I de senere år, med den hurtige udvikling af molekylærbiologiske teknikker, nukleinsyre-baserede diagnostiske metoder er blevet omfattende etableret og bredt anvendt i laboratorietestning af humane sygdomme. Sammenlignet med andre nukleinsyreamplifikationsteknikker tilbyder isotermisk amplifikation fordelene ved at være hurtig, effektiv og specifik og kræver ikke specialudstyr. Derfor er det siden dets fremkomst blevet betragtet af mange forskere som en detektionsmetode, der potentielt kunne konkurrere med PCR.

Som et resultat antages det, at udviklingen og anvendelsen af ​​diagnostiske instrumenter og kits baseret på isotermisk amplifikationsteknologi vil repræsentere en ny retning for Point-of-Care Testing (POCT) inden for molekylær diagnostik.

Introduktion til principperne for almindelige isotermiske amplifikationsteknologier

1、Sløjfemedieret isotermisk forstærkning

(LAMPE) Teknologi

Princip:Loop-medieret isotermisk amplifikation (LAMP) anvender Bst DNA-polymerase, som har strengforskydningsaktivitet. Den designer fire typer specifikke primere, der målretter mod seks regioner af målgenet, hvilket muliggør effektiv, hurtig og specifik amplifikation af målsekvensen under isotermiske forhold. Amplifikationen kan udføres ved en konstant temperatur på 60-65°C, og inden for 15-60 minutter kan en nukleinsyreamplifikation på 10⁹ til 10¹⁰ tider kan nås.

Fordele og anvendelser:Pga dets hurtige reaktion, høje specificitet, enkle og lette at betjene udstyr og resultater, der er lette at fortolke, er isotermisk amplifikation blevet anvendt til påvisning af patogene bakterier, parasitter, vira, sygdomme og genetisk modificerede produkter. Det forventes også at blive brugt i vid udstrækning inden for klinisk diagnosticering af infektionssygdomme, miljøovervågning, fødevaresikkerhed og andre områder. Det er blevet en ideel metode, der er velegnet til molekylær Point-of-Care-testning (POCT) platforme.

Klassifikation:LAMP-detektionsmetoder er klassificeret i flere typer, herunder turbidimetri, pH-indikatormetoder, fluorescerende farvestofmetoder (såsom NHB, calcein, SYBR Green, Syto osv.) og fluorescerende probemetoder.

2、Recombinase Polymerase Amplification (RPA) teknologi

Princip:Når rekombinaseenzymet er bundet til primere, danner det et protein-DNA-kompleks, der kan søge efter homologe sekvenser i dobbeltstrenget DNA. Når først primerne har lokaliseret de homologe sekvenser, sker der en strengudvekslingsreaktion, hvilket fører til dannelse og initiering af DNA-syntese, som eksponentielt amplificerer målregionen på skabelonen. Den fortrængte DNA-streng binder til enkeltstrengsbindende (SSB) protein for at forhindre yderligere forskydning. I dette system initieres en syntesehændelse af to modsatrettede primere, primært afhængige af aktiviteterne af rekombinasen, Bsu-enzymet og SSB-proteinet. Teknologien kan opnå hurtig detektion af målet af interesse inden for 10-30 minutter ved temperaturer fra 37 til 42°C.

Fordele og anvendelser:RPA kan prale af høj sensitivitet, stærk specificitet, lav afhængighed af specialiseret udstyr, og evnen til at integrere forskellige detektionsformater. Det er særligt velegnet til point-of-care test på græsrodsniveau og i markmiljøer. RPA kan anvendes bredt inden for in vitro-diagnostik, dyresygdomme, fødevaresikkerhed, biosikkerhed, landbrug og andre områder.

Klassifikation:RPA-detektionsmetoder er kategoriseret i flere typer, herunder gelelektroforese, EXO-probemetode, Fpg-probemetode, lateral flow dipstick (LF-RPA) og flokkuleringsanalyse, blandt andre.

Produkt Performance Showcase

01 pH-følsomt farvestof RT-LAMP-reagenser

pH Sensitive Dye RT-LAMP bruger et visuelt farvestof som en følsom indikator under isotermiske forhold på 60-65 ℃ til at fuldføre et-trins RNA-nukleinsyreamplifikation ved hjælp af et vandbad med konstant temperatur eller en standard PCR-maskine. På kun 30 minutter kan farveændringen efter reaktionen bruges til at bestemme, om der er en patogeninfektion til stede, med mere intuitive resultater (positivt er orange-gul, negativt er magenta). Denne metode er velegnet til hurtig test af store populationer.

Anbefalede produkter:

RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit（13906ES）
RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version frysetørreligt sæt (13920ES)

Performance Showcase:

1.RT-LAMPE/RPA mix Valgvejledning

Produktklassificering	RT-LAMPE blanding			RPA blanding
Produktnavn	RT-LAMP Dye Assay Kit (UDG plus)	RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit	RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version frysetørreligt sæt	Quick Fuse forstærker
Produktets varenummer	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Produktkategori	Fluorescerende farvestof	pH-følsomt farvestof	pH-følsomt farvestof	sonde
Produktkomponenter	2 komponenter Buffer, enzymblanding	3 komponenter Buffer, RT Enzyme, Bst Enzyme	4 komponenter Buffer, RT Enzyme, Bst Enzyme, Lyoprotectant	4 komponenter Buffer、Enzymblanding、Magnesiumacetat
Understøttet frysetørring	Ingen	Ja, uden Lyoprotectant	Ja, Indeholder Lyoprotectant	Ingen

2.LAMPE/RT-LAMP Enzymvalgsvejledning

Produktklassificering	Bst enzym		Omvendt transkriptase		UDG enzym
Produktnavn	Bst Plus	Lyofiliseret Bst Plus	Ⅲ Omvendt transkriptase	III omvendt transkriptase, Glycerol-fri	UDG	UDG, Glycerol-fri
Produktets varenummer	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Enzym aktivitet	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
Produktkomponenter	3 komponenter	2 komponenter	2 komponenter	enkeltkomponent	enkelt- komponent	enkeltkomponent
Understøttet frysetørring	Ingen	Ja	Ingen	Ja	Ingen	Ja

3、RPA Enzyme Selection Guide

Produktklassificering	Bsu	T4 X	T4 Y	SSB	CK	EXO
Produktnavn	Bsu	T4 UvsX	T4 UvsY	gp 32	Kreatinkinase	Exonuklease III
Produktets varenummer	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Enzym aktivitet	5 U/μL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 U/μL
Produktkomponenter	enkeltkomponent	enkeltkomponent	enkeltkomponent	enkeltkomponent	enkeltkomponent	2 komponenter
Understøttet frysetørring	Ingen	Ingen	Ingen	Ingen	Ingen	Ingen