La tecnología de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos se puede clasificar en muchos tipos según los diferentes principios de amplificación. El método más común y ampliamente aplicado es la tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) desarrollada por académicos japoneses, entre ellos Notomi, en 2000. La característica técnica de LAMP es el diseño de cuatro cebadores que se dirigen a seis regiones del gen objetivo, utilizando una ADN polimerasa de tipo Bst que desplaza la cadena para llevar a cabo la reacción de amplificación a una temperatura constante de 60 a 65 °C. Esto logra una amplificación de 109-1010-amplificación en 15-60 minutos.
La ADN polimerasa Bst es la enzima principal de la tecnología de amplificación isotérmica LAMP. Posee una gran estabilidad térmica, actividad de desplazamiento de cadena y actividad de polimerasa, lo que permite una amplificación rápida, eficiente y específica de la plantilla en condiciones de temperatura constante. A diferencia de la PCR, que requiere ciclos de desnaturalización térmica para la amplificación, todo el experimento LAMP se puede completar en una hora sin necesidad de dichos ciclos.
Ventajas del producto
Enzima libre de glicerol, adecuada para liofilización.
Transporte a temperatura ambiente, reducción de costes
Fuerte actividad de desplazamiento de hebras, sensible y estable.
Rehidratación rápida, fácil de operar.
Aspectos destacados del rendimiento
01 Aplicación del método de colorante fluorescente
1、Alta sensibilidad y buena especificidad.
En el sistema de amplificación de colorante fluorescente RT-LAMP, el rendimiento de amplificación de la torta de polvo liofilizada 14405ES es consistente con el de la enzima Bst líquida (incluyendo glicerol y libre de glicerol), y ambos pueden detectar el 100 % con una sensibilidad de 50 copias/T. La especificidad es buena, sin detección en 48 pocillos de NTC (control de plantilla negativo).
2、Buena estabilidad térmica acelerada
En el sistema de amplificación de colorante fluorescente RT-LAMP, el polvo liofilizado se sometió a tratamientos de almacenamiento a 45 °C durante 7 días, 45 °C durante 15 días y temperatura ambiente durante 19 días, respectivamente. Después de la aceleración térmica, el rendimiento del producto se mantuvo consistente con el de la versión líquida de la enzima Bst sin glicerol y no se observó ningún pico en el NTC (control de plantilla negativo).
3、Admite la recongelación después de la aceleración.
En el sistema de amplificación de colorante fluorescente RT-LAMP, el polvo liofilizado se sometió a tratamientos de almacenamiento a 45 °C durante 7 días y 45 °C durante 15 días, respectivamente. El polvo liofilizado después del tratamiento de aceleración térmica se sometió luego a una segunda ronda de liofilización (que incluyó una sola enzima y reactivos RT-LAMP). Los experimentos muestran que después del tratamiento acelerado y la segunda liofilización, el rendimiento del producto sigue siendo consistente con el de la versión líquida de la enzima Bst sin glicerol, y no se observó ningún pico en el NTC (control de plantilla negativo). La estabilidad del producto es buena, lo que favorece la liofilización secundaria y la aceleración después de la liofilización secundaria.
02 Aplicación del método colorimétrico de pH
1、Alta sensibilidad y buena especificidad.
En el sistema de amplificación colorimétrica de pH RT-LAMP, la sensibilidad de amplificación de la torta de polvo liofilizado 14405ES puede alcanzar 50 copias/T (tasa de detección del 100 %) y la especificidad es buena, sin detección en 24 pocillos de NTC (control de plantilla negativo).
2、Buena estabilidad térmica acelerada
En el sistema de amplificación colorimétrica de pH RT-LAMP, se investigó la estabilidad acelerada térmica del polvo liofilizado 14405ES a 45 °C durante 15 días, la estabilidad después de la liofilización secundaria después de la aceleración (rehidratación después de la aceleración a 45 °C durante 7 días) y la estabilidad de almacenamiento después de la rehidratación (almacenado a -20 °C durante 7 días después de la rehidratación). Los experimentos indican que el producto 14405ES tiene una buena estabilidad, sin impacto en el rendimiento del producto después de la aceleración térmica, y admite la liofilización secundaria después de la aceleración.
Recomendaciones de productos destacados
| Tipo de producto | Función del producto | Nombre del producto | Número de artículo |
| Mezcla RT-LAMP | Tinte fluorescente | LÁMPARA RT Teñir Ensayo Kit (UDG) Más) | 13762ES |
| Indicador de pH | LÁMPARA RT pH Sensible Colorante Equipo | 13906ES | |
| Indicador de pH liofilizable | LÁMPARA RT pH Sensible Teñir Cromogénico Versión Liofilizable Equipo | 13920ES | |
| Enzima Bst | Glicerol | Hieff® mejor Más ADN Polimerasa (40 (U/μL) | 14402ES |
| Libre de glicerol | Liofilizado mejor Más ADN Polimerasa (60 U/μL, sin glicerol) | 14405ES | |
| Buffer | Buffer básico (libre de colorantes, etc.) | 10× Hieff® mejor Más ADN Polimerasa Buffer | 15441ES |