Introduktion til makrofager
Opdagelsen af makrofager går tilbage til 1882, da biolog Ellie Metchnikoff opdagede dem, mens han studerede primitive dyr, der manglede adaptive immunmekanismer og omtalte disse celler som fagocytter. Makrofager er en heterogen gruppe af immunceller med en høj grad af plasticitet og en række funktioner, herunder vævsudvikling og homeostase in vivo, fjernelse af celleaffald, eliminering af patogener og modulering af inflammatoriske responser. Forskellige inducerende signaler kan aktivere makrofager for at ændre deres egen morfologi og fysiologiske karakteristika.
Fig. 1 makrofagoprindelse
Ved at låne konceptet med hjælper-T-celler (Th), er makrofagaktiveringstilstanden sædvanligvis forenklet med hensyn til aktiveringsmodalitet i to kategorier: klassisk aktiverede makrofager, CAM'er og alternativt aktiverede makrofager, AAM'er. M1-makrofager producerer pro-inflammatoriske cytokiner, som modstår patogeninvasion, men også forårsager organismeskader; M2-makrofager udskiller anti-inflammatoriske cytokiner og spiller en rolle i vævsreparation og -rekonstruktion og tumordannelse.
Fig. 2 Forskellige fænotyper, celleoverflademarkører og makrofagers funktioner
Det er værd at bemærke, at de to makrofagfænotyper ikke er absolut antagonistisk differentierede, dvs. M1- og M2-fænotyperne er ikke gensidigt udelukkende, men eksisterer ofte sammen, og kan derfor ikke blot betragtes som fuldstændigt adskilte makrofagpopulationer. Makrofager polariseringsmarkører udtrykkes sædvanligvis på forskellige niveauer på makrofager af forskellige fænotyper, og makrofager af forskellige fænotyper kan undergå interkonversion under visse betingelser. Ved sårheling in vivo udviser makrofager en pro-inflammatorisk M1-sekretionsprofil i den tidlige fase, med en høj kapacitet til at præsentere antigener og producere interleukinerne IL-12 og IL-23, som hæmmer celleproliferation og forårsager vævsskade, mens makrofager i den sene helingsfase skifter til en anti-inflammatorisk M2-genekspressionsprofil, og som fremmer sårheling i angiogen-genekspressionsprofilen, såsom TGF-β, VEGF og EGF og så videre. aftage og sårheling.
Fig. 3 Mekanismer for store makrofagaktiveringsfænotyper i vævsreparation, regenerering og fibrose
In vivo undersøgelse
Makrofager er de eneste celler, der er til stede i hvert organ i kroppen og findes i epidermis, hornhinden og det indre af leddene uden blodkar, og en af de vigtigste metoder til at studere deres in vivo-biologi er makrofagudtømning. In vivo makrofagudtømning er en metode til at fjerne makrofager ved hjælp af fysisk-kemiske eller genetiske teknikker. Denne metode er nu meget brugt til at studere makrofagers rolle i dyresygdomsmodeller og til at studere mekanismerne for immunopatologi eller inflammatoriske skader, såsom inflammatoriske sygdomme: allergisk astma, diabetes, fedme, åreforkalkning, autoimmune sygdomsrelaterede undersøgelser; og andre sygdomsområder: tumorer, virus-associerede sygdomme, vævsregenerering og andre relaterede undersøgelser. Clodronatliposommetoden er i øjeblikket den mest almindeligt anvendte metode til makrofagudtømning.
Clodronatliposomer
Siden Prof. Nico van Rooijen med succes udviklede et Clodronate Liposomes in vivo situation cellefjernelsesmiddel ved at bruge makrofag endocytose mekanismen til at bringe clodronat ind i cellen, hvor chlorophosphorsyre frigives, hvilket kan udløse makrofagapoptose, når en vis koncentration nås, og dermed opnå formålet med makrofagfjernelse.Dette reagens er blevet meget brugt som det mest modne og bekvemme værktøj til fjernelse af makrofager i verden.
Fig. 4 Skematisk diagram af makrofag-clearance-princippet
Forskellige organisationers tilgange (kun til orientering)
| Organ/makrofager | Dosering (20-25 g/mus) |
| Milt / røde pulp makrofager | Enkeltdosis: 200 µl/mus (IV eller IP). |
| Lever/kufferceller | Enkeltdosis: 200 µl/mus (IV eller IP). |
| Lunge/alveolære makrofager | IV (150-200 µl) kombineret med intratracheal eller intranasal (50 µl) giver de bedste resultater. |
| lymfeknude | Injektion (100-200 µl)/mus, specifikke doseringsregimer kan findes i litteraturen. |
| Hjerne/mikroglia | Intracerebroventrikulær indtræden i cerebrospinalvæske, 10 µl/mus, 50 µl/rotte. |
| Blod/monocytter | 150-200 µl/mus (IV), Maksimal udtømningshastighed nås inden for 24 timer, men maksimal udtømningshastighed efter 1-7 dage er belastningsafhængig. |
Produktanbefaling
| Produktnavn | Varenummer | Specifikation |
| 40337ES08 | 5 ml | |
| 40337ES10 | 10 ml | |
| 40338ES08 | 5 ml | |
| 40338ES10 | 10 ml |