--- Eliminering af baggrundsbakteriel interferens og RNase-kontamination
i patogendetektion i ét hug!
RNase-hæmmer (RNase-hæmmer, forkortet som RNasin) er i stand til specifikt at binde til RNase gennem ikke-kovalente interaktioner for at danne et kompleks, hvorved RNase inaktiveres og RNA's integritet bevares. Det er meget brugt i patogendetektionsmetoder såsom RT-qPCR, mNGS og tNGS. Under påvisningen af patogener er det afgørende at nøje kontrollere den bakterielle baggrundskontamination af molekylære enzymer; hvis molekylære enzymer interfereres med baggrundsbakterier, kan de overskygge lav-abundance målnukleinsyrer eller blive påvist sammen med dem, og derved påvirke fortolkningen af resultaterne.
Yeasen Ultra-Low Residual RNase Inhibitor
Yeasen UCF.ME® murin RNase-hæmmer (kat#14672ES/14673ES/14674ES) er en rekombinant muse-afledt RNase-hæmmer udtrykt og oprenset i en opløselig form fra E. coli. Det har evnen til bredt at inhibere forskellige typer af RNaser, herunder RNase A, B og C. Dette produkt er blevet testet med RT-PCR og RT-qPCR og har vist sig at være kompatibelt med konventionelle reverse transkriptaser og en række forskellige DNA-polymeraser. Sammenlignet med humant afledte RNase-hæmmere mangler Yeasen UCF.ME® Murine RNase-hæmmer de to cysteinrester, der er meget følsomme over for oxidation i humane proteiner, og tilbyder dermed højere antioxidantaktivitet. Det er særligt velegnet til eksperimenter, der er følsomme over for høje DTT-koncentrationer, såsom qPCR.
Yeasen UCF.ME® Murine RNase-hæmmer udviser desuden lavere restniveauer af genomisk værts-DNA, hvilket hjælper med at adressere bakteriel baggrundsinterferens i patogendetektion og øger nøjagtigheden af detektion.
Produktegenskaber
- Ultra-lav rest: E. coli DNA-restniveau < 0,1 kopier/100 U, velegnet til applikationer med strengere baggrundsbakteriekrav.
- Bredspektret RNase-hæmmende aktivitet: I stand til at hæmme RNase, herunder RNase A, RNase B, RNase C og andre.
- Kompatibel med en lang række reaktionsbetingelser: Aktiv under pH-forhold fra 5,0 til 9,0 og temperaturer fra 25°C til 60°C, velegnet til termofile reverse transkriptaser.
- Kompatibel med et bredt spektrum af downstream-eksperimenter: Ingen indvirkning på den enzymatiske aktivitet af SP6, T7 eller T3 RNA-polymeraser, AMV, M-MLV reverse transkriptaser og Taq DNA-polymeraser.
- Batch-to-batch stabilitet: UCF.ME® ultra-rene molekylære enzymproduktionsplatform med streng kvalitetskontrol sikrer ensartethed, stabilitet og rettidig levering af produktet.
Produktets ydeevne
1) Ingen exonuklease, incisionsenzym og RNase rest
Figur 1. Påvisning af nuklease, nicking-enzym og RNase-rester i UCF.ME® murin RNase-hæmmer.
Bemærk: N repræsenterer den negative kontrol; 1, 2, 3 repræsenterer tre sæt parallelle eksperimenter.
2）coli genomisk DNA-rest er mindre end 0,1 kopier/100 U, betydeligt lavere end den konventionelle version.
Ved at udføre værts- (E.coli) genomisk DNA-restdetektion på forskellige batches af UCF.ME® Murine RNase-hæmmer og sammenligne det med værtsrestniveauerne af konventionelle murine RNase-hæmmere, viser resultaterne, at den genomiske værts-DNA-rest af UCF.ME® Murine RNase-hæmmer er under 0,1 kopier af den konventionelle UCF.ME® Murine RNase-hæmmer, hvilket er væsentligt lavere end den konventionelle version/100.
Figur 2: Sammenligning af E. coli-genomiske restpåvisningsresultater mellem UCF.ME® MR og konventionel MR.
3) Den RNase-hæmmende evne er betydeligt bedre end importerede mærkers.
Ved at bruge Total RNA som en skabelon blev RT-qPCR-reaktionen udført under anvendelse af Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) (Cat#13650ES) for at verificere RNaseA-fordøjelsesevnen af UCF.ME® Murine RNase Inhibitor. Resultaterne indikerede, at den hæmmende effekt af Yeasen UCF.ME® MRI på RNaseA er væsentligt bedre end tilsvarende internationale konkurrerende produkter.
Figur 3: Validering af RNase-hæmningsevne af UCF.ME® MRI
Bemærk: Yeasen UCF MRI: 8 U UCF.ME® MRI + 80 ng RNaseA; Yeasen MRI: 8 U MRI + 80 ng RNaseA; Konkurrent N*: 8 U af et lignende konkurrerende produkt + 80 ng RNaseA; Kontrol: Ingen MR og RNaseA.
Produktanbefaling
| Type | Navn | Kat |
| Ultra-ren PCR enkelt enzymserie med ultra-lav værtsrest | Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 14314ES |
| Hifair UCF.ME® V omvendt transkriptase (200 U/μL) | 14608ES | |
| UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG), varmelabil, 1 U/μL | 14466ES | |
| UCF.ME® murin RNase-hæmmer (40 U/µL) | 14672ES | |
| Højtydende PCR monoenzym serie | Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA-polymerase, 5 U/μL | 10726ES |
| Hifair® V omvendt transkriptase (200 U/μL) | 11300ES | |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), varmelabil, 1 U/μL | 10303ES | |
| Murin RNase-hæmmer (40 U/µL) | 10603ES | |
| dNTP-mix (25 mM hver) | 10125ES | |
| Lyo-klar PCR monoenzym serie | Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA-polymerase, Glycerol-fri (5U/μL) | 14316ES |
| Hifair® V Reverse Transcriptase, Glycerolfri (600 U/μL) | 11301ES | |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG), varmelabil (1 U/μL, Glycerol-fri) | 10707ES | |
| Murin RNase-hæmmer (200 U/µL, glycerolfri) | 10703ES |