Descripción de antecedentes

La purificación de proteínas es el proceso de aislar la proteína diana de las proteínas totales en la muestra experimental, manteniendo al mismo tiempo la actividad biológica y la integridad química de la proteína diana. Durante la construcción de vectores, además de algunos elementos de expresión necesarios, también es necesario considerar la optimización de codones y la elección de etiquetas. La elección de la etiqueta correcta no solo es beneficiosa para la purificación de proteínas y la promoción de la solubilidad de las proteínas, sino que tampoco debería afectar la estructura y la función de la proteína y las aplicaciones posteriores. Esta sección se centra en la introducción de las etiquetas His y GST.

Tabla 1. Introducción a la etiqueta His and GST

Etiqueta	Tamaño kDa	Secuencia	Pureza	Solubilidad	Eliminación de etiquetas	Enzima de escisión de etiquetas
Su	~0,84	HHHHHH	+	+	No requerido	Proteasa TEV
Impuesto sobre bienes y servicios	26	Compuesto por 211 aminoácidos	++	++	Requerido	Proteasa 3C/PSP

Purificación por afinidad de proteínas His Tag

La resina de agarosa HisSep Ni-NTA se basa en un gel de agarosa altamente reticulado como matriz, acoplado químicamente con ácido nitrilotriacético tetracoordinado (NTA) como ligando y después de quelar los iones de níquel (Ni²⁺), forma una estructura octaédrica muy estable con iones de níquel en el centro del octaedro. Esta estructura puede proteger a los iones de níquel de ataques de moléculas pequeñas. En comparación con la resina Ni-IDA, es más estable y puede soportar ciertas concentraciones de agentes reductores, agentes desnaturalizantes o agentes de acoplamiento en condiciones adversas. En comparación con la resina Ni-TED, tiene una mayor capacidad de adsorción para las proteínas objetivo. Se ha convertido en una de las resinas indispensables para purificar proteínas marcadas con His en los laboratorios.

Figura 1. Diagrama del principio del producto de la resina His.

Tabla 2. Yeasen Guía de selección de productos de purificación

Número de producto	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Nombre del producto	Resina de agarosa HisSep Ni-NTA	HisSep Ni-NTA Resina de Agarosa 6FF	Columna de cromatografía HisSep Ni-NTA 6FF, 5 ml/1 ml	Cuentas magnéticas HisSep Ni-NTA
Matriz	Gel de agarosa reticulado al 6 %	Gel de agarosa al 6% altamente reticulado	Gel de agarosa al 6% altamente reticulado	Microesferas magnéticas de agarosa
Resistencia a la presión	0,1 MPa, 1 bar	0.3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar	N / A
Capacidad	>40 mg 6×proteína marcada con His/mL matriz	>40 mg 6×proteína marcada con His/mL matriz		> 40 Perlas magnéticas de proteína marcada con 6×His mg/mL
Sugerencia de purificación	Matriz Con resistencia a la presión media, adecuado para el método de incubación, purificación a pequeña escala con columna de gravedad.	Matriz con alta resistencia a la presión, se puede utilizar para la purificación industrial de proteínas a gran escala con un instrumento de purificación de proteínas.		Purificación de proteínas rápida y cómoda mediante separación magnética
Tolerancia	8 M de urea, 6 M de ácido clorhídrico, 0,5-1 mM de DTT, 1 mM de EDTA, etc.
Solicitud	La purificación de proteínas marcadas con His es la primera opción, alta carga, tolerancia promedio, especialmente adecuada para el sistema de purificación de expresión procariota.

Apéndice: Características del producto HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES)

1. En comparación con las columnas y resinas preenvasadas tradicionales, no es necesario centrifugar varias veces las muestras ni controlar el caudal de las mismas, lo que reduce en gran medida el tiempo de purificación.
2. La purificación en un solo paso puede lograr una pureza de más del 95% de la proteína objetivo.
3. Alto rendimiento proteico objetivo: el rendimiento puede alcanzar el 70-80%.
4. Se puede reutilizar hasta 5 veces.
5. Fácil de ajustar la concentración y el volumen de la proteína objetivo.
6. Pequeña pérdida de proteínas y sin riesgo de desnaturalización o precipitación de proteínas.

Medios de purificación por afinidad de proteínas con etiqueta GST

La cromatografía de afinidad de la proteína etiquetada con GST utiliza la afinidad covalente entre la proteína de fusión GST y el glutatión fijado (GSH) a través de enlaces de azufre, y purifica según el principio de elución por intercambio de GSH. En esta purificación, un glutatión se combina con el brazo del gel a través de un enlace de azufre, y luego se utiliza la fuerza de acción específica entre el glutatión y la glutatión S-transferasa (es decir, etiqueta GST) para hacer que la proteína de fusión etiquetada con GST se combine con el glutatión del brazo en el gel, separando así la proteína etiquetada de otras proteínas. El glutatión generalmente tiene la forma oxidada GSSG y la forma reducida GSH. Cuando utilizamos la elución con GSH, el GSH competirá con el glutatión del gel para combinarse con la proteína de fusión, eluyendo así la proteína objetivo.

La resina de glutatión agarosa GSTSep es una resina purificadora de proteínas con etiqueta GST, fabricada estructuralmente mediante la combinación química covalente de glutatión reducido con un gel de agarosa al 6 % como matriz a través de un brazo de 12 átomos. Este diseño ha mejorado enormemente la eficiencia de purificación de la resina, lo que le permite transportar más de 20 mg de proteína de fusión GST por mililitro de medio. El producto tiene buena especificidad y rendimiento de costo, y se puede utilizar para purificar varias glutatión S-transferasas, proteínas dependientes de glutatión y derivados recombinantes de glutatión en un solo paso.

Tabla 3. Yeasen Guía de selección de productos de purificación de GST

Número de producto	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Nombre del producto	Resina de glutatión agarosa GSTSep	Resina de glutatión agarosa GSTSep 4FF	Columna de cromatografía GSTSep Glutathione 4FF, 1 ml/5 ml	Glutatión GSTSep Perlas magnéticas
Matriz	Gel de agarosa reticulado al 6 %	Gel de agarosa al 4% altamente reticulado	Gel de agarosa al 4% altamente reticulado	Microesferas magnéticas de agarosa
Resistencia a la presión	0,1 MPa, 1 bar	0.3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar	N / A
Capacidad	>20 mg de proteína GST (40 kDa)/ml de matriz	>10 mg de proteína GST (40 kDa)/ml de matriz		5-10 mg de proteína de fusión de etiqueta GST/ml de perlas magnéticas
Solicitud	Alta carga, Matriz Con resistencia a la presión media, adecuado para el método de incubación, purificación a pequeña escala con columna de gravedad, recomendado para clientes a escala de laboratorio.	Aplicación: Baja carga, alta resistencia a la presión de la matriz, se puede utilizar para la purificación industrial de proteínas a gran escala con un instrumento de purificación de proteínas, más fácil de ampliar.		Purificación de proteínas rápida, cómoda y con la carga más baja mediante separación magnética

Apéndice: Características del producto GSTSep Glutathione MagBeads (Cat. n.° 20562ES)

1. Purifica directamente proteínas objetivo de alta pureza de muestras biológicas a través de la separación magnética en un solo paso, simplificando enormemente el proceso de purificación y mejorando la eficiencia de purificación, adecuado para la purificación conveniente de proteínas de fusión GST en la investigación científica y los campos industriales.
2. Al utilizar esta perla magnética para experimentos de pull-down de GST, dado que la separación magnética no requiere centrifugación múltiple ni tiempos de incubación prolongados, la operación es más simple, más rápida y más automatizada en comparación con los métodos de cromatografía tradicionales.

Información del producto

Posicionamiento del producto	Nombre del producto	Número de producto	Especificación
Purificación de proteínas His Tag	Agarosa HisSep Ni-NTA Resina	20502ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Agarosa HisSep Ni-NTA Resina 6FF	20503ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Columna de cromatografía HisSep Ni-NTA 6FF, 5 ml	20504ES08/25	5 ml/5 x 5 ml
	Columna de cromatografía HisSep Ni-NTA 6FF, 1 ml	20505ES03/08	1 ml/5 x 1 ml
	Cuentas magnéticas HisSep Ni-NTA	20561ES08/25	5 ml/25 ml
Purificación de proteínas con etiqueta GST	Resina de glutatión agarosa GSTSep	20507ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Resina de glutatión agarosa GSTSep 4FF	20508ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Columna de cromatografía de glutatión 4FF GSTSep, 1 ml	20509ES03/08	1 ml/5 x 1 ml
	Columna de cromatografía de glutatión 4FF GSTSep, 5 ml	20510ES08/25	5 ml/5 x 5 ml
	Perlas magnéticas de glutatión GSTSep	20561ES08/25	5 ml/25 ml