Nøgleord:
Lav restkoncentration, Forblandet, Universal Multi-Target, One-Tube, qPCR, Høj følsomhed.
Abstrakt:
Den nye tredjegenerations qPCR-mix med ultra-lav rester, færdigblandet for at sikre høj følsomhed, understøtter en hurtig 30-minutters protokol og udmærker sig i multiplex-amplifikation på tværs af forskellige scenarier.
Baggrund:
Kommercielle molekylære enzymer, primært produceret via rekombinant ekspression i manipulerede stammer (f.eks. E. coli), indeholder ofte resterende værtsgenomisk DNA. Faktorer som præparatmiljøet og menneskelig forurening øger yderligere sandsynligheden for resterende DNA i disse enzymer. Dette kan føre til unøjagtig kvantificering af værtsnukleinsyrerester i kvalitetskontrolprodukter, hvilket udgør en sikkerhedsrisiko for biofarmaceutisk fremstilling. Under patogendetektion kan kontaminerede bakterielle nukleinsyrer i baggrunden overvælde målnukleinsyrer med lav overflod eller blive detekteret sammen med dem, hvilket kompromitterer testnøjagtigheden.
Total løsning
For at tackle interferens fra baggrundsbakterier og værtsnukleinsyrerester i patogendetektion har YEASEN Biotech udviklet en unik teknologi til kontrol med ultralav restkoncentration. Vi etablerede UCF.ME, en ultra-ren molekylær enzymproduktionsbase, der overholder GMP-standarder, med streng overholdelse af ISO 13485 kvalitetsstyringssystemet på tværs af alle stadier. Dette omfatter streng kontrol over personale, maskineri, materialer (reagenser og forbrugsstoffer), processer, miljø og standarder. Ved at integrere effektive tekniske foranstaltninger, et rent produktionsmiljø og stringent kvalitetskontrol muliggør vi storskalaproduktion af forskellige UCF.METMultra-lave resterende molekylære enzymer.
Hieff UniconTM Pure Pro U+ qPCR Mix(Et rør）（Kat#16713ES）er en omhyggeligt udformet universel qPCR-mix af YEASEN Biotech, som har lav værts-DNA-rest. Dette produkt er baseret på en ny generation af universel forblandet qPCR-blanding (Cat#16713ES), der effektivt kontrollerer det resterende genomiske DNA fra værten (E. coli), mens de også kontrollerer de resterende niveauer af almindelige patogene bakterier, såsom Pseudomonas aeruginosa og human-afledte forurenende stoffer. Da denne færdigblandede løsning (Cat#16713ES) ikke kun effektivt kontrollerer niveauet af patogenrester, men også løser problemerne med stabilitet ved multiple detektion og målalsidighed, forbedrer den nøglepræstationsindikatorer såsom reagensens følsomhed og specificitet. Det forbedrer detektionseffektiviteten markant og kan bruges i vid udstrækning i anvendelsesscenarier såsom påvisning af patogene mikroorganismer.
Produktfordele
- Lav baggrundsrester – Ingen påvisning af Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa og humant afledt genomisk DNA-rest i 48 brønde.
- Enestående færdigblandet stabilitet: Stabil ved 37°C i op til 14 dage, ved 4°C i op til 28 dage og efter 50 fryse-tø-cyklusser.
- Fremragende reagens alsidighed – Kompatibel med en række multipleks primer-probe sæt (valideret til over 40 forskellige typer mål), med fremragende amplifikationsydelse.
- Høj sensitivitet og specificitet – Sensitiviteten er i stand til at detektere 250 kopier/ml, med specificitet, der sikrer ingen toppe i 48 negative brønde.
- Understøtter hurtige protokoller – Kompatibel med hurtige protokoller, resultater kan opnås på kun 30 minutter.
- dUTP/UDG anti-kontamineringssystem – Inkorporerer et dUTP/UDG anti-kontaminationssystem for effektivt at forhindre aerosolkontamination.
- Kompatibilitet med flere platforme og systemer – Kompatibel med platforme som Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong og andre.
Præstationshøjdepunkter
1, Ultralav baggrundsbakterierest
Baseret på vurderingen af reagensbaggrundsniveauer for bakterielle restkoncentrationer, brugen af YEASEN's ultra-lav restkoncentration universal sgenblandet qPCR-blanding (Cat#16713ES) og konventionelle reagenser (uden restkontrol) for NTC (ingen skabelonkontrol) amplifikation i en Escherichia coli (E. coli) system, hvor 16713ES også gennemgår NTC-amplifikation i både Pseudomonas aeruginosa og human-afledte genomiske DNA-systemer. Resultaterne viser, at Cat#16713ES ikke udviser nogen amplifikation i 48 brønde i NTC, hvilket indikerer ubetydelig baggrunds-DNA-rest (E. coli, P. aeruginosa og humant DNA) i reagenset.
2、 Enestående stabilitet af den fuldt færdigblandede forblanding
Baseret på undersøgelse af stabiliteten af forblandet reagens, Cat#16713ES blev behandlet på tre måder (4°C, 37°C og fryse-tø). Forsøgsgrupperne blev behandlet ved henholdsvis 4°C og 37°C i 7 dage og udsat for 50 fryse-tø-cyklusser. Stabiliteten blev evalueret mod kontrolgruppen (opbevaret ved -20°C) under fire multipleks amplifikationssystemer (Gruppe 1, 2 og 4 er 4-plex amplifikationssystemer, og gruppe 3 er et 3-plex amplifikationssystem), med nogle amplifikationsgrupper yderligere vurderet for stabilitet efter 14 dages acceleration ved 37°C. Resultaterne viste, at Ct værdi afvigelse (ΔCt værdi) mellem forsøgs- og kontrolreagenserne var inden for ±0,5, og fluorescensværdiafvigelsen var inden for 15 %, hvilket indikerer, at YEASENs færdigblandede reagens har fremragende stabilitet i multipleks forstærkning.
3, Fremragende reagens alsidighed
Baseret på undersøgelsen af reagensens alsidige anvendelsesscenarier, YEASEN (Cat#16713ES) blev brugt sammen med flere konventionelle reagenser til at validere amplifikationsydelsen under forskellige målscenarier. Resultaterne viste, at produktet udviser god amplifikationsydelse på tværs af en række forskellige mål, herunder patogener, menneskelige kilder og planter, hvilket indikerer et højt niveau af reagens alsidighed.
4、Enestående forstærkningsfølsomhed
Baseret på en vurdering af reagensfølsomhed blev der udført en evaluering af detektionshastigheden af Cat#16713ES i et multipleks amplifikationssystem (4-plex) ved anvendelse af prøver i ultralave koncentrationer (250 kopier/ml). Resultaterne indikerer, at YEASEN's Cat#16713ES udviser fremragende forstærkningsfølsomhed, med en detektionsgrænse på mindst 250 kopier/ml.
5、Kompatibilitet med flere hurtige protokoller
Baseret på undersøgelsen af amplifikationsydelsen af reagensens hurtige protokol blev syv gradientprøver (1~10^6 kopier/μL) valideret ved brug af både konventionelle (1 time og 6 minutter) og hurtige protokoller (30 minutter) på det samme kvantitative PCR-instrument (ABI Q5). Resultaterne viste, at amplifikationseffektiviteten af den hurtige protokol forblev over 99 %, og Ct-værdiafvigelsen (ΔCt-værdi) mellem de konventionelle og hurtige protokoller var inden for ±0,5med en fluorescensværdiafvigelse inden for ±10 %og amplifikationskurverne viste en "S"-form.
IVD-detektionsreagensdeling
Som leverandør af life science værktøjer, YEASEN Biotech har leveret højkvalitets og omkostningseffektive råvarer til IVD-virksomheder i lang tid. Ud over universel fuldt færdigblandet qPCR/RT-qPCR-masterblandinger tilbyder vi en række andre qPCR/RT-qPCR-detektionsreagenser, der hjælper IVD virksomhedskunder arbejder i fællesskab med effektiv påvisning af menneskelige patogener og dyresygdomme.
| Produkttype | Produkt funktion | Produktnavn | Varenummer |
| qPCR blanding | Helt ny 3. generations universal fuldt færdigblandet, høj følsomhed understøtter hurtig test | 16710ES | |
| Højfølsom universal (5× koncentration) | Hieff UniconTM Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus） | 13891ES | |
| 2. generation hurtig fuldt færdigblandet | Hieff UniconTM Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix(UDG plus） | 11827ES | |
| Værtsfri ultra-lav rest | Hieff UniconTM Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix(UDG plus） | 11853ES | |
| Højfølsom universal lyofiliserbar | Hieff UniconTM Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG plus） | 11893ES | |
| RT-qPCR-blanding | Højfølsom universal hurtig | HifairTM C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG Plus） | 16630ES |
| fuldt færdigblandet universal | HifairTM V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG Plus） | 11899ES | |
| Universal hurtig lyofiliserbar | 11831ES |