En los últimos años, con el rápido desarrollo de las técnicas de biología molecular, Los métodos de diagnóstico basados ​​en ácidos nucleicos se han establecido ampliamente y se han aplicado ampliamente en las pruebas de laboratorio de enfermedades humanas. En comparación con otras técnicas de amplificación de ácidos nucleicos, la amplificación isotérmica ofrece las ventajas de ser rápida, eficiente y específica, y no requiere equipo especializado. Por lo tanto, desde su aparición, muchos académicos la han considerado como un método de detección que podría rivalizar con la PCR.

Como resultado, se cree que el desarrollo y la aplicación de instrumentos y kits de diagnóstico basados ​​en tecnología de amplificación isotérmica representarán una nueva dirección para las pruebas en el punto de atención (POCT) en el diagnóstico molecular.

Introducción a los principios de las principales tecnologías de amplificación isotérmica

1. Amplificación isotérmica mediada por bucle

Tecnología (LAMP)

Principio:La amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) utiliza la ADN polimerasa Bst, que tiene actividad de desplazamiento de cadena. Diseña cuatro tipos de cebadores específicos que se dirigen a seis regiones del gen objetivo, lo que permite una amplificación eficiente, rápida y específica de la secuencia objetivo en condiciones isotérmicas. La amplificación se puede realizar a una temperatura constante de 60-65 °C y, en un plazo de 15 a 60 minutos, se puede obtener una amplificación de ácido nucleico de 10⁹ hasta 10¹⁰ Se pueden lograr tiempos.

Ventajas y aplicaciones:Debido a Su rápida reacción, alta especificidad, equipo sencillo y de fácil manejo y resultados fáciles de interpretar.La amplificación isotérmica se ha aplicado en la detección de Bacterias patógenas, parásitos, virus, enfermedades y productos modificados genéticamente.También se espera que se utilice ampliamente en el diagnóstico clínico de enfermedades infecciosas, el monitoreo ambiental, la seguridad alimentaria y otros campos. Se ha convertido en un método ideal adecuado para pruebas moleculares en el punto de atención.Punto de control) plataformas.

Clasificación:Los métodos de detección LAMP se clasifican en varios tipos, entre ellos la turbidimetría, los métodos indicadores de pH, los métodos de colorantes fluorescentes (como NHB, calceína, SYBR Green, Syto, etc.) y los métodos de sonda fluorescente.

2. Tecnología de amplificación de la polimerasa recombinasa (RPA)

Principio:La enzima recombinasa, cuando se une a los cebadores, forma un complejo proteína-ADN que puede buscar secuencias homólogas dentro del ADN bicatenario. Una vez que los cebadores han localizado las secuencias homólogas, se produce una reacción de intercambio de hebras, que conduce a la formación e inicio de la síntesis de ADN, que amplifica exponencialmente la región objetivo en la plantilla. La hebra de ADN desplazada se une a la proteína de unión a hebra simple (SSB) para evitar un mayor desplazamiento. En este sistema, un evento de síntesis es iniciado por dos cebadores opuestos, que dependen principalmente de las actividades de la recombinasa, la enzima Bsu y la proteína SSB. La tecnología puede lograr una detección rápida del objetivo de interés en un plazo de 10 a 30 minutos a temperaturas que oscilan entre 37 y 42 °C.

Ventajas y aplicaciones:RPA se jacta Alta sensibilidad, fuerte especificidad, baja dependencia de equipos especializados.y la capacidad de integrar varios formatos de detección. Es particularmente adecuado para pruebas en el punto de atención a nivel de base y en entornos de campo. La RPA se puede aplicar ampliamente en diagnósticos in vitro, enfermedades animales, seguridad alimentaria, bioseguridad, agricultura y otros campos.

Clasificación:Los métodos de detección de RPA se clasifican en varios tipos, incluidos la electroforesis en gel, el método de sonda EXO, el método de sonda Fpg, la varilla medidora de flujo lateral (LF-RPA) y el análisis de floculación, entre otros.

Presentación del rendimiento del producto

01 Reactivos RT-LAMP con colorante sensible al pH

El RT-LAMP con colorante sensible al pH utiliza un colorante visual como indicador sensible, en condiciones isotérmicas de 60-65 ℃, para completar la amplificación de ácido nucleico de ARN en un solo paso utilizando un baño de agua a temperatura constante o una máquina de PCR estándar. En solo 30 minutos, el cambio de color después de la reacción se puede utilizar para determinar si hay una infección por patógeno, con resultados más intuitivos (positivo es naranja-amarillo, negativo es magenta). Este método es adecuado para pruebas rápidas de grandes poblaciones.

Productos recomendados:

Kit de colorante sensible al pH RT-LAMP (13906ES)
Kit de secado por congelación con versión cromogénica de colorante sensible al pH RT-LAMP (13920ES)

Muestra de rendimiento:

1.Guía de selección de mezcla RT-LAMP/RPA

Clasificación de productos	Mezcla RT-LAMP			Mezcla de RPA
Nombre del producto	Kit de ensayo de colorante RT-LAMP (UDG plus)	Kit de colorante sensible al pH RT-LAMP	Kit de secado por congelación con versión cromogénica de colorante sensible al pH RT-LAMP	Amplificador de fusible rápido
Número de artículo del producto	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Categoría de producto	Tinte fluorescente	Tinte sensible al pH	Tinte sensible al pH	Sonda
Componentes del producto	2 componentes Tampón, mezcla de enzimas	3 componentes Tampón, enzima RT, enzima Bst	4 componentes Tampón, enzima RT, enzima Bst, lioprotector	4 componentes Tampón, mezcla de enzimas y acetato de magnesio
Se admite la liofilización	No	Sí, sin lioprotector	Sí, contiene lioprotector.	No

2.Guía de selección de enzimas LAMP/RT-LAMP

Clasificación de productos	Enzima Bst		Transcriptasa inversa		Enzima UDG
Nombre del producto	Bst más	Bst Plus liofilizado	Ⅲ Transcriptasa inversa	III Transcriptasa inversa, Sin glicerol	Universidad de Georgia	UDG, sin glicerol
Número de artículo del producto	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Actividad enzimática	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
Componentes del producto	3 componentes	2 componentes	2 componentes	de un solo componente	soltero- componente	de un solo componente
Se admite la liofilización	No	Sí	No	Sí	No	Sí

3. Guía de selección de enzimas RPA

Clasificación de productos	Bsu	T4X	T4 Y	SSB	C.C.	EXO
Nombre del producto	Bsu	T4 UVS X	T4 UVS Y	gp 32	Creatina quinasa	Exonucleasa III
Número de artículo del producto	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Actividad enzimática	5 U/μL	2 μg/μl	2 μg/μl	5 μg/μl	2 μg/μl	100 U/μL
Componentes del producto	de un solo componente	de un solo componente	de un solo componente	de un solo componente	de un solo componente	2 componentes
Se admite la liofilización	No	No	No	No	No	No