---- Ren baggrund, stabile båndmønstre, præcise størrelser
DNA-markører er en kombination af DNA-fragmenter med forskellige molekylvægte. Deres primære anvendelse er at co-migrere med prøve-DNA i agarosegelelektroforese for at adskille DNA-molekylerne. Ved at sammenligne størrelsen og lysstyrken af prøvebåndene med DNA-markørens, kan man groft estimere molekylvægten og koncentrationen af prøve-DNA'et i opløsning. YEASEN DNA-markører dækker et molekylvægtområde fra 100 bp til 15 kb, hvilket opfylder behovene i de fleste eksperimenter.
Produktegenskaber
- Stærk stabilitet, kan opbevares ved stuetemperatur i 3-6 måneder;
- Ren baggrund, stabile båndmønstre og præcise størrelser;
- Indeholder referencebånd med kendte koncentrationer for nem positionering og semikvantitativ analyse;
- Inkluderer ladebuffer til direkte elektroforese, praktisk og hurtig;
- Leveres med en 5× loading buffer til prøveladning.
Elektroforesediagram
Opmærksomhedspunkter
- Opbevaringsmetode: Stabil opbevaring ved stuetemperatur i 3 til 6 måneder; i længere perioder, opbevares ved 4°C eller -20°C.
- DNA Marker er velegnet til analyse af DNA-bånd i agarosegelelektroforese og anbefales ikke til brug i polyacrylamidgelelektroforese.
- Valg af gelkoncentration og bufferopløsning:
| Agarose koncentration | Effektivt adskillelsesområde (bp) | Anbefalet buffer |
| 0,5 % | 2.000-50.000 | 1×TAE |
| 0,8 % | 800-10.000 | 1×TAE |
| 1,0 % | 400-8.000 | 1×TAE |
| 1,2 % | 300-7.000 | 1×TAE |
| 1,5 % | 200-3.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 2,0 % | 100-2.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 3,0 % | 25-1.000 | 0,5×TBE |
【Bemærk】: For store fragmenter skal du vælge en gel med lav koncentration og bruge et TAE-buffersystem til elektroforese; for små fragmenter, vælg en højkoncentrationsgel og brug et TBE-buffersystem til elektroforese.
- Valg af nukleinsyrepletter:
EB (Ethidium Bromide) er et meget følsomt fluorescerende farvestof med en maksimal excitationsbølgelængde på 302 nm, som kan bruges til at observere nukleinsyrer i agarose- og polyacrylamidgeler. EB interkalerer med baserne i nukleinsyrer og er kendt for at være toksisk.
YeaRed (Cat#10202ES76) og YeaGreen (Cat#10204ES76) er nye ikke-toksiske nukleinsyrefarvestoffer med en unik olieagtig molekylær struktur, der ikke kan trænge ind i cellemembraner for at trænge ind i celler, er ikke let flygtige eller sublimerbare og derfor ikke inhaleres af mennesker, der sikrer sikkerheden for eksperimenteren.Ames testresultater viser også, at YeaRed og YeaGreen ikke har nogen mutagenicitet ved gelfarvningskoncentrationer, hvilket gør dem til et sikkert og ikke-toksisk alternativ til det stærkt kræftfremkaldende EB. YeaRed har desuden de samme spektrale egenskaber som EB, så det kan perfekt erstatte EB uden at ændre det eksisterende billedbehandlingssystem.
Spørgsmål og svar
Q1: Hvorfor trækker og adskiller de højmolekylære bånd af DNA-markøren ikke godt?
A1: Nukleinsyrefarvestoffet binder ikke tilstrækkeligt til DNA-markøren. Da bånd med høj molekylvægt kræver mere nukleinsyrefarvestof, hvis farvestoffet ikke er mættet, er båndene med høj molekylvægt mere modtagelige for migrationseffekter, hvilket fører til træk og dårlig adskillelse. Det anbefales at reducere mængden af anvendt DNA-markør (den kan fortyndes med vand 5 gange, og derefter kan 8-10 μL påfyldes) eller at øge koncentrationen af nukleinsyrefarvestoffet.
Q2: Hvorfor er der ingen bånd eller svage bånd for DNA?
A2:
- Utilstrækkelig DNA-belastning, øg den indlæste mængde;
- DNA-båndet er løbet ud af gelen;
- DNA-båndet er tilsløret af sporingsfarvestoffet;
- Nukleinsyrefarvestof blev ikke tilsat til gelen;
- Agarosegelen har stået for længe, det anbefales at forberede og bruge den med det samme.
Q3: Hvorfor er DNA-markørbåndene diffuse?
A3:
- Delvis nedbrydning af DNA, tjek om opbevaringsforholdene er for varme;
- Spændingen under elektroforese er for lav, hvilket får DNA-båndene til at diffundere. Det anbefales at køre gelen ved 110V-130 V i mere end 45 min;
- Koncentrationen af agarosegelen er ikke passende, forbered i henhold til den anbefalede gelkoncentration i manualen;
- Kvaliteten af agarosegelen er dårlig, det anbefales at forberede en ny.
Spørgsmål 4: Hvorfor ser prøvebåndene ud til at være af forskellig størrelse sammenlignet med DNA-markørbånd?
A4:
- DNA-migrering er ikke kun relateret til den faktiske størrelse, men også til, om den er kombineret med proteiner, iontilstand, DNA-struktur, gel og andre faktorer. Den elektroforetiske migrationshastighed af nukleinsyrer er relateret til forholdet mellem DNA/farvestof, og når mængden af nukleinsyrefarvestof er utilstrækkelig, kan det føre til større migrationshastighedsfejl;
- Hvis prøven indeholder en høj koncentration af saltioner, kan det også forårsage betydelige migrationsfejl;
- Hvis mængden af indlæst prøve afviger væsentligt fra mængden af DNA-markørbånd, eller hvis volumenerne afviger væsentligt, kan det også forårsage større migrationsfejl.
Bestillingsinformation
| Produktorientering | Produktnavn | Produktnummer | Specifikationer |
| DNA markør | GoldBand DL2000 DNA-markør | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
| GoldBand DL5000 DNA-markør | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 100bp DNA-stige | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 1 kb DNA-stige | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |