمل مع محلول حمض الأسيتيك الكولاجيني البقري من النوع الثاني بكميات متساوية ويتم استحلابه، ويتم إعطاء كل فأر 3-5 حقن تحت الجلد في قاعدة الذيل، بإجمالي 0.1-0.2 مل.

4 خطوات لنمذجة التهاب المفاصل الناتج عن العلاج المساعد (AA) (للمرجع فقط)

• قم بإعداد الكواشف ذات الصلة، مع ملاحظة إعداد المجموعات التجريبية والضابطة.
• الملاحظة والتسجيل: بشكل عام، تظهر أعراض التهاب المفاصل لدى أكثر من 80% من الفئران بعد 7-12 يومًا من التطعيم الثاني. تُصنَّف الأعراض السريرية بناءً على احمرار ونشاط مفصل الفأر، وتُسجَّل الملاحظات قبل التجربة وفي الأيام الثالث والخامس والسابع والثاني عشر بعدها، وفقًا لمعايير التقييم التالية:

الجدول 1 معايير التسجيل

سجوهر	سالأعراض
0	كان النشاط طبيعيًا، ولم تظهر عليه أي علامات احمرار أو تورم.
1	كان النشاط طبيعيًا مع احمرار الجلد فقط وعدم وجود تورم كبير.
2	يتأثر النشاط بشكل طفيف، وتظهر احمرار في المخالب أو باطن القدم أو مفصل الركبة.
3	يتأثر النشاط، وتشوه وتورم أصابع القدم والمفاصل قليلاً.
4	يتم حظر الحركة، وأصابع القدم والمفاصل حمراء ومتورمة ومتيبسة أو مشوهة بشكل خطير.

• قياس حجم الفأر: استخدم جهاز قياس حجم مخلب الفأر لقياس حجم مفصل الطرف الخلفي للفأر قبل التجربة وبعدها. قِس حجم المفصل أسفل مفصل الركبة لكل رجل خلفية على بُعد حوالي 5 مم ثلاث مرات، وسجّل متوسط ​​القيمة، بحيث يتناسب الحجم مع درجة احمرار المفصل وتورمه. يُجرى الكشف كل ثلاثة أيام.
• الفحص المرضي: يتم أخذ الفئران من المجموعة التجريبية والمجموعة الضابطة، وإزالة الجلد، وتثبيتها بالفورمالديهايد 4% لمدة تزيد عن 48 ساعة، وإزالة الكالسيوم بحمض النيتريك 5% لمدة ساعتين، وغمرها في الزيلين، ودمجها في البارافين.اصنع مقاطع بحجم 6 مم، ثم قم بتلوينها بـ HE، ثم قم بمراقبتها باستخدام مجهر ضوئي تقليدي لتحديد معيار التسجيل للتشخيص المرضي.

5 صور لحالات تجريبية (مقتطفة من الأدبيات)