لتوفير المزيد من خيارات العلاج لمرضى السكري، ظهرت بعض أدوية السكري الجديدة في أوائل القرن الحادي والعشرين، مثل نظائر الببتيد الشبيه بالجلوكاجون-1 (GLP-1). وقد ثبت في العديد من الدراسات السريرية أن سيماجلوتيد، كأحد الأدوية التمثيلية لنظائر الببتيد الشبيه بالجلوكاجون-1، يتحكم بشكل فعال في نسبة السكر في الدم عند دمجه مع أدوية مختلفة خافضة للسكر عن طريق الفم، ويمكن أن يساعد المرضى على إنقاص الوزن، وخفض ضغط الدم الانقباضي، وتحسين وظيفة خلايا بيتا البنكرياسية. تجاوزت صيغته الثلاث (حقنة خافضة للسكر أوزيمبيك، وعقار خافض للسكر عن طريق الفم ريبيلسوس، وحقنة إنقاص الوزن ويجوفي) مبيعات بلغت 20 مليار دولار في عام 2023. ونظرًا لأدائه المتميز في خفض نسبة السكر في الدم وفقدان الوزنويتوقع القطاع أن يحافظ سيماجلوتيد على زخم مبيعات قوي لبعض الوقت، ما يجذب العديد من الشركات للتنافس على التصميم!
البنية الأساسية لسلسلة سيماجلوتيد هي بولي ببتيد وسيط يحتوي على 29 حمضًا أمينيًا من نوع Arg34GLP-1(9-37) أو بولي ببتيد وسيط يحتوي على 27 حمضًا أمينيًا من نوع Arg34GLP-1(11-37). يتضمن إنتاج وتصنيع هذا البولي ببتيد الوسيط بشكل أساسي طرق التخليق الكيميائي والتحضير الحيوي. وبالمقارنة مع التخليق الكيميائي، فقد اخترق التحضير الحيوي عنق الزجاجة في السعة وهو أكثر ملاءمة للإنتاج المستمر على نطاق واسع، مما يمكن أن يقلل بشكل أكبر من تكاليف الإنتاج ويجلب فوائد اقتصادية أكثر أهمية.
الجدول 1. أمثلة على طرق التحضير الحيوي للببتيدات الوسيطة للسيماجلوتيد
| طريقة التحضير الحيوي (مثال 1)
| طريقة التحضير الحيوي (مثال 2)
| |
| تخليق الجينات | تخليق تسلسل بروتين الاندماج، بما في ذلك ببتيد الاندماج، وموقع انقسام الإنتيروكيناز، وتسلسل الجزيء الرئيسي المستهدف | تخليق تسلسل تعبير مترادف مع تسلسل جين GLP-1(9-37) |
| هندسة البكتيريا البناء | إدخاله في البكتيريا القولونية لبناء بكتيريا معدلة وراثيًا | إدخاله في البكتيريا القولونية لبناء بكتيريا معدلة وراثيًا |
| التعبير عن البروتين المندمج | من خلال تحسين تسلسل ببتيد الاندماج، وتغيير نقطة التساوي الكهربائي وحب البروتين للماء، وما إلى ذلك، يتم زيادة التعبير عن بروتين الاندماج بشكل فعال
| بعد تحريض التخمير عالي الكثافة، يتم الحصول على بروتين تضمين التعبير المترادف الذي يعبر عن GLP-1(9-37)، ويؤدي إعادة الطي إلى إنتاج بروتين قابل للذوبان |
| الاستحواذ على الببتيد الوسيط | بعد أن يخضع بروتين الاندماج لانقسام الإنتيروكيناز والتطهير وخطوات أخرى، يمكن الحصول على بولي ببتيد السيماجلوتيد الوسيط Arg34GLP-1(9-37) | يمكن الحصول على البروتين القابل للذوبان بعد الخضوع لعملية انقسام إنزيمي من خطوتين باستخدام إنزيم Kex2 وكاربوكسي ببتيداز B، وخطوات التنقية، للحصول على بولي ببتيد وسيط سيماجلوتيد GLP-1(9-37) |
إن إنزيم إنتروكيناز أو Kex2 المدمج مع كاربوكسي ببتيداز B هو إنزيم رئيسي للسلسلة الببتيدية الرئيسية للسيماجلوتيد (طريقة التحضير الحيوي)، كما أن تأثير قطع الإنزيم والتكلفة أمران حاسمان للإنتاج.تلتزم شركة Yisheng Biology بتوفير المواد الخام المستقرة للإنزيمات لشركات الأدوية، وتقديم إنزيمات عالية الجودة ومعايير مراقبة الجودة الكاملة لمساعدة العملاء على تحسين القدرة الإنتاجية واستقرار الدفعة، وخفض التكاليف، والدخول بسرعة السوق.
ياسين الحل الشامل لـ سيماجلوتيد
1.إنتيروكيناز معاد التركيب
إنتيروكيناز معاد التركيب (rEK) هي وحدة فرعية خفيفة من سلسلة إنتيروكيناز الأمعاء البقرية عالية النقاء، والتي لها نفس نشاط إنزيم القطع المحدد مثل إنتيروكيناز المستخرج بشكل طبيعي، مع موقع قطع Asp-Asp-Asp-Asp-Lys، القادر على إزالة بروتين الاندماج الموجود في الطرف الأميني للبروتين لإزالة علامات الاندماج غير الضرورية، وهي عبارة عن بروتياز يتم اختياره بشكل شائع للاندماج الطرفي الأميني. لديها مستوى منخفض من القطع غير المنتظم على البقايا الأخرى.
تقدم شركة Yisheng حاليًا إنتيروكينازات معاد تركيبها من مصادر مختلفة ودرجات مختلفة، وسواء كانت تحمل علامات His أم لا للعملاء للاختيار من بينها.
ياسين المعاد تركيبه بقري يعتبر إنتيروكيناز His المعبر عنه في الخميرة عبارة عن إنتيروكيناز بقري عالي النقاء وعالي النشاط وعالي التحديد يتم التعبير عنه عن طريق إفراز Pichia pastoris. يمكنه تقسيم البروتينات المندمجة بفعالية ضمن نطاق واسع من الأس الهيدروجيني (4.5-9.5) ونطاق واسع من درجات الحرارة، ولا يزال له نشاط جزئي تحت مختلف المنظفات والمذيبات. يحتوي هذا المنتج على علامة His، والتي يمكن إزالتها بسهولة من خلال Ni2+ عمود التقارب بعد تفاعل القطع، مما يبسط إلى حد كبير عملية التنقية اللاحقة.
سمات
خصوصية عالية: بروتياز محدد يقطع الطرف الكربوكسيلي لليسين يحتوي على أربعة أحماض أسبارتيكية: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys؛
نقاء عالي: لا يوجد أي بروتيازات أخرى، ولا قطع غير محدد؛
لا يوجد أصل حيواني: الإنتاج المعاد التركيب، وعدم وجود تلوث فيروسي خارجي، وعدم استخدام أي مواد خام مشتقة من الحيوانات في عملية الإنتاج؛
جودة مستقرة: يمكن أن يضمن الإنتاج بالدفعات إنتاجًا مستقرًا ومستمرًا للدفعات؛ لا توجد اختلافات من دفعة إلى أخرى، جودة مستقرة؛
القدرة الكافية: يمكن لمخمر سعة 500 لتر الحصول على ~50 MU من إنتيروكيناز، تمتلك Yeasen مخمرات ذات أنظمة مختلفة سعة 5 لتر إلى 1500 لتر لتلبية متطلبات العملاء المختلفة في مراحل مختلفة لمتطلبات دفعة المنتج؛
توريد منتجات بدرجات مختلفة: تتوافق المنتجات الحاصلة على درجة البحث والتطوير (20395ES)، ودرجة GMP (20396ES)، ودرجة GMP مع نظام إدارة الجودة ISO 13485.
بيانات الاختبار
اختبار نشاط الانتروكيناز:
الشكل 1. تأثير القطع الإنزيمي ياسين إنتيروكيناز (20395ES) متوافق مع المتنافس ن
ملاحظة: الركيزة الإيجابية (20391ES) عبارة عن بروتين اندماجي يتكون من تسلسلين بروتينيين محددين متصلين بواسطة DDDDK (موقع التعرف على الإنتيروكيناز والقطع)، بوزن جزيئي إجمالي يبلغ حوالي 64.6 كيلو دالتون، والذي يمكن قطعه بشكل خاص إلى قطعتين بروتينيتين مستقلتين بواسطة الإنتيروكيناز، بوزن جزيئي يبلغ حوالي 27.9 كيلو دالتون و36.6 كيلو دالتون على التوالي. يمكن استخدام هذا المنتج، كركيزة إنتيروكيناز، للكشف عن النشاط الإنزيمي شبه الكمي أو النوعي للإنتروكيناز المؤتلف أو الطبيعي.
اختبار نقاء الانتيروكيناز:
ملاحظة: القيمة النظرية لإنتروكيناز هي 22.7 كيلو دالتون. وبسبب تأثير الجليكوزيل بعد التعبير في Pichia pastoris، يظهر SDS-PAGE أن الوزن الجزيئي للبروتين المستهدف يبلغ حوالي 40 كيلو دالتون. بشكل عام، سيكون للأشرطة الجليكوزيلية شريط منتشر قليلاً يمتد إلى الأعلى (كما هو موضح في الشكل الأيمن). يمكن لشركتنا أيضًا توفير إنزيم إزالة الجليكوزيل Endo H (رقم الكتالوج 20414) للعملاء لإزالة الجليكوزيل وتشغيل الجل لقياس النقاء (كما هو موضح في الشكل الأيسر).
اختبار خصوصية قطع الإنتيروكيناز:
الشكل 3. ياسين إن إنتيروكيناز (20395ES) لديه قطع غير محدد أقل من المنافس المستورد N
ملحوظة: في ظل نفس الظروف، ياسين تم استخدام إنتيروكيناز (20395ES) وإنتيروكيناز المنافس المستورد N's لاختبارات القطع الإنزيمية. تظهر النتائج أنه بعد التنقية، تم إزالة شوائب القطع غير النوعية التي تنتجها ياسين إن إنتيروكيناز (20395ES) أقل بشكل ملحوظ من تلك الموجودة لدى المنافس المستورد N.
اختبار الاستقرار المتسارع للتجميد والذوبان المتكرر للإنتروكيناز:
الشكل 4. ياسين يُظهر اختبار الاستقرار المتسارع للتجميد والذوبان المتكرر للإنتروكيناز (20395ES) أن نشاط الإنزيم لم يتغير بشكل كبير.
ملاحظة: قام Yeasen enterokinase (20395ES) باختيار دفعتين عشوائيًا، وكرر عملية التجميد والتذويب 10 مرات، و20 مرة، ولم يتغير نشاط الإنزيم بشكل كبير عن نشاط الإنزيم الأولي.
التخزين عند 25 درجة مئوية لمدة 7، 16، 32 يومًا، و37 درجة مئوية لمدة 7، 14 يومًا، لم يتغير نشاط الإنزيم بشكل كبير عن نشاط الإنزيم الأولي.
2. إنزيم Kex2 المعاد تركيبه، كاربوكسي ببتيداز ب
الجدول 2. دليل اختيار منتج إنزيم Yeasen Recombinant Kex2، كاربوكسي ببتيداز بي
| رقم المنتج | 20418ES | 20417ES |
| منتج اسم | بروتياز Kex2 المعاد تركيبه، المعبر عنه في الخميرة
| CPB المعاد تركيبه، المعبر عنه في E.coli
|
| درجة المنتج | درجة GMP | درجة GMP |
| مصدر | التعبير المؤتلف من نبات Pichia pastoris | التعبير المعاد التركيب من E. كولاي |
| نشاط | ≥10.0 وحدة/ملغ
| ≥170 وحدات USP/ملجم
|
| موقع الانقسام | يتعرف بشكل خاص على الروابط الببتيدية ويقطعها عند الطرف الطرفي للحمض الكربوكسيلي للأحماض الأمينية ثنائية القاعدة مثل Arg-Arg وLys-Arg | يقوم على وجه التحديد بتحليل البروتينات الموجودة على الجانب الأميني الطرفي للأحماض الأمينية الأساسية (الليسين والأرجينين والهيستيدين) عند الطرف الطرفي C |
| تطبيق المنتج | 1. عملية انقسام الإنزيم في إنتاج الأدوية الببتيدية. 2. الهضم الأنزيمي للبروتينات ورسم الخرائط الببتيدية والتسلسل وما إلى ذلك. | 1. إنتاج الأنسولين المعاد تركيبه ونظائره. 2.تحديد الأحماض الأمينية في الطرف الطرفي للبروتينات. 3. إزالة علامات الهيستيدين في الطرف الطرفي C للبروتينات. 4. إنتاج مواد ببتيدية معاد تركيبها أخرى. 5. التركيب الأنزيمي لبعض المركبات الخاصة. |
إنزيم Kex2 مقترنًا بكاربوكسي ببتيداز B: متطلبات عملية التعبير المترادف، إنتاجية عالية من السيماجلوتيد الوسيط بعد قطع الإنزيم
يخفف قاعدة إنتاج إنزيم من الدرجة GMP
قاعدة إنتاج إنزيمات جزيئية فائقة النظافة معتمدة من ISO - UCF.MEمجهزة بمعدات تنقية وتحليل فيزيائي كيميائي من الدرجة الصناعية من AKTA، ووحدات تخمير عالية الكثافة بسعة مائة لتر، وورش عمل نظيفة بمعايير عشرة آلاف درجة، وخطوط إنتاج آلية. تمتلك أنظمة تخمير وتنقية بمواصفات مختلفة، بما في ذلك 5 لتر، و10 لتر، و30 لتر، و100 لتر، و500 لتر، و1500 لتر، مع القدرة على زيادة الإنتاج من 5 لتر إلى 1500 لتر في مجال تصنيع الإنزيمات الجزيئية، وتلبية احتياجات المواد الخام الأساسية للإنزيمات للعملاء في المراحل المختلفة مثل البحث والتطوير، والنطاق التجريبي، والإنتاج على نطاق واسع.
تتمتع شركة Yeasen بفريق قوي للبحث والتطوير وقاعدة إنتاج إنزيمات متقدمة، مما يحسن باستمرار جودة وقدرة الإنزيمات الرئيسية لإنتاج السيماجلوتيد (إنتيروكيناز معاد التركيب) من خلال الابتكار التكنولوجي المستمر والتحسين، وتقديم أسعار متدرجة لمواصفات مختلفة لتلبية الاحتياجات المختلفة للعملاء في مراحل الإنتاج المختلفة.
معلومات المنتج الترويجي
| اسم المنتج | رقم المنتج | مواصفة | سعر القائمة($) | الترويجية السعر($) |
| إنتيروكيناز البقري المعاد تركيبه، His، المعبر عنه في الخميرة | 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 يو/500 يو/ 5000 و/ 100 وحدة دولية/ 1 وحدة قياس (1000 وحدة قياس) | 45/115/ 825/ 12000/ 360000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
معلومات المنتج ذات الصلة
| اسم المنتج | رقم المنتج | مواصفة |
| 20391ES03/11 | 1 ملغ/ 4 ملجم | |
| بروتياز Kex2 المعاد تركيبه، المعبر عنه في الخميرة | 20418ES60 | 100 ميكروجرام |
| 20417ES03/10 | 1 ملغ/10 ملغ | |
| 20414ES92/97 | 10000 وحدة/50000 وحدة |