في السنوات الأخيرة، مع التطور السريع لتقنيات البيولوجيا الجزيئية، لقد تم تأسيس طرق التشخيص القائمة على الأحماض النووية على نطاق واسع وتم تطبيقها على نطاق واسع في الاختبارات المعملية للأمراض البشرية. وبالمقارنة بتقنيات تضخيم الأحماض النووية الأخرى، فإن التضخيم المتساوي الحرارة يوفر مزايا كونه سريعًا وفعالًا ومحددًا ولا يتطلب معدات متخصصة. لذلك، منذ ظهوره، اعتبره العديد من العلماء طريقة كشف يمكن أن تنافس تفاعل البوليميراز المتسلسل.

ونتيجة لذلك، يُعتقد أن تطوير وتطبيق الأدوات والمجموعات التشخيصية القائمة على تقنية التضخيم المتساوي الحرارة سيمثل اتجاهًا جديدًا لاختبارات نقطة الرعاية (POCT) في التشخيص الجزيئي.

مقدمة لمبادئ تقنيات التضخيم المتساوي الحرارة السائدة

1. التضخيم الحراري بوساطة الحلقة

(LAMP) التكنولوجيا

مبدأ:يستخدم التضخيم المتساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) بوليميراز الحمض النووي Bst، الذي يتميز بنشاط إزاحة الخيوط. وهو يصمم أربعة أنواع من البادئات المحددة التي تستهدف ست مناطق من الجين المستهدف، مما يتيح تضخيمًا فعالًا وسريعًا ومحددًا لتسلسل الهدف في ظل ظروف متساوية الحرارة. يمكن إجراء التضخيم عند درجة حرارة ثابتة تتراوح بين 60 و65 درجة مئوية، وفي غضون 15 إلى 60 دقيقة، يتم تضخيم الحمض النووي بمقدار 10⁹ الى 10¹⁰ يمكن تحقيق الأوقات.

المزايا والتطبيقات:بسبب سرعة رد الفعل، وخصوصيته العالية، وأجهزته البسيطة وسهلة التشغيل، ونتائجه سهلة التفسير، تم تطبيق التضخيم المتساوي الحرارة في الكشف عن البكتيريا المسببة للأمراض والطفيليات والفيروسات والأمراض والمنتجات المعدلة وراثياومن المتوقع أيضًا أن يتم استخدامه على نطاق واسع في تشخيص الأمراض المعدية السريرية، ومراقبة البيئة، وسلامة الأغذية، وغيرها من المجالات. لقد أصبح طريقة مثالية مناسبة لاختبارات الرعاية الجزيئية (نقطة الاختبار) المنصات.

تصنيف:يتم تصنيف طرق الكشف عن LAMP إلى عدة أنواع، بما في ذلك قياس العكارة، وطرق مؤشر الرقم الهيدروجيني، وطرق الصبغة الفلورية (مثل NHB، والكالسين، وSYBR Green، وSyto، وما إلى ذلك)، وطرق المسبار الفلوري.

2. تقنية تضخيم بوليميراز الريكومبيناز (RPA)

مبدأ:عندما يرتبط إنزيم الريكومبيناز بالبرايمرات، فإنه يشكل معقد بروتين-حمض نووي يمكنه البحث عن تسلسلات متجانسة داخل الحمض النووي ثنائي السلسلة. وبمجرد أن تحدد البرايمرات التسلسلات المتجانسة، يحدث تفاعل تبادل السلاسل، مما يؤدي إلى تكوين وبدء تخليق الحمض النووي، مما يعمل على تضخيم المنطقة المستهدفة على القالب بشكل كبير. يرتبط خيط الحمض النووي المزاح ببروتين الربط أحادي السلسلة (SSB) لمنع المزيد من النزوح. في هذا النظام، تبدأ عملية التخليق بواسطة بادئين متعارضين، يعتمدان في المقام الأول على أنشطة إنزيم الريكومبيناز وإنزيم Bsu وبروتين الربط أحادي السلسلة. يمكن أن تحقق هذه التقنية الكشف السريع عن الهدف المطلوب في غضون 10-30 دقيقة في درجات حرارة تتراوح من 37 إلى 42 درجة مئوية.

المزايا والتطبيقات:تفتخر RPA حساسية عالية، وخصوصية قوية، واعتماد منخفض على المعدات المتخصصة، والقدرة على دمج تنسيقات الكشف المختلفة. وهي مناسبة بشكل خاص للاختبارات في نقطة الرعاية على مستوى القاعدة الشعبية وفي الإعدادات الميدانية. يمكن تطبيق RPA على نطاق واسع في التشخيص المخبري وأمراض الحيوان وسلامة الأغذية والسلامة البيولوجية والزراعة وغيرها من المجالات.

تصنيف:يتم تصنيف طرق الكشف عن RPA إلى عدة أنواع، بما في ذلك التحليل الكهربائي للهلام، وطريقة مسبار EXO، وطريقة مسبار Fpg، ومقياس التدفق الجانبي (LF-RPA)، وتحليل التخثر، وغيرها.

عرض أداء المنتج

01 كواشف RT-LAMP للصبغة الحساسة لدرجة الحموضة

يستخدم مصباح RT-LAMP الصبغة الحساسة لدرجة الحموضة (pH) صبغة بصرية كمؤشر حساس، في ظل ظروف متساوية الحرارة تتراوح بين 60 و65 درجة مئوية، لاستكمال عملية تضخيم الحمض النووي الريبي في خطوة واحدة باستخدام حمام مائي بدرجة حرارة ثابتة أو جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل القياسي. وفي غضون 30 دقيقة فقط، يمكن استخدام التغير في اللون بعد التفاعل لتحديد ما إذا كانت عدوى مسببة للأمراض موجودة، مع نتائج أكثر بديهية (النتيجة الإيجابية هي البرتقالي والأصفر، والنتيجة السلبية هي الأرجواني). هذه الطريقة مناسبة للاختبار السريع لمجموعات كبيرة من السكان.

المنتجات الموصى بها:

مجموعة صبغات RT-LAMP الحساسة لدرجة الحموضة (13906ES)
طقم تجفيف بالتجميد من RT-LAMP للصبغة الحساسة لدرجة الحموضة (13920ES)

عرض الأداء:

1.دليل اختيار مزيج RT-LAMP/RPA

تصنيف المنتج	مزيج RT-LAMP			مزيج RPA
اسم المنتج	مجموعة تحليل الصبغة RT-LAMP (UDG plus)	مجموعة الصبغات الحساسة لدرجة الحموضة RT-LAMP	مجموعة RT-LAMP للصبغة الحساسة لدرجة الحموضة والقابلة للتجفيف بالتجميد	مضخم صوت سريع الاشتعال
رقم عنصر المنتج	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
فئة المنتج	صبغة فلورية	صبغة حساسة لدرجة الحموضة	صبغة حساسة لدرجة الحموضة	مسبار
مكونات المنتج	مكونين مزيج من العازل والإنزيم	3 مكونات المخزن المؤقت، إنزيم RT، إنزيم Bst	4 مكونات مادة عازلة، إنزيم RT، إنزيم Bst، مادة واقية من التجمد	4 مكونات المخزن المؤقت، مزيج الإنزيم، أسيتات المغنيسيوم
يدعم التجفيف بالتجميد	لا	نعم، بدون مادة الحماية من التجمد	نعم، يحتوي على مادة واقية من التجمد	لا

2.دليل اختيار إنزيم LAMP/RT-LAMP

تصنيف المنتج	إنزيم بي إس تي		النسخ العكسي		إنزيم UDG
اسم المنتج	بست بلس	بيست بلس مجفف بالتجميد	Ⅲ النسخ العكسي	III النسخ العكسي، خالي من الجلسرين	يو دي جي	UDG، خالي من الجلسرين
رقم عنصر المنتج	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
نشاط الانزيم	40 وحدة/ميكرولتر	60 وحدة/ميكرولتر	200 وحدة/ميكرولتر	600 وحدة/ميكرولتر	1 وحدة/ميكرولتر	1 وحدة/ميكرولتر
مكونات المنتج	3 مكونات	2 مكونات	2 مكونات	مكون واحد	أعزب- عنصر	مكون واحد
يدعم التجفيف بالتجميد	لا	نعم	لا	نعم	لا	نعم

3. دليل اختيار إنزيم RPA

تصنيف المنتج	بسو	ت4 اكس	ت4 ي	إس إس بي	سي كيه	إكسو
اسم المنتج	بسو	T4 UvsX	T4 UvsY	جي بي 32	كرياتين كيناز	إكسونوكلياز III
رقم عنصر المنتج	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
نشاط الانزيم	5 وحدة/ميكرولتر	2 ميكروجرام/ميكرولتر	2 ميكروجرام/ميكرولتر	5 ميكروجرام/ميكرولتر	2 ميكروجرام/ميكرولتر	100 وحدة/ميكرولتر
مكونات المنتج	مكون واحد	مكون واحد	مكون واحد	مكون واحد	مكون واحد	2 مكونات
يدعم التجفيف بالتجميد	لا	لا	لا	لا	لا	لا