1. Baggrund Introduktion
Streptavidin er et biotinbindende protein afledt af Streptomyces avidinii. Dens uspecifikke binding er meget lavere end avidins, og sammenlignet med æggehvide-avidin, som har en netto positiv ladning ved neutral pH og indeholder omkring 7 % kulhydrater, har streptavidin mere gunstige kemiske egenskaber såsom næsten ingen nettoladning ved neutral pH og ingen kulhydrater. Derfor er det meget brugt som et alternativ til avidin.
2. Produktfunktioner
Tetramer struktur: Streptavidin eksisterer som en homotetramer med en størrelse på 66KDa;
Høj affinitet: Hvert molekyle af streptavidin kan meget specifikt binde til fire molekyler af biotin, med en ekstrem stærk affinitet mellem dem;
Brede applikationer: Dissociationskonstanten for streptavidin-biotin-komplekset er i det nanomolære område, en egenskab, der almindeligvis anvendes i molekylærbiologiske anvendelser; I de fleste applikationer kan det bruges i flæng med antistofproteiner;
Ekstraktion af høj kvalitet: Opnået ved oprensning fra Streptomyces avidinii;
Figur 1. Streptavidin
Produkt Anvendelse
Anvendelse 1: Renset harpiks med streptavidin
1) AnvendelsesprincipBaseret på interaktionen mellem streptavidin og biotin er streptavidin stærkt tværbundet til 6% agarose, og den unikke fremstillingsproces giver det højere fysisk-kemiske egenskaber, hvilket gør det muligt at modstå højere tryk. Det kan opnå oprensning af målproteinet ved relativt høje strømningshastigheder, hvilket gør det mere velegnet til industriel proteinoprensning i stor skala.
Figur 2. Oprensningsprincip for streptavidinharpiks
2）Yeasen er forpligtet til at give dig højeffektive produkter for at rense mere perfekte proteiner til dig.
Figur 3. Protein oprenset med streptavidinharpiks
3）Ofte stillede spørgsmål| Spørgsmål | Mulig årsag | Anbefalet løsning |
| Modtrykket af søjlen er for højt | Pakningen er blokeret | Rengør harpiksen. |
| Lysebuffer indeholder små faste partikler, det anbefales at filtrere med 0,22μm eller 0,45μm filtermembran før påfyldning, eller centrifugere for at fjerne. | ||
| Prøven er for tyktflydende. | Prøven indeholder høj koncentration af nukleinsyrer, forlænge lyseringstiden, indtil viskositeten er reduceret, eller tilsæt DNase I (slutkoncentration på 5 μg/ml), Mg2+ (slutkoncentration på 1 mM), inkuber på is i 10-15 minutter | |
| Bufferen er for tyktflydende | Organiske reagenser eller proteinstabiliserende reagenser (såsom glycerol osv.) kan forårsage øget modtryk, reducere driftsflowhastigheden. | |
| Ikke-formålsprotein i elueringskomponent | Overdreven spaltning denaturerer proteinet af interesse | Brug milde lyseringsbetingelser. eksperimentelle forhold er baseret på erfaring. |
| Målproteinet aggregerer for at producere præcipitation | Tilføj DTT til præcellelyseopløsning ved en slutkoncentration på 1-10 mM. | |
| Målproteinet elueres ikke fuldstændigt | Elueringsvolumenet er for lille | Øg eluentvolumenet og sænk elueringsflowhastigheden. |
| pH-værdien af elueringsbufferen ændres | Brug frisklavet eluent | |
| Eluentens inkubationstid er ikke nok | Forøg inkubationstiden for elueringsbufferen med gelen. |
Anvendelse 2: Fluorescerende gruppe og enzymkonjugat mærket streptavidin.
Figur 4. Forskellige konjugerede streptavidiner
1）Enzymkonjugerede streptavidiner- Peberrodsperoxidase (HRP) konjugeret streptavidin
Ⅰ. Fremstillet af højrent streptavidin og peberrodsperoxidase gennem en speciel konjugeringsteknik;
Ⅱ.Bevarer den høje specifikke aktivitet af peroxidase. Anvendelser: Immunhistokemi (IHC), Immuncytokemi (ICC), In situ hybridisering (ISH) osv.
Anbefalet koncentration: 0,01-0,1 µg/mL for WB (kemiluminescensmetode); 1-2 µg/mL til ELISA, HC/ICC, WB (substratfarveudvikling)
- Alkalisk fosfatase (AP) konjugeret streptavidin
Ⅰ. Velegnet til fast-fase-analyse, væv/celle-farvningssystemer og blot-applikationer med specifik kovalent binding;
Ⅱ.Konjugatet er stabilt og meget aktivt.
Anvendelser: Immunhistokemi (IHC), Immuncytokemi (ICC), Enzyme-Linked Immunospot Assay (ELISPOT), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), In situ Hybridization (ISH) og blot-applikationer.
Anbefalet koncentration: 1-2 µg/mL til ELISA, IHC/ICC; 0,1-1 µg/ml for WB
2） Fluorophore konjugerede streptavidiner- Fluor® Fluorescein Konjugeret Streptavidin
Ⅰ.Anbefales til rutinemæssig immunfluorescens;
Ⅱ.Stærkt oprenset med meget lave ikke-specifikke bindingskarakteristika;
Ⅲ.Høj affinitet for biotin;
Anvendelser: Immunfluorescens (IF), In situ hybridisering (ISH), Flowcytometri (Flow Cyt).
Anbefalet koncentration: 0,5-2 µg/ml (IF)
- DyLight™ Dye Conjugered Streptavidin
Ⅰ.Kan bruges til påvisning af biotinylerede sekundære antistoffer og andre store molekyler i immunfluorescens, in situ hybridisering eller flowcytometriapplikationer;
Ⅱ.Stærkt oprenset med meget lave ikke-specifikke bindingskarakteristika;
Ⅲ. Ekstremt høj affinitet for biotin;
Ⅳ.Høj fotostabilitet, pH-ufølsom og lysere fluorescens;
Anvendelser: Immunfluorescens (IF), In situ hybridisering (ISH), Flowcytometri (Flow Cyt).
Anbefalet koncentration: 0.5-2 µg/ml (IF)
Produktinformation
| Produktserie | Produktnummer | Produktnavn | Specifikation |
| Streptavidin | 35099ES | Streptavidin (pulver) | 100 mg/1 g |
| 35101ES | Streptavidin (5mg/ml) | 1 mg/5 mg/10 mg/100 mg/1 g | |
| Enzymkonjugerede streptavidiner | 35105ES | HRP Streptavidin | 100 μL |
| 35106ES | AP Streptavidin | 100 μL | |
| Fluorescensmærket streptavidin | 35102ES | DyLight 405™ Streptavidin | 100 μL |
| 35103ES | YSFluorTM 488-konjugeret Streptavidin | 100 μL | |
| 35104ES | YSFluorTM 647-konjugeret Streptavidin | 100 μL | |
| 35107ES | YSFluorTM 584-konjugeret Streptavidin | 100 μL | |
| 35108ES | Cy3-konjugeret Streptavidin | 1 mg | |
| Streptavidin rensningsserie | 20512ES | Streptavidin Agarose Resin 6FF | 5 ml/5 ml x 5/100 ml |
| 20513ES | BiotSep Streptavidin 6FF kromatografisøjle, 1 ml | 1 ml/1 ml×5 | |
| 20514ES | BiotSep Streptavidin 6FF kromatografisøjle, 5 ml | 5 mL/5 mL×5 |