نقاط الاهتمام

1. طريقة التخزين: تخزين مستقر في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 إلى 6 أشهر؛ لفترات أطول، قم بالتخزين عند 4 درجة مئوية أو -20 درجة مئوية.
2. يعد DNA Marker مناسبًا لتحليل نطاقات DNA في الرحلان الكهربائي للهلام الآغاروزي ولا يُنصح باستخدامه في الرحلان الكهربائي للهلام البولي أكريلاميد.
3. اختيار تركيز الجل ومحلول العازل:

تركيز الآجاروز	مدى الفصل الفعال (bp)	المخزن المؤقت الموصى به
0.5%	2000-50000	1×تاي
0.8%	800-10000	1×تاي
1.0%	400-8000	1×تاي
1.2%	300-7000	1×تاي
1.5%	200-3000	1×TAE/0.5×TBE
2.0%	100-2000	1×TAE/0.5×TBE
3.0%	25-1000	0.5×TBE

【ملاحظة】: بالنسبة للشظايا الكبيرة، اختر هلامًا منخفض التركيز واستخدم نظام تخزين TAE للرحلان الكهربائي؛ بالنسبة للشظايا الصغيرة، اختر هلامًا عالي التركيز واستخدم نظام تخزين TBE للرحلان الكهربائي.

4. اختيار بقع الأحماض النووية:

EB (بروميد الإيثيديوم) عبارة عن صبغة فلورية شديدة الحساسية ذات طول موجة إثارة أقصى يبلغ 302 نانومتر، ويمكن استخدامها لمراقبة الأحماض النووية في هلاميات الأجاروز والبولي أكريلاميد. يتداخل بروميد الإيثيديوم مع القواعد في الأحماض النووية ومن المعروف أنه سام.

YeaRed (Cat#10202ES76) وYeaGreen (Cat#10204ES76) عبارة عن صبغات حمضية نووية جديدة غير سامة ذات بنية جزيئية زيتية فريدة لا يمكنها اختراق الأغشية الخلوية لدخول الخلايا، وليست قابلة للتطاير أو التسامي بسهولة، وبالتالي لا يستنشقها البشر، مما يضمن سلامة المجرب.كما أظهرت نتائج اختبار Ames أن YeaRed وYeaGreen لا يسببان الطفرات الجينية عند تركيزات صبغة الهلام، مما يجعلهما بديلاً آمنًا وغير سام لـ EB شديد السرطان. بالإضافة إلى ذلك، يتمتع YeaRed بنفس الخصائص الطيفية لـ EB، لذلك يمكنه استبدال EB تمامًا دون تغيير نظام التصوير الحالي.

الأسئلة والأجوبة

س1: لماذا لا تنفصل الأشرطة ذات الوزن الجزيئي العالي لعلامة الحمض النووي بشكل جيد؟

ج1: لا يرتبط الصبغ الحمضي النووي بشكل كافٍ بعلامة الحمض النووي. نظرًا لأن النطاقات ذات الوزن الجزيئي العالي تتطلب المزيد من صبغة الحمض النووي، فإذا لم تكن الصبغة مشبعة، فإن النطاقات ذات الوزن الجزيئي العالي تكون أكثر عرضة لتأثيرات الهجرة، مما يؤدي إلى السحب وسوء الفصل. يوصى بتقليل كمية علامة الحمض النووي المستخدمة (يمكن تخفيفها بالماء بمقدار 5 مرات ثم يمكن تحميل 8-10 ميكرولتر) أو زيادة تركيز صبغة الحمض النووي.

س2: لماذا لا توجد نطاقات أو نطاقات ضعيفة للحمض النووي؟

أ2:

1. عدم كفاية تحميل الحمض النووي، زيادة الكمية المحملة؛
2. لقد نفذ شريط الحمض النووي من الهلام؛
3. يتم إخفاء شريط الحمض النووي بواسطة الصبغة المتتبعة؛
4. لم تتم إضافة صبغة الحمض النووي إلى الهلام؛
5. لقد تم ترك هلام الآغاروز لفترة طويلة، لذا يوصى بتحضيره واستخدامه على الفور.

س3: لماذا تنتشر أشرطة علامة الحمض النووي؟

أ3:

1. التحلل الجزئي للحمض النووي، والتحقق مما إذا كانت ظروف التخزين دافئة جدًا؛
2. الجهد أثناء الرحلان الكهربائي منخفض للغاية، مما يتسبب في انتشار نطاقات الحمض النووي. يوصى بتشغيل الجل عند 110 فولت - 130 فولت الخامس لأكثر من 45 دقيقة؛
3. تركيز هلام الآجار غير مناسب، قم بالتحضير وفقًا لتركيز الهلام الموصى به في الدليل؛
4. جودة هلام الآغاروز رديئة، لذا ينصح بتحضير هلام جديد.

س4: لماذا تبدو نطاقات العينة ذات أحجام مختلفة مقارنة بنطاقات علامة الحمض النووي؟

أ4:

1. لا يرتبط هجرة الحمض النووي بالحجم الفعلي فحسب، بل يرتبط أيضًا بما إذا كان مدمجًا مع البروتينات وحالة الأيونات وبنية الحمض النووي والهلام وعوامل أخرى. يرتبط معدل الهجرة الكهربية للأحماض النووية بنسبة الحمض النووي/الصبغة، وعندما تكون كمية صبغة الحمض النووي غير كافية، فقد يؤدي ذلك إلى أخطاء أكبر في معدل الهجرة؛
2. إذا كانت العينة تحتوي على تركيز عالي من أيونات الملح، فقد تتسبب أيضًا في حدوث أخطاء كبيرة في الهجرة؛
3. إذا كانت كمية العينة المحملة تختلف بشكل كبير عن كمية نطاقات علامة الحمض النووي أو إذا كانت الأحجام تختلف بشكل كبير، فقد يؤدي ذلك أيضًا إلى حدوث أخطاء هجرة أكبر.

معلومات الطلب

التوجه نحو المنتج	اسم المنتج	رقم المنتج	تحديد
علامة الحمض النووي	علامة الحمض النووي GoldBand DL2000	10501ES60/80	100 ت/10×100 ت
	جهاز تحديد الحمض النووي GoldBand DL5000	10504ES60/80	100 ت/10×100 ت
	سلم الحمض النووي GoldBand 100bp	10507ES60/80	100 ت/10×100 ت
	سلم DNA GoldBand 1 كيلو بايت	10510ES60/80	100 ت/10×100 ت