يمكن تصنيف تقنية تضخيم الأحماض النووية المتساوية الحرارة إلى العديد من الأنواع بناءً على مبادئ التضخيم المختلفة. الطريقة الأكثر شيوعًا وتطبيقًا على نطاق واسع هي تقنية التضخيم المتساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) التي طورها علماء يابانيون بما في ذلك نوتومي في عام 2000. الميزة الفنية لتقنية LAMP هي تصميم أربعة بادئات تستهدف ست مناطق على الجين المستهدف، باستخدام بوليميراز الحمض النووي من النوع Bst الذي يعمل على إزاحة الخيوط لإجراء تفاعل التضخيم عند درجة حرارة ثابتة تتراوح من 60 إلى 65 درجة مئوية. وهذا يحقق معدل تضخيم 10٪.9-1010- تضخيم أضعاف خلال 15-60 دقيقة.
إن بوليميراز الحمض النووي Bst هو الإنزيم الأساسي في تقنية التضخيم الحراري المتساوي الحرارة LAMP. فهو يتمتع بثبات حراري قوي ونشاط إزاحة للخيوط ونشاط بوليميراز، مما يتيح التضخيم السريع والفعال والمحدد للقالب في ظل ظروف درجة حرارة ثابتة. وعلى عكس تفاعل البوليميراز المتسلسل، الذي يتطلب دورات تحلل حراري للتضخيم، يمكن إكمال تجربة LAMP بالكامل في غضون ساعة واحدة دون الحاجة إلى مثل هذه الدورات.
مزايا المنتج
إنزيم خالي من الجلسرين، مناسب للتجفيف بالتجميد
النقل في درجة حرارة الغرفة، مما يقلل التكاليف
نشاط إزاحة قوي للخيوط، حساس ومستقر
إعادة الترطيب السريع، سهل التشغيل
أبرز ما في الأداء
01 طريقة تطبيق الصبغة الفلورية
1. حساسية عالية وخصوصية جيدة
في نظام تضخيم الصبغة الفلورية RT-LAMP، يتوافق أداء تضخيم كعكة المسحوق المجففة بالتجميد 14405ES مع أداء إنزيم Bst السائل (بما في ذلك الجلسرين والخالي من الجلسرين)، ويمكن لكليهما الكشف بنسبة 100% عند حساسية 50 نسخة/T. الخصوصية جيدة، مع عدم الكشف في 48 بئرًا من NTC (عنصر التحكم في القالب السلبي).
2. استقرار حراري جيد
في نظام تضخيم الصبغة الفلورية RT-LAMP، خضع المسحوق المجفف بالتجميد لمعالجات تخزين عند 45 درجة مئوية لمدة 7 أيام، و45 درجة مئوية لمدة 15 يومًا، ودرجة حرارة الغرفة لمدة 19 يومًا، على التوالي. بعد التسارع الحراري، ظل أداء المنتج متسقًا مع أداء النسخة السائلة من إنزيم Bst الخالي من الجلسرين، ولم يتم ملاحظة أي ذروة في NTC (عنصر التحكم في القالب السلبي).
3. يدعم إعادة التجميد بعد التسارع
في نظام تضخيم الصبغة الفلورية RT-LAMP، خضع المسحوق المجفف بالتجميد لمعالجات تخزين عند 45 درجة مئوية لمدة 7 أيام و45 درجة مئوية لمدة 15 يومًا على التوالي. ثم خضع المسحوق المجفف بالتجميد بعد معالجة التسارع الحراري لجولة ثانية من التجميد بالتجميد (بما في ذلك إنزيم واحد وكواشف RT-LAMP). تظهر التجارب أنه بعد المعالجة المتسارعة والتجميد بالتجميد الثاني، يظل أداء المنتج متسقًا مع أداء النسخة السائلة من إنزيم Bst الخالي من الجلسرين، ولم يتم ملاحظة أي ذروة في NTC (عنصر التحكم في القالب السلبي). استقرار المنتج جيد، مما يدعم التجميد بالتجميد الثانوي والتسارع بعد التجميد بالتجميد الثانوي.
02 تطبيق طريقة قياس اللون pH
1. حساسية عالية وخصوصية جيدة
في نظام تضخيم اللون RT-LAMP pH، يمكن أن تصل حساسية تضخيم كعكة المسحوق المجففة بالتجميد 14405ES إلى 50 نسخة/T (معدل اكتشاف 100%)، وتكون الخصوصية جيدة، مع عدم وجود اكتشاف في 24 بئرًا من NTC (التحكم في القالب السلبي).
2. استقرار حراري جيد
في نظام تضخيم درجة الحموضة اللونية RT-LAMP، تم التحقق من الاستقرار المتسارع حرارياً لمسحوق 14405ES المجفف بالتجميد عند 45 درجة مئوية لمدة 15 يومًا، والاستقرار بعد التجفيف الثانوي بعد التسارع (إعادة الترطيب بعد التسارع عند 45 درجة مئوية لمدة 7 أيام)، واستقرار التخزين بعد إعادة الترطيب (مخزن عند -20 درجة مئوية لمدة 7 أيام بعد إعادة الترطيب). تشير التجارب إلى أن منتج 14405ES يتمتع بثبات جيد، دون أي تأثير على أداء المنتج بعد التسارع الحراري، ويدعم التجفيف الثانوي بعد التسارع.
توصيات المنتجات المميزة
| نوع المنتج | وظيفة المنتج | اسم المنتج | رقم الصنف |
| مزيج RT-LAMP | صبغة فلورية | مصباح RT صبغ فحص طقم (UDG) زائد) | 13762ES |
| مؤشر الرقم الهيدروجيني | مصباح RT الرقم الهيدروجيني حساس صبغ عدة | 13906ES | |
| مؤشر درجة الحموضة القابل للتجفيف بالتجميد | مصباح RT الرقم الهيدروجيني حساس صبغ كروموجيني إصدار قابلة للتجميد والتجفيف عدة | 13920ES | |
| إنزيم بي إس تي | الجلسرين | هييف® بيست زائد الحمض النووي بوليميراز (40 وحدة/ميكرولتر) | 14402ES |
| خالي من الجلسرين | مجفف بالتجميد بيست زائد الحمض النووي بوليميراز (60 وحدة/ميكرولتر، خالية من الجلسرين) | 14405ES | |
| المخزن المؤقت | المخزن الأساسي (خالي من الأصباغ وما إلى ذلك) | 10× هييف® بيست زائد الحمض النووي بوليميراز المخزن المؤقت | 15441ES |