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Los reactivos ECL, conocidos como sustratos quimioluminiscentes para la peroxidasa de rábano picante (HRP), son actualmente los reactivos más sensibles que se utilizan en la detección mediante Western blotting. Los problemas habituales de los reactivos ECL que se comercializan son la extinción, el alto nivel de fondo, la inestabilidad y la dificultad para detectar proteínas de baja abundancia, lo que puede afectar a los resultados experimentales finales.
Yeasen Biotech ha reunido a investigadores científicos destacados en el campo de la inmunodetección. Al controlar estrictamente la calidad de las materias primas de luminol y mejorar continuamente la formulación de potenciadores y estabilizadores, hemos desarrollado cuatro tipos de reactivos ECL para satisfacer las necesidades de diferentes experimentos. Estos incluyen productos mejorados, ultrasensibles, duraderos y de sensibilidad ultraalta. No solo cumplen con los requisitos de detección de proteínas objetivo de baja a alta abundancia, sino que también mejoran la intensidad de la luminiscencia sin afectar el experimento, lo que da como resultado imágenes más claras.
Características del producto
- Excelente sensibilidad — Detección de antígenos desde niveles de picogramos hasta femtogramos bajos.
- Mayor relación señal-ruido — Los sustratos luminiscentes precisos reducen el ruido de fondo.
- Mayor eficiencia en cuanto a anticuerpos — Sistemas de sustrato optimizados para una mayor afinidad de unión de anticuerpos.
- Alta relación costo-rendimiento — Mayor rendimiento a un precio más bajo.
- Excelente estabilidad — Los nuevos oxidantes garantizan un almacenamiento estable a 4 °C durante hasta un año.
Principio del producto
El principio básico de la detección del reactivo ECL es la luminiscencia de las reacciones de oxidación: el luminol, el componente principal del sustrato luminiscente, se oxida con H2O2 en condiciones alcalinas mediante la catálisis de la peroxidasa de rábano picante (HRP), formando un intermedio en estado excitado de ácido 3-amino-ftálico. Cuando vuelve al estado fundamental, se emiten fotones, con una longitud de onda de emisión máxima de 425 nm. Estas señales de fotones se pueden capturar mediante películas de rayos X o dispositivos de imágenes CCD.
Guía de selección
Yeasen ofrece actualmente cuatro tipos de productos ECL, cada uno con sus características únicas, para satisfacer completamente las necesidades de las aplicaciones de inmunotransferencia de los usuarios.
Entonces, ¿qué producto deberías elegir para tu experimento?
Tabla 1.Guía de selección de reactivos ECL
| Yeasen | ECL mejorado Tipo mejorado | Súper ECL Tipo ultrasensible | Superdura Tipo duradero | Señal maxi Tipo de sensibilidad ultraalta |
| Muestras aplicables | Objetivo con alta abundancia, muestras de proteínas de rutina | Objetivo con baja abundancia, muestras limitadas | Objetivo con baja abundancia, muestras limitadas | Objetivo con abundancia extremadamente baja, muestras preciosas |
| Sensibilidad de detección | Nivel de picogramos medio | Nivel bajo de picogramos | Nivel medio de femtogramos | Nivel bajo de femtogramos |
| Duración de la señal | < 2 horas | < 12 horas | < 24 horas | < 8 horas |
| Sistema de detección aplicable | Todos los reactivos son adecuados para películas de rayos X y dispositivos de imágenes CCD. | |||
| Concentración de dilución del anticuerpo primario | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10 000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Concentración de dilución del anticuerpo secundario | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Membrana recomendada | Membrana NC | Membrana NC o membrana PVDF | Membrana NC o membrana PVDF | Membrana NC o membrana PVDF |
| Estabilidad de almacenamiento | Temperatura ambiente durante 1 año | 4°C durante 1 año, temperatura ambiente durante medio año | ||
| Ventajas | La señal más fuerte entre el mismo nivel de sensibilidad. | La mejor relación costo-rendimiento, adecuada para la mayoría de los experimentos de WB | Mayor duración de señal, extremadamente adecuada para exposiciones múltiples | Excelente sensibilidad, extremadamente adecuada para la detección de trazas de proteínas. |
Nota: La concentración de dilución de anticuerpos recomendada se basa en una concentración de stock de anticuerpos de 1 mg/mL.
Aplicación del producto
Los reactivos ECL de Yeasen tienen mejores efectos de uso en comparación con los productos de otras marcas del mismo nivel.
Figura 1. Comparación de los efectos de detección entre el sustrato ultrasensible Super ECL de Yeasen y el sustrato equivalente Pico de la marca T.
Figura 2. Comparación de los efectos de detección entre el sustrato de ultra alta sensibilidad ECL MaxiSignal de Yeasen y el sustrato equivalente West Femto de otras marcas.
Figura 3.Comparación de los efectos de detección entre el sustrato duradero SuperDura ECL de Yeasen y el sustrato equivalente West Dura de otras marcas.
Literatura publicada
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Las células B que expresan leucina-ARNt-sintasa-2 contribuyen a la inmunoevasión del cáncer colorrectal. Inmunidad. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al. Estructura e ingeniería de la enzima en miniatura Acidibacillus sulfuroxidans Cas12f1 [J]. Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709. DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. El macrófago IRX3 promueve la obesidad inducida por la dieta y la inflamación metabólica. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (SI:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Regulación de los ritmos y la memoria del hipocampo mediante la plasticidad sináptica en las interneuronas inhibidoras. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Ventaja de precio
Figura 7.Comparación de precios de los productos Yeasen ECL con productos de otras marcas del mismo nivel
Preguntas frecuentes
| Problemas encontrados | Análisis de causa | Soluciones recomendadas |
| La película tiene imágenes invertidas | La película tiene imágenes invertidas | La película tiene imágenes invertidas |
| La película tiene bandas marrones o amarillas. | ||
| Extinción de la fluorescencia | El tiempo de funcionamiento es demasiado largo, la membrana se seca gradualmente | Evitar que la membrana se seque |
| Contaminación del envoltorio plástico, del revelador o del fijador. | Desarrollar buenos hábitos experimentales | |
| HRP insuficiente en el sistema de reacción | Aumentar el material marcado con HRP | |
| No hay bandas o señal débil en la película | Baja eficiencia de transferencia | Mejore la eficiencia de la transferencia, use un marcador preteñido para evaluar |
| Antígeno/anticuerpo insuficiente o no coincidente | Aumente la cantidad de antígeno/anticuerpo o seleccione el antígeno/anticuerpo apropiado | |
| Problemas con las películas de rayos X | Si la película de rayos X está completamente negra (no transparente) después de la exposición, indica que la película está completamente expuesta; use una nueva película de rayos X | |
| Problemas de desarrolladores y reparadores | Preexponga una película para verificar; si hay problemas, reemplácela con un nuevo revelador/fijador. | |
| Exceso de HRP en el sistema de reacción | Diluir el material marcado con HRP | |
| Altos antecedentes | Concentraciones de anticuerpos primarios y secundarios demasiado altas | Reducir la concentración de anticuerpos, prolongar el tiempo de bloqueo |
| Anticuerpos no limpiados a fondo | Aumentar el número de lavados | |
| Bloqueo incompleto | Optimizar las condiciones de bloqueo | |
| Se utilizó un agente de bloqueo incorrecto | Utilice un agente bloqueador diferente | |
| Sobreexposición | Reducir el tiempo de exposición | |
| Pobre especificidad de anticuerpos | Reemplazar con anticuerpos de alta calidad | |
| Exceso de HRP en el sistema de reacción | Diluir el material marcado con HRP | |
| Bandas con espacios vacíos | Alta concentración de antígeno y anticuerpo secundario. | Diluya la muestra y vuelva a ejecutar el gel, o enfríe la solución cromogénica mezclada y aplíquela a la membrana para un desarrollo rápido e inmediato. |
| Forma de banda irregular | Burbujas de aire durante la transferencia o hidratación desigual con metanol (para membranas de PVDF) | Optimizar las condiciones de transferencia. |
| Anuncios de películas | Agregados de material marcado con HRP | Filtrar material marcado con HRP con una membrana de 0,2 μm |
| Bandas no específicas | Exceso de HRP en el sistema de reacción | Diluir el material marcado con HRP |
| SDS que provoca unión no específica a proteínas | No utilice SDS en el procedimiento experimental. | |
| Pobre especificidad de anticuerpos | Reemplazar con anticuerpos de alta calidad | |
| Bloqueo inadecuado | Aumente el tiempo de bloqueo o utilice un agente bloqueador diferente |
Información de pedidos
| Nombre del producto | Número de producto | Especificación |
| Reactivo de detección Super ECL | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Kit de sustrato quimioluminiscente ECL mejorado | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| Sustrato de duración extendida SuperSignal SuperDura | 36223ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |
| Sustrato de máxima sensibilidad SuperSignal MaxiSignal | 36224ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |