—Lys din klatmembran op, lige ved hånden!
ECL-reagenser, kendt som kemiluminescerende substrater for peberrodsperoxidase (HRP), er i øjeblikket de mest følsomme reagenser, der anvendes til Western blotting-detektion. Almindelige problemer med ECL-reagenser på markedet omfatter quenching, høj baggrund, ustabilitet og vanskeligheder med at opdage proteiner med lav overflod, hvilket kan påvirke de endelige eksperimentelle resultater.
Yeasen Biotech har samlet fremragende videnskabelige forskere inden for immundetektion. Ved strengt at kontrollere kvaliteten af luminol-råmaterialer og løbende forbedre formuleringen af forstærkere og stabilisatorer, har vi udviklet fire typer ECL-reagenser til at imødekomme behovene i forskellige eksperimenter. Disse omfatter forbedrede, ultrafølsomme, holdbare og ultrahøjfølsomme produkter. De opfylder ikke kun detektionskravene for målproteiner fra lav til høj overflod, men forbedrer også luminescensintensiteten uden at påvirke eksperimentet, hvilket resulterer i klarere billeder.
Produktegenskaber
- Fantastisk følsomhed — Påvisning af antigener fra picogram til lave femtogramniveauer.
- Højere signal-til-støj-forhold — Præcise selvlysende substrater reducerer baggrundsstøj.
- Mere antistof-effektiv — Optimerede substratsystemer til højere antistofbindingsaffinitet.
- Højt omkostnings-ydelsesforhold — Højere ydeevne til en lavere pris.
- Fremragende stabilitet — Nye oxidanter sikrer stabil opbevaring ved 4°C i op til et år.
Produktprincip
Kerneprincippet i ECL-reagensdetektion er luminescensen fra oxidationsreaktioner: Luminol, hovedbestanddelen af det luminescerende substrat, oxideres af H2O2 under alkaliske forhold gennem katalyse af peberrodsperoxidase (HRP), og danner et exciteret tilstandsmellemprodukt af 3-aminophthalsyre. Når den vender tilbage til grundtilstanden, udsendes fotoner med en maksimal emissionsbølgelængde på 425 nm. Disse fotonsignaler kan fanges af røntgenfilm eller CCD-billeddannelsesenheder.
Valgvejledning
Yeasen tilbyder i øjeblikket fire typer ECL-produkter, hver med deres unikke egenskaber, for fuldt ud at imødekomme behovene for brugernes immunoblotting-applikationer.
Så hvilket produkt skal du vælge til dit eksperiment?
Tabel 1.ECL Reagent Selection Guide
| Yeasen | Forbedret ECL Forbedret type | Super ECL Ultra-følsom type | SuperDura Holdbar type | MaxiSignal Ultra-høj følsomhedstype |
| Gældende prøver | Mål med høj overflod, rutinemæssige proteinprøver | Mål med lav overflod, begrænsede prøver | Mål med lav overflod, begrænsede prøver | Mål med ekstremt lav overflod, dyrebare prøver |
| Detektionsfølsomhed | Mellem picogram niveau | Lavt pikogramniveau | Mellem femtogram niveau | Lavt femtogram niveau |
| Signalvarighed | < 2 timer | < 12 timer | < 24 timer | < 8 timer |
| Anvendeligt detektionssystem | Alle reagenser er velegnede til røntgenfilm, CCD-billeddannelsesenheder | |||
| Koncentration af primær antistoffortynding | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10.000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Sekundær antistoffortyndingskoncentration | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Anbefalet membran | NC membran | NC membran eller PVDF membran | NC membran eller PVDF membran | NC membran eller PVDF membran |
| Opbevaringsstabilitet | Stuetemperatur i 1 år | 4°C i 1 år, stuetemperatur i et halvt år | ||
| Fordele | Stærkeste signal blandt samme følsomhedsniveau | Højeste omkostnings-ydelsesforhold, velegnet til de fleste WB-eksperimenter | Længste signalvarighed, yderst velegnet til flere eksponeringer | Fremragende følsomhed, yderst velegnet til sporproteinpåvisning |
Bemærk: Den anbefalede antistoffortyndingskoncentration er baseret på en antistofstamkoncentration på 1 mg/ml.
Produktanvendelse
Yeasen ECL-reagenser har bedre brugseffekter sammenlignet med andre mærkers produkter på samme niveau.
Figur 1. Sammenligning af detektionseffekter mellem Yeasen ECL Ultra-Sensitive Substrate Super og mærke Ts tilsvarende substrat Pico.
Figur 2. Sammenligning af detektionseffekter mellem Yeasen ECL Ultra-High Sensitivity Substrate MaxiSignal og andre mærkers tilsvarende substrat West Femto.
Figur 3.Sammenligning af detektionseffekter mellem Yeasen ECL Durable Substrate SuperDura og andre mærkers tilsvarende substrat West Dura.
Udgivet Litteratur
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucin-tRNA-syntase-2-udtrykkende B-celler bidrager til immunoevasion af kolorektal cancer. Immunitet. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al.Structure and engineering of miniatureAcidibacillus sulfuroxidansCas12f1[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-0283-40IF:953-40IF:
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Makrofage IRX3 fremmer diæt-induceret fedme og metabolisk inflammation. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Gating af hippocampus rytmer og hukommelse ved synaptisk plasticitet i hæmmende interneuroner. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Prisfordel
Figur 7.Prissammenligning af Yeasen ECL produkter med andre mærkers produkter på samme niveau
Ofte stillede spørgsmål
| Opståede problemer | Årsagsanalyse | Anbefalede løsninger |
| Filmen har omvendte billeder | Filmen har omvendte billeder | Filmen har omvendte billeder |
| Filmen har brune eller gule bånd | ||
| Fluorescensdæmpning | Driftstiden er for lang, membranen tørrer gradvist | Undgå at membranen tørrer ud |
| Forurening af plastfolie, fremkalder eller fixer | Udvikle gode eksperimentelle vaner | |
| Utilstrækkelig HRP i reaktionssystemet | Øg HRP-mærket materiale | |
| Ingen bånd eller svagt signal på filmen | Lav overførselseffektivitet | Forbedre overførselseffektiviteten, brug præfarvet markør til bedømmelse |
| Utilstrækkeligt eller mismatchet antigen/antistof | Forøg mængden af antigen/antistof eller vælg passende antigen/antistof | |
| Problemer med røntgenfilm | Hvis røntgenfilmen er helt sort (ikke gennemsigtig) efter eksponeringen, indikerer det, at filmen er helt eksponeret; bruge en ny røntgenfilm | |
| Problemer med udvikler/fixer | Foreksponer en film for at kontrollere; hvis der er problemer, udskift med ny udvikler/fixer | |
| Overdreven HRP i reaktionssystemet | Fortynd HRP-mærket materiale | |
| Høj baggrund | Primære og sekundære antistofkoncentrationer for høje | Reducer antistofkoncentrationen, forlænge blokeringstiden |
| Antistoffer ikke renset grundigt | Øg antallet af vaske | |
| Ufuldstændig blokering | Optimer blokeringsforhold | |
| Der er brugt forkert blokeringsmiddel | Brug et andet blokeringsmiddel | |
| Overeksponering | Reducer eksponeringstiden | |
| Dårlig antistofspecificitet | Udskift med antistoffer af høj kvalitet | |
| Overdreven HRP i reaktionssystemet | Fortynd HRP-mærket materiale | |
| Bånd med tomme pletter | Høj koncentration af antigen og sekundært antistof | Fortynd prøven og kør gelen igen, eller afkøl den blandede kromogene opløsning og påfør den på membranen for øjeblikkelig hurtig udvikling. |
| Uregelmæssig båndform | Luftbobler under overførsel eller ujævn hydrering med methanol (til PVDF-membraner) | Optimer overførselsbetingelserne. |
| Filmpletter | Aggregater af HRP-mærket materiale | Filtrer HRP-mærket materiale med en 0,2μm membran |
| Ikke-specifikke bånd | Overdreven HRP i reaktionssystemet | Fortynd HRP-mærket materiale |
| SDS forårsager ikke-specifik proteinbinding | Brug ikke SDS i den eksperimentelle procedure | |
| Dårlig antistofspecificitet | Udskift med antistoffer af høj kvalitet | |
| Utilstrækkelig blokering | Forøg blokeringstiden eller brug et andet blokeringsmiddel |
Bestillingsinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| Super ECL-detektionsreagens | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Forbedret ECL kemiluminescerende substratsæt | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrat | 36223ES10/60/70/76 | 10 mL/100 mL/200 mL/500 mL |
| SuperSignal MaxiSignal Maksimal følsomhed Substrat | 36224ES10/60/70/76 | 10 mL/100 mL/200 mL/500 mL |