Isotermisk nukleinsyreamplifikationsteknologi kan kategoriseres i mange typer baseret på forskellige amplifikationsprincipper. Den mest almindelige og udbredte metode er Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) teknologien udviklet af japanske forskere, herunder Notomi i 2000. Det tekniske træk ved LAMP er designet af fire primere, der er målrettet mod seks regioner på målgenet, ved at bruge en streng-fortrængende type Bst DNA polymerase til at udføre amplifikationsreaktionen ved en konstant temperatur på ~65°C. Dette opnår en 109-1010-fold amplifikation inden for 15-60 minutter.
Bst DNA-polymerasen er kerneenzymet i LAMPs isotermiske amplifikationsteknologi. Den har stærk termisk stabilitet, strengforskydningsaktivitet og polymeraseaktivitet, hvilket muliggør hurtig, effektiv og specifik amplifikation af skabelonen under konstante temperaturforhold. I modsætning til PCR, som kræver termiske denatureringscyklusser til amplifikation, kan hele LAMP-eksperimentet afsluttes inden for en time uden behov for sådanne cyklusser.
Produktfordele
Glycerolfrit enzym, velegnet til lyofilisering
Omgivelsestemperaturtransport, hvilket reducerer omkostningerne
Stærk trådforskydningsaktivitet, følsom og stabil
Hurtig rehydrering, nem at betjene
Præstationshøjdepunkter
01 Fluorescerende farvemetode Anvendelse
1, Høj følsomhed og god specificitet
I RT-LAMP fluorescerende farveamplifikationssystemet er amplifikationsydelsen af den frysetørrede pulverkage 14405ES i overensstemmelse med den for det flydende Bst-enzym (inklusive glycerol og glycerolfri), og begge kan detektere 100 % ved en følsomhed på 50 kopier/T. Specificiteten er god, uden påvisning i 48 brønde af NTC (Negative Template Control).
2、 God termisk accelereret stabilitet
I RT-LAMP fluorescerende farveamplifikationssystemet blev det lyofiliserede pulver udsat for opbevaringsbehandlinger ved henholdsvis 45°C i 7 dage, 45°C i 15 dage og stuetemperatur i 19 dage. Efter termisk acceleration forblev produktets ydeevne i overensstemmelse med den flydende version af glycerolfrit Bst-enzym, og der blev ikke observeret nogen top i NTC (Negative Template Control).
3、 Understøtter genfrysning efter acceleration
I RT-LAMP fluorescerende farveamplifikationssystemet blev det lyofiliserede pulver underkastet opbevaringsbehandlinger ved 45°C i henholdsvis 7 dage og 45°C i 15 dage. Det lyofiliserede pulver efter termisk accelerationsbehandling blev derefter underkastet en anden lyofiliseringsrunde (inklusive enkelt enzym og RT-LAMP reagenser). Eksperimenter viser, at efter den accelererede behandling og den anden lyofilisering forbliver produktets ydeevne i overensstemmelse med den flydende version af glycerolfrit Bst-enzym, og der blev ikke observeret nogen top i NTC (negativ skabelonkontrol). Produktets stabilitet er god, hvilket understøtter sekundær lyofilisering og acceleration efter sekundær lyofilisering.
02 pH Kolorimetrisk Metode Anvendelse
1, Høj følsomhed og god specificitet
I det RT-LAMP pH kolorimetriske amplifikationssystem kan amplifikationsfølsomheden af den frysetørrede pulverkage 14405ES nå 50 kopier/T (100 % detektionshastighed), og specificiteten er god, uden påvisning i 24 brønde af NTC (Negative Template Control).
2、 God termisk accelereret stabilitet
I det RT-LAMP pH kolorimetriske amplifikationssystem blev den termisk accelererede stabilitet af det frysetørrede pulver 14405ES undersøgt ved 45°C i 15 dage, stabiliteten efter sekundær frysetørring efter acceleration (rehydrering efter acceleration ved 45°C i 7 dage) og opbevaringsstabiliteten efter rehydrering i -70 dage (opbevaringsstabilitet efter rehydrering). Eksperimenterne indikerer, at 14405ES-produktet har god stabilitet, uden indvirkning på produktets ydeevne efter termisk acceleration, og understøtter sekundær frysetørring efter acceleration.
Udvalgte produktanbefalinger
| Produkttype | Produkt funktion | Produktnavn | Varenummer |
| RT-LAMPE Mix | Fluorescerende farvestof | RT-LAMPE Farvestof Assay Kit (UDG Plus) | 13762ES |
| pH-indikator | RT-LAMPE pH Følsom Farvestof Kit | 13906ES | |
| Lyofiliserbar pH-indikator | RT-LAMPE pH Følsom Farvestof Kromogent Version Frysetørreligt Kit | 13920ES | |
| Bst enzym | Glycerol | Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) | 14402ES |
| Glycerol-fri | Lyofiliseret Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL, Glycerol-fri) | 14405ES | |
| Buffer | Basic Buffer (fri for farvestoffer osv.) | 10× Hieff® Bst Plus DNA Polymerase Buffer | 15441ES |