La electroforesis de proteínas es una técnica de análisis de proteínas. Las proteínas se cargan negativa o positivamente en un tampón y se mueven hacia el ánodo en un campo eléctrico llamado electroforesis. Diferentes moléculas de proteínas tienen diferentes movilidades electroforéticas. Una parte muy importante de la electroforesis de proteínas es la preparación del gel. La preparación convencional del gel suele tardar varias horas y también existen problemas como fugas de líquido, gel irregular y burbujas de aire. Además de los problemas de preparación, los reactivos de la materia prima también tendrán cierta toxicidad, lo que provocará daños en el cuerpo del dispensador de pegamento, y la apariencia del pegamento prefabricado puede resolver estos problemas. Entonces, ¿cuál es el principio básico de la electroforesis de proteínas y cuál es la función y el principio del gel prefabricado?

1. ¿Cuál es el principio básico de la electroforesis de proteínas?
2. ¿Cuál es la función y el principio del pegamento prefabricado?
3. Introducción del pegamento prefabricado proporcionado por Yeasen
4. Preguntas frecuentes
5. Detalles del producto

1. ¿Cuál es el principio básico de la electroforesis de proteínas?

La mayoría de las macromoléculas biológicas, como las proteínas y los ácidos nucleicos, tienen grupos catiónicos y aniónicos, que se denominan zwitteriones. El método de electroforesis en zona en el que las partículas se dispersan en la solución y el gel de almidón, gel de agar o agarosa, gel de poliacrilamida, etc. como medio de soporte se denomina electroforesis en gel. La electroforesis en gel de poliacrilamida es un método de electroforesis en el que el soporte es un gel de poliacrilamida. Se cree que el tamaño del poro del gel de poliacrilamida se controla para polimerizar, y las proteínas se separan por la acción de un tamiz molecular similar.

La electroforesis de proteínas incluye dos formas, la electroforesis en gel de poliacrilamida nativa (Native-PAGE) y la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE). La Native-PAGE mantiene intactas las proteínas durante la electroforesis y las separa en un gradiente en función de su peso molecular, forma y carga acompañante. Por otro lado, la SDS-PAGE separa las proteínas según el peso molecular de sus subunidades. El SDS es un detergente aniónico. Como desnaturalizante y agente solubilizante, puede romper enlaces de hidrógeno intramoleculares e intermoleculares, plegar moléculas y destruir las estructuras secundarias y terciarias de las moléculas de proteína. Como fuerte agente reductor, el mercaptoetanol, ditiotreitol, puede romper los enlaces disulfuro entre los residuos de cisteína. Después de añadir el agente reductor y el SDS a la muestra y al gel, las moléculas se despolimerizan en cadenas polipeptídicas, y las cadenas laterales de aminoácidos despolimerizadas y el SDS se combinan en micelas de proteína-SDS. La carga negativa de las micelas de proteína-SDS supera la carga original de la proteína, eliminando la diferencia de carga y la diferencia estructural entre las diferentes moléculas. La movilidad de la proteína depende únicamente de la masa molecular de la proteína, y la masa molecular de la proteína se puede determinar comparándola con un estándar de masa molecular conocida.

2. ¿Cuál es la función y el principio del pegamento prefabricado?

En comparación con los geles tradicionales hechos a mano, los geles de proteína prefabricados Puede evitar el contacto con una gran cantidad de reactivos tóxicos, ahorrar mucho tiempo y resolver eficazmente el problema de las grandes diferencias en los geles fundidos a mano.

El gel consta de dos capas de gel diferentes, la capa superior es un gel apilable y la capa inferior es un gel separador. El gel apilable también se conoce como gel de apilamiento.La concentración de gel es relativamente pequeña y el tamaño de poro es relativamente grande. La muestra se agrega al gel de apilamiento y se concentra en una zona estrecha a través de la migración del gel de tamaño de poro grande. El gel de separación, también conocido como gel de electroforesis, generalmente tiene un tamaño de poro pequeño y la selección de la concentración de gel adecuada puede hacer que los componentes de la muestra se separen bien.

Los geles de separación se pueden dividir en geles fijos y geles de gradiente. La concentración de poliacrilamida es del 8%, 10%, 12%, 15%, 4% a 12% y 4% a 20%. Los primeros cuatro son geles prefabricados con una concentración fija, y los dos últimos son geles de gradiente. Las concentraciones representan el rango de pesos moleculares de proteínas aisladas. Los gradientes de gel se forman mediante mezcladores de gradiente. Se agrega una solución de acrilamida de alta concentración a la placa de vidrio y luego la concentración de la solución disminuye en un gradiente, y el tamaño de poro del gel es mayor en la parte superior y menor en la parte inferior. El gel fijador solo puede separar proteínas dentro de su rango de separación, ni demasiado grande ni demasiado pequeño. Los geles de gradiente no tienen esta limitación, donde las moléculas grandes se separan en la parte superior y las moléculas pequeñas se separan en la parte inferior. Dado que el tamaño de poro del gel de gradiente se vuelve gradualmente más pequeño, tiene un efecto de concentración sobre la proteína cerca del tamaño de poro que la proteína no puede penetrar, por lo que se formará una zona muy estrecha después de la electroforesis. Las proteínas con pequeñas diferencias en el peso molecular a menudo no se pueden separar en geles fijos, pero sí se pueden resolver en geles de gradiente.

3. Introducción del pegamento prefabricado proporcionado por Yeasen

YEASEN Gel prefabricado de proteína plus contiene Concentración de gradiente y concentración fija, una variedad de concentraciones diferentes pueden satisfacer las necesidades de diferentes electroforesis de proteínas. Se prepara mediante un proceso de preparación de gel único y tiene un excelente efecto electroforético. Es compatible con todo tipo de tanques de electroforesis en el mercado (Bio-RAD, Tanon, Life, etc.) y tiene las ventajas de amplia adaptabilidad, alta resolución, alta estabilidad, bandas claras y uniformes, etc.

3.1 YEASEN Gel prefabricado de proteína plus Actualiza a una tabla de plástico, ¡de mejor calidad!

Fácil de usar: listo para usar; retire la cinta adhesiva de la parte inferior del tablero de plástico.

Amplia gama de aplicaciones: compatible con proteínas desnaturalizadas y proteínas naturales.

Banda transparente: El tratamiento especial de las placas de plástico reduce en gran medida la adsorción de proteínas.

Ahorro de tiempo: El experimento se puede completar en 18 minutos como máximo.

Seguro de calidad: Garantía estricta de estabilidad entre lotes

Larga vida útil: se puede almacenar a 4 ℃ por 12 meses

3.2 Los siguientes parámetros pueden ayudarle a elegir la serie de gel adecuada

Sistema tampón de electroforesis: Tampón de procesamiento de proteína desnaturalizada o tampón de procesamiento de proteína natural

Número de pocillos y carga de muestra: 10 o 15 pocillos, el tamaño máximo de muestra fue de 70 μL y 40 μL, respectivamente

Concentración de gel: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabla 1.Concentración de gel y rango de separación lineal.

3.3 Presentación de datos

Figura 1. Los datos muestran

Figura 2. Los datos muestran

4. Preguntas frecuentes

Q1: ¿Deben los prefabricados? gel ¿Se puede colocar a 4℃? ¿Importa si se deja a temperatura ambiente durante un tiempo?

A: Se recomienda una temperatura de 4 ℃ y se puede conservar durante 12 meses. No lo guarde a una temperatura inferior a 0 ℃. Se puede conservar a temperatura ambiente (25 ℃) durante 30 días.

P2: ¿Cómo elegir entre concentración en gradiente y concentración fija? ¿Cuál es el peso molecular mínimo de la proteína separada por prefabricados? ¿gel?

A: El tamaño de la separación de proteínas por el prefabricado. gel está relacionado con su concentración y el rango de separación correspondiente se muestra en la figura anterior.

Prefabricados de concentración fija gel Tiene mejor resolución. Prefabricados con concentración de gradiente gel tiene un rango de separación más amplio y una gama más amplia de aplicaciones; Clientes Debe elegir la concentración adecuada según sus propias necesidades.

Nuestros prefabricados con pendiente de 4%-20% gel (Cat#36250, Cat#36256) tiene un amplio rango de separación para proteínas tan bajas como 3,5 kDa.

Figura 3. Prefabricado con gradiente datos del gel

Q3: ¿El prefabricado? gel ¿Tienes que estar equipado con tu buffer especial? ¿Puedes fabricar tu propio buffer?

A: Tampón especial YEASEN (Cat. n.° 36236, Cat. n.° 36237) y prefabricado La aplicabilidad del gel es mejor. No mezclar con otros tampones. El tampón se puede preparar comprando reactivos, pero los clientes Es necesario utilizar nuestra fórmula, que se puede encontrar en el prefabricado correspondiente. Instrucciones del gel.

Q4: ¿Cómo distinguir entre el gel separador? ¿Y el gel concentrado? ¿Es necesario para la electroforesis de voltaje seccional?

R: Los dos componentes son iguales, pero la concentración no es la misma, el ojo desnudo no puede distinguir; La altura del pegamento concentrado es de 1,5 cm.

No, se recomienda la electroforesis a 150 V y se requieren 30-40 minutos para completar el experimento.

Q5: ¿Su material prefabricado es... ¿Gel apto para todo tipo de tanques de electroforesis del mercado?

A: Sí, nuestros prefabricados gel Es adecuado para todo tipo de tanques de electroforesis del mercado.

Bio-rad Mini-Protean (sistema II/3/Tetra) y Tanon VE180 (observe el montaje inverso de la tira de sellado);

Minicelda Novex de Life Technology (utilizada con deflector especial);

Otro ancho de placa de gel en tanque de electroforesis de 10 cm.

5. Detalles del producto

Los productos proporcionados por Yeasen son los siguientes:

Tabla 2.Detalles del producto