Proteinelektroforese er en proteinanalyseteknik. Proteiner er negativt eller positivt ladede i en buffer og bevæger sig til anoden i et elektrisk felt kaldet elektroforese. Forskellige proteinmolekyler har forskellige elektroforetiske mobiliteter. En meget vigtig del af proteinelektroforese er gelforberedelse. Konventionel gelfremstilling tager ofte flere timer, og der er også problemer som væskelækage, ujævn gel og luftbobler. Ud over besværet med forberedelsen vil råmaterialereagenserne også have en vis toksicitet, hvilket vil forårsage skade på limdispenserens krop, og udseendet af præfabrikeret lim kan løse disse problemer. Så hvad er det grundlæggende princip for proteinelektroforese, og hvad er funktionen og princippet for præfabrikeret gel?

1. Hvad er det grundlæggende princip for proteinelektroforese?
2. Hvad er funktionen og princippet af præfabrikeret lim?
3. Introduktion af præfabrikeret lim leveret af Yeasen
4. FAQ
5. Produktdetaljer

1. Hvad er det grundlæggende princip for proteinelektroforese?

De fleste biologiske makromolekyler, såsom proteiner og nukleinsyrer, har kationiske og anioniske grupper, som kaldes zwitterioner. Zoneelektroforesemetoden, hvor partiklerne dispergeres i opløsningen og stivelsesgelen, agar- eller agarosegelen, polyacrylamidgelen osv. som bærende medium kaldes gelelektroforese. Polyacrylamidgelelektroforese er en elektroforesemetode, hvor bæreren er en polyacrylamidgel. Det antages, at størrelsen af ​​porestørrelsen af ​​polyacrylamidgelen styres til at polymerisere, og proteinerne adskilles ved virkningen af ​​en lignende molekylsigte.

Proteinelektroforese omfatter to former, nativ polyacrylamidgelelektroforese (Native-PAGE) og natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE). Native-PAGE holder proteiner intakte under elektroforese og adskiller dem i en gradient baseret på deres molekylvægt, form og medfølgende ladning. På den anden side adskiller SDS-PAGE proteiner i henhold til molekylvægten af ​​deres underenheder. SDS er et anionisk rengøringsmiddel. Som et denatureringsmiddel og et solubiliseringsmiddel kan det bryde intramolekylære og intermolekylære hydrogenbindinger, folde molekyler og ødelægge de sekundære og tertiære strukturer af proteinmolekyler. Som et stærkt reduktionsmiddel kan mercaptoethanol, dithiothreitol, bryde disulfidbindingerne mellem cysteinrester. Efter tilsætning af reduktionsmidlet og SDS til prøven og gelen depolymeriseres molekylerne til polypeptidkæder, og de depolymeriserede aminosyresidekæder og SDS kombineres til protein-SDS-miceller. Den negative ladning af protein-SDS-miceller overstiger den oprindelige ladning af proteinet, hvilket eliminerer ladningsforskellen og strukturel forskel mellem forskellige molekyler. Proteinets mobilitet afhænger kun af proteinets molekylmasse, og proteinets molekylvægt kan bestemmes ved at sammenligne den med en standard af kendt molekylmasse.

2. Hvad er funktionen og princippet af præfabrikeret lim?

Sammenlignet med traditionelle håndstøbte geler, præfabrikerede proteingeler kan undgå kontakt med et stort antal giftige reagenser, spare en masse tid og effektivt løse problemet med store forskelle i håndstøbte geler.

Gelen består af to forskellige gellag, det øverste lag er en stablegel og det nederste lag er en skillegel. Stacking gel er også kendt som stacking gel.Gelkoncentrationen er relativt lille, og porestørrelsen er relativt stor. Prøven tilsættes til stablegelen og koncentreres i en snæver zone gennem migreringen af ​​gelen med stor porestørrelse. Separerende gel, også kendt som elektroforesegel, har normalt en lille porestørrelse, og valg af den passende gelkoncentration kan få prøvekomponenterne godt adskilt.

Separerende geler kan opdeles i fikserede geler og gradientgeler. Koncentrationen af ​​polyacrylamid er 8%, 10%, 12%, 15%, 4% til 12% og 4% til 20%. De første fire er præfabrikerede geler med en fast koncentration, og de sidste to er gradientgeler. Koncentrationerne repræsenterer området af isolerede proteinmolekylvægte. Gelgradienter dannes af gradientmixere. En højkoncentreret akrylamidopløsning tilsættes til glaspladen, og derefter falder opløsningens koncentration i en gradient, og gelens porestørrelse er større i toppen og mindre i bunden. Den fikserende gel kan kun adskille proteiner inden for dets adskillelsesområde, hverken for stort eller for lille. Gradientgeler har ikke denne begrænsning, hvor store molekyler adskilles i toppen og små molekyler adskilles i bunden. Da gradientgelens porestørrelse gradvist bliver mindre, har det en koncentrerende effekt på proteinet nær porestørrelsen, at proteinet ikke kan trænge igennem, så der vil dannes en meget snæver zone efter elektroforese. Proteiner med små forskelle i molekylvægt kan ofte ikke adskilles på fikserede geler, men kan opløses på gradientgeler.

3. Introduktion af præfabrikeret lim leveret af Yeasen

YEASEN Præfabrikeret Protein Plus Gel indeholder gradientkoncentration og fast koncentration, en række forskellige koncentrationer kan opfylde behovene for forskellige proteinelektroforese. Det er fremstillet ved en unik gelpræpareringsproces og har en fremragende elektroforetisk effekt. Den er kompatibel med alle slags elektroforesetanke på markedet (Bio-RAD, Tanon, Life osv.) og har fordelene ved bred tilpasningsevne, høj opløsning, høj stabilitet, klare og ensartede bånd osv.

3.1 YEASEN Præfabrikeret Protein Plus Gel opgrader til en plastplade, bedre kvalitet!

Nem at bruge: klar til brug; Riv den selvklæbende tape af fra bunden af ​​plastpladen

Bredt anvendelsesområde: kompatibel med denatureret protein og naturligt protein

Klart bånd: specialbehandlingen af ​​plastplader reducerer proteinadsorptionen i høj grad

Tidsbesparende: forsøget kan hurtigst gennemføres på 18 minutter

Kvalitetssikring: streng inter-batch stabilitetssikring

Lang holdbarhed: kan opbevares ved 4 ℃ i 12 måneder

3.2 Følgende parametre kan hjælpe dig med at vælge den passende gelserie

Elektroforese buffersystem: denatureret proteinløbebuffer eller naturlig proteinløbebuffer

Antal brønde og prøvebelastning: 10 eller 15 brønde, den maksimale prøvestørrelse var henholdsvis 70 μL og 40 μL

gelkoncentration: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabel 1.Gelkoncentration og lineær adskillelsesområde

3.3 Data viser

Figur 1. Data viser

Figur 2. Data viser

4. Ofte stillede spørgsmål

Q1: Skal den præfabrikerede gel placeres ved 4℃? Betyder det noget, hvis du lader den stå ved stuetemperatur i et stykke tid?

EN: Anbefalet 4℃, kan opbevares i 12 måneder. Må ikke opbevares under 0 ℃, kan opbevares ved stuetemperatur (25 ℃) i 30 dage.

Q2: Hvordan vælger man mellem gradientkoncentration og fast koncentration? Hvad er minimumsmolekylvægten af ​​protein adskilt af præfabrikat gel?

A: Størrelsen af ​​proteinadskillelse af præfabrikatet gel er relateret til dens koncentration, og det tilsvarende adskillelsesområde er vist i figuren ovenfor.

Fast koncentration præfabrikeret gel har bedre opløsning. Gradientkoncentration præfabrikeret gel har et bredere adskillelsesområde og et bredere anvendelsesområde; Kunder bør vælge den passende koncentration i henhold til deres egne behov.

Vores præfabrikerede 4%-20% gradient gel (Kat#36250, Kat#36256) har et bredt adskillelsesområde for proteiner så lavt som 3,5 kDa.

Figur 3. Gradient præfabrikeret gel data

Spørgsmål 3: Gør præcastet gel skal være udstyret med din specielle buffer? Kan du lave din buffer?

A: YEASEN speciel buffer (kat#36236, kat#36237) og præfabrikeret gel anvendeligheden er bedre. Må ikke blandes med andre buffere. Bufferen kan fremstilles ved at købe reagenser, men kunder skal bruge vores formel, som kan findes i det relevante præfabrikat gel instruktioner.

Spørgsmål 4: Hvordan man skelner mellem adskillelsesgel og koncentreret gel? Er det nødvendigt for sektionsspændingselektroforese?

A: De to komponenter er de samme, men koncentrationen er ikke den samme, det blotte øje kan ikke skelne; Højden af ​​koncentreret lim er 1,5 cm.

Nej, elektroforese ved 150 V anbefales, og der kræves 30-40 minutter for at gennemføre eksperimentet.

Q5: Er dit præfabrikat gel egnet til alle slags elektroforesetanke på markedet?

A: Ja, vores præcast gel er velegnet til alle slags elektroforesetanke på markedet,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra System) og Tanon VE180 (Bemærk den omvendte samling af tætningsbånd);

Life Technology Novex Mini-celle (bruges med speciel baffel);

Anden gelpladebredde i 10 cm elektroforesebeholder.

5. Produktdetaljer

Produkterne leveret af Yeasen er som følger:

Tabel 2.Produktdetaljer