Para brindar más opciones de tratamiento a los pacientes diabéticos, a principios del siglo XXI surgieron algunos nuevos medicamentos para la diabetes, como los análogos del péptido similar al glucagón-1 (GLP-1). Semaglutida, como uno de los medicamentos representativos de los análogos de GLP-1, ha demostrado en múltiples estudios de ensayos clínicos que controla eficazmente el azúcar en sangre cuando se combina con diferentes medicamentos hipoglucemiantes orales, y puede ayudar a los pacientes a perder peso, reducir la presión sistólica y mejorar la función de las células β pancreáticas. Sus tres formulaciones (inyección hipoglucémica Ozempic, medicamento hipoglucemiante oral Rybelsus e inyección para bajar de peso Wegovy) superaron los $20 mil millones en ventas en 2023. Debido a su desempeño sobresaliente en Reducción de azúcar en sangre y pérdida de pesoLa industria espera que Semaglutide mantenga un fuerte impulso de ventas durante algún tiempo, atrayendo a muchas empresas a competir por el diseño.

La estructura de la cadena principal de semaglutida es un polipéptido intermedio de 29 aminoácidos Arg34GLP-1(9-37) o un polipéptido intermedio de 27 aminoácidos Arg34GLP-1(11-37). La producción y fabricación de este polipéptido intermedio incluye principalmente métodos de síntesis química y biopreparación. En comparación con la síntesis química, la biopreparación ha superado el cuello de botella de capacidad y es más adecuada para la producción continua a gran escala, lo que puede reducir aún más los costos de producción y brindar beneficios económicos más significativos.

Tabla 1. Ejemplos de métodos de biopreparación para polipéptidos intermedios de semaglutida

	Método de biopreparación (Ejemplo 1)	Método de biopreparación (Ejemplo 2)
Síntesis de genes	Sintetizar una secuencia de proteína de fusión, que incluye un péptido de fusión, un sitio de escisión de la enteroquinasa y la secuencia de la molécula principal objetivo.	Sintetizar una secuencia de expresión en tándem con la secuencia del gen GLP-1(9-37)
Construcción de bacterias de ingeniería	Introducir en E. coli para construir bacterias recombinantes modificadas genéticamente	Introducir en E. coli para construir bacterias recombinantes modificadas genéticamente
Expresión de proteína de fusión	Al optimizar la secuencia del péptido de fusión, cambiar el punto isoeléctrico y la hidrofilicidad de la proteína, etc., se aumenta de manera efectiva la expresión de la proteína de fusión.	Después de la inducción de fermentación de alta densidad, se obtiene una proteína de cuerpo de inclusión de expresión en tándem que expresa GLP-1(9-37), y el replegamiento produce una proteína soluble.
Adquisición de péptidos intermedios	Después de que la proteína de fusión se somete a escisión por enteroquinasa, purificación y otros pasos, se puede obtener el polipéptido intermedio de semaglutida Arg34GLP-1(9-37).	La proteína soluble se puede obtener después de someterse a una escisión enzimática de dos pasos con la enzima Kex2 y la carboxipeptidasa B, y pasos de purificación, para obtener el polipéptido intermedio semaglutida GLP-1(9-37).

La enzima enteroquinasa o Kex2 combinada con carboxipeptidasa B es una enzima clave para la cadena peptídica principal de semaglutida (método de biopreparación), y el efecto de corte enzimático y el costo son cruciales para la producción.Yisheng Biology se compromete a proporcionar materias primas enzimáticas estables para empresas farmacéuticas, ofreciendo enzimas de alta calidad y estándares de control de calidad completos para ayudar a los clientes a mejorar la capacidad de producción y la estabilidad de los lotes, reducir costos e ingresar rápidamente. el mercado.

Yeasen Solución global para Semaglutida

1.Enteroquinasa recombinante

Enteroquinasa recombinante (rEK) es una subunidad de cadena ligera de enteroquinasa intestinal bovina de alta pureza, que tiene la misma actividad enzimática de corte específica que la enteroquinasa extraída naturalmente, con un sitio de corte de Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, capaz de eliminar la proteína de fusión ubicada en el extremo N de la proteína para eliminar las etiquetas de fusión innecesarias, y es una proteasa comúnmente elegida para la fusión N-terminal. Tiene un bajo nivel de corte irregular en otros residuos.

Actualmente, Yisheng ofrece enteroquinasas recombinantes de diferentes fuentes, diferentes grados y con o sin etiquetas His para que los clientes elijan.

Recombinante de Yeasen Bovino La enteroquinasa His expresada en levadura es una enteroquinasa bovina de alta pureza, alta actividad y alta especificidad expresada por la secreción de Pichia pastoris. Puede escindir eficazmente las proteínas de fusión dentro de un amplio rango de pH (4,5-9,5) y un amplio rango de temperatura, y aún tiene actividad parcial bajo varios detergentes y desnaturalizantes. Este producto tiene una etiqueta His, que se puede eliminar fácilmente a través de Ni²⁺ columna de afinidad después de la reacción de corte, simplificando enormemente el proceso de purificación posterior.

Características

Alta especificidad: Una proteasa específica que corta en el extremo carboxilo de la lisina que contiene cuatro ácidos aspárticos: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;

Alta pureza: Sin otras proteasas, sin corte no específico;

Sin origen animal: Producción recombinante, sin contaminación viral exógena, sin uso de materias primas de origen animal en el proceso de producción;

Calidad estable: La producción en lotes puede garantizar una producción en lotes estable y continua; sin diferencias de lote a lote, calidad estable;

Capacidad suficiente: El fermentador de 500L puede obtener ~50 MU de enteroquinasa, Yeasen tiene fermentadores de diferentes sistemas de 5L a 1500L para cumplir con los diferentes requisitos de los clientes en diferentes etapas para los requisitos de lotes de productos;

Suministro de productos de diferentes grados: Los productos de grado I+D (20395ES), grado GMP (20396ES) y grado GMP cumplen con el sistema de gestión de calidad ISO 13485.

Datos de prueba

Prueba de actividad de enteroquinasa:

Figura 1. El efecto de corte enzimático de Yeasen enteroquinasa (20395ES) es consistente con Competidor N

Nota: El sustrato positivo (20391ES) es una proteína de fusión compuesta por dos secuencias proteicas específicas conectadas por DDDDK (sitio de reconocimiento y corte de enteroquinasa), con un peso molecular total de aproximadamente 64,6 kDa, que la enteroquinasa puede cortar específicamente en dos fragmentos proteicos independientes, con pesos moleculares de aproximadamente 27,9 kDa y 36,6 kDa, respectivamente. Este producto, como sustrato de enteroquinasa, se puede utilizar para la detección semicuantitativa o cualitativa de la actividad enzimática de enteroquinasas recombinantes o naturales.

Prueba de pureza de enteroquinasa:

Nota: El valor teórico de la enteroquinasa es de 22,7 kDa. Debido al efecto de glicosilación después de la expresión en Pichia pastoris, la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS muestra que el peso molecular de la proteína diana es de aproximadamente 40 kDa. Generalmente, las bandas glicosiladas tendrán una banda ligeramente difusa que se extiende hacia arriba (como se muestra en la figura de la derecha). Nuestra empresa también puede proporcionar la enzima de desglicosilación Endo H (Cat. n.° 20414) para que los clientes la desglicosilien y la analicen en gel para medir la pureza (como se muestra en la figura de la izquierda).

Prueba de especificidad de corte de enteroquinasa:

Figura 3. Yeasen La enteroquinasa (20395ES) tiene menos capacidad de corte no específico que el competidor N importado.

Nota: En las mismas condiciones, Yeasen Se utilizaron enteroquinasa (20395ES) y enteroquinasa del competidor importado N para pruebas de corte enzimático. Los resultados muestran que después de la purificación, las impurezas de corte no específicas producidas por Yeasen Los niveles de enteroquinasa (20395ES) son significativamente inferiores a los del competidor importado N.

Prueba de estabilidad acelerada por congelación-descongelación repetida de enteroquinasa:

Figura 4. Yeasen La prueba de estabilidad acelerada de congelación-descongelación repetida de enteroquinasa (20395ES) muestra que la actividad enzimática no cambió significativamente.

Nota: Se seleccionaron al azar 2 lotes de enteroquinasa de Yeasen (20395ES), se repitió la congelación-descongelación 10 veces y, 20 veces, la actividad enzimática no cambió significativamente con respecto a la actividad enzimática inicial.

Almacenamiento a 25°C durante 7, 16, 32 días, 37°C durante 7, 14 días, la actividad enzimática no cambió significativamente con respecto a la actividad enzimática inicial.

2. Enzima recombinante Kex2, carboxipeptidasa B

Tabla 2. Guía de selección de productos de la enzima carboxipeptidasa B recombinante Kex2 de Yeasen

Número de producto	20418ES	20417ES
Producto Nombre	Proteasa Kex2 recombinante expresada en levadura	CPB recombinante expresado en E. coli
Grado del producto	Grado GMP	Grado GMP
Fuente	Expresión recombinante de Pichia pastoris	Expresión recombinante de E. coli
Actividad	≥10,0 unidades/mg por vía oral	≥170 Unidades USP/mg pro
Sitio de escisión	Reconoce y escinde específicamente enlaces peptídicos en la terminal del ácido carboxílico de aminoácidos dibásicos como Arg-Arg, Lys-Arg.	Hidroliza específicamente las proteínas en el lado amino-terminal de los aminoácidos básicos (lisina, arginina, histidina) en el extremo C.
Aplicación del producto	1. Proceso de escisión enzimática en la producción de fármacos peptídicos. 2. Digestión enzimática de proteínas y mapeo de péptidos, secuenciación, etc.	1. Producción de insulina recombinante y sus análogos. 2.Determinación de aminoácidos en el extremo C de las proteínas. 3. Eliminación de etiquetas de histidina en el extremo C de las proteínas. 4. Producción de otras sustancias peptídicas recombinantes. 5. Síntesis enzimática de ciertos compuestos especiales.

Enzima Kex2 combinada con carboxipeptidasa B: requisitos del proceso de expresión en tándem, alto rendimiento del intermediario semaglutida después del corte enzimático

Yaliviar Base de producción de enzimas de grado GMP

Base de producción de enzimas moleculares ultralimpias certificada por ISO - UCF.ME, equipada con equipos de purificación y análisis fisicoquímico de AKTA de grado industrial, unidades de fermentación de alta densidad de cien litros, talleres de limpieza estándar de grado diez mil y líneas de producción automatizadas. Posee sistemas de fermentación y purificación de varias especificaciones, incluidos 5L, 10L, 30L, 100L, 500L y 1.500L, con la capacidad de aumentar la producción de 5L a 1.500L en el campo de la industrialización de enzimas moleculares, satisfaciendo plenamente las necesidades de materia prima enzimática básica de los clientes posteriores en diferentes etapas, como investigación y desarrollo, escala piloto y producción a gran escala.

Yeasen cuenta con un sólido equipo de I+D y una base avanzada de producción de enzimas, mejorando continuamente la calidad y la capacidad de las enzimas clave para la producción de semaglutida (enteroquinasa recombinante) a través de la innovación y optimización tecnológica continua, ofreciendo precios graduales para diferentes especificaciones para satisfacer las diversas necesidades de los clientes en diferentes etapas de producción.

Información de productos promocionales

Nombre del producto	Número de producto	Especificación	Precio de lista ($）	Promocional Precio ($)
Enteroquinasa bovina recombinante, His, expresada en levadura	20395ES60/76/90/ 92/94	100 U/500 U/ 5000 tú/ 100 ku/ 1 UM (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ 19600

Información relacionada con el producto

Nombre del producto	Número de producto	Especificación
Proteína de control de escisión (enteroquinasa)	20391ES03/11	1 mg/4 mg
Proteasa Kex2 recombinante expresada en levadura	20418ES60	100 μg
CPB recombinante expresado en E. coli	20417ES03/10	1 mg/10 mg
Endo yo	20414ES92/97	10000 U/50000 U