تفاوت بین کاربردهای تشخیص لوسیفراز منفرد و دوگانه

سنجش های ژن گزارشگر در درجه اول به سنجش های ژن گزارشگر تک لوسیفراز و سنجش ژن گزارشگر دوگانه لوسیفراز تقسیم می شوند. در کاربردهای خاص، چگونه می توان تعیین کرد که آیا آزمایش از سیستم تشخیص تک لوسیفراز یا دو لوسیفراز استفاده می کند؟ بیایید نگاهی به تفاوت ها بیندازیم.

سیستم سنجش منفرد گزارشگر لوسیفراز

تعداد ژن های گزارشگر: یک ژن گزارشگر لوسیفراز کرم شب تاب.

نوع انتقال: یک پلاسمید ژن گزارشگر منفرد، پس از ترانسفکشن، انتخاب دارو برای ساخت یک خط سلولی ژن گزارشگر پایدار بیان کننده لوسیفراز استفاده می شود.

فرآیند تشخیص: فقط سیگنال لوسیفراز کرم شب تاب باید شناسایی شود، عملیات ساده، دوره تشخیص کوتاه، مناسب برای غربالگری دارو با توان بالا.

تحلیل سناریوی کاربردی: معمولاً از طریق ساخت یک رده سلولی مونوکلونال با بیان بیش از حد پایدار است، زیرا سطح بیان این خطوط سلولی نسبتاً پایدار و یکنواخت است، بدون تأثیر تغییرات تجربی به دلیل کارایی ترانسفکشن و زنده ماندن سلول. این عملیات ساده است و از آنجایی که فقط سیگنال لوسیفراز کرم شب تاب شناسایی می شود، تجزیه و تحلیل داده ها راحت تر است. همراه با مزایای زمان تشخیص کوتاه، به ویژه برای غربالگری دارو با توان بالا مناسب است و نیازهای تشخیص نمونه در مقیاس بزرگ را برآورده می کند.

سیستم تشخیص ژن گزارشگر دوگانه لوسیفراز

مقدار ژن گزارش شده: دو ژن گزارشگر لوسیفراز کرم شب تاب و رنیل لوسیفراز.

نوع انتقال: انتقال همزمان دو پلاسمید ژن گزارشگر، عمدتاً از طریق ترانسفکشن گذرا.

فرآیند تشخیص: لازم است ابتدا سیگنال فایرفلای و سپس سیگنال رنیلا شناسایی شود و از نسبت این دو (Firefly/Renilla) برای محاسبه داده نهایی استفاده شود.

تجزیه و تحلیل سناریوی کاربردی: عموماً از طریق ترانسفکشن گذرا، همراه با ترانسفکشن پلاسمید حاوی ژن Renilla luciferase به عنوان مرجع داخلی، معیاری برای آزمایش فراهم می‌کند و در نتیجه تداخل عوامل خارجی مانند زنده‌مانی سلول و کارایی انتقال را کاهش می‌دهد. از طریق محاسبه نسبت، می توان تغییرات در تعداد سلول، کارایی ترانسفکشن و فعالیت سلول را تصحیح کرد و دقت نتایج تجربی را بهبود بخشید. این یک ابزار مهم در زمینه تنظیم بیان ژن، مسیرهای انتقال سیگنال و غربالگری دارو است.

سری محصول

Yeasen سری محصولات تشخیص ژن Luciferase Reporter یک راه حل تشخیص کمی راحت و کارآمد را ارائه می دهد. طراحی تک جزئی فرآیند استفاده را ساده می کند و ترکیب کامل حساسیت بالا با نیمه عمر سیگنال فوق العاده طولانی 5 ساعت نیازهای تشخیص غربالگری دارو در مقیاس بزرگ را برآورده می کند. ما سه محصول را ارائه می دهیم: Bio-One Step، Steady-One Step، و Bright-One Step، برای انطباق با نیازهای مختلف حساسیت و ثبات.

نام محصول	Bio-One Step	ثابت-یک قدم	Bright-One Step
کد محصول	11411ES	11413ES	11412ES
سناریوهای کاربردی و خصوصیات	این کیت تعادل نسبی بین شدت سیگنال و ثبات ایجاد می کند. شدت سیگنال نسبتاً بالایی را حفظ می کند و در عین حال شدت سیگنال را در یک دوره زمانی مشخص نسبتاً ثابت نگه می دارد.	نیمه عمر می تواند بیش از 5 ساعت طول بکشد. به خصوص در 2 ساعت اول، تغییرات مقدار لومینسانس حداقل است. برای سنجش توان بسیار بالا یا اندازه گیری صفحه 384 چاهی مناسب است.	حساسیت بالا و شدت سیگنال بالا. مناسب برای آزمایش هایی که نیاز به حساسیت بالایی دارند.
نیمه عمر سیگنال	60 دقیقه	5 ساعت	30 دقیقه
ویژگی های عملیاتی	یک قدم	یک قدم	یک قدم

مزایای محصول

نیمه عمر سیگنال طولانی: نیمه عمر سیگنال می تواند تا 5 ساعت برسد، نیازهای آزمایشات با توان بالا را برآورده می کند و از تفاوت سیگنال ناشی از اختلاف زمانی بین اولین و آخرین چاه به دلیل تعداد زیاد نمونه جلوگیری می کند و نتایج پایدارتر و قابل اعتمادتری را تضمین می کند.

سیگنال فلورسانس قوی: مقدار سیگنال می تواند به 8 مرتبه بزرگی برسد، که یک پنجره تشخیص بزرگ و پشتیبانی داده قوی برای غربالگری اولیه دارو و ارزیابی اثربخشی ارائه می دهد.

عملیات آسان: عملیات یک مرحله ای از روش های آزمایشی پیچیده جلوگیری می کند. به سادگی معرف تشخیص را اضافه کنید و قبل از راه اندازی دستگاه برای تشخیص، 5 دقیقه صبر کنید.

انتخاب های متعدد: با توجه به سناریوهای کاربردی مختلف، 3 محصول مختلف موجود است که می توان آنها را بر اساس الزامات تجربی برای ارزش سیگنال و پایداری سیگنال انتخاب کرد.

اطلاعات محصول

01 مقایسه عملکرد برای Yeasen ژن گزارشگر متفاوت کیت های سنجش

تایید سه نوع کیت سنجش بر روی خطوط سلولی انجام شد که به طور پایداری لوسیفراز کرم شب تاب را بیان می کردند، و نتایج نشان داد که محصول Bright-One Step دارای مقادیر سیگنال بالاتری است. محصول Steady-One Step دارای نیمه عمر سیگنال طولانی تر و سیگنال های پایدارتر است. محصول Bio-One Step نه تنها دارای مقادیر سیگنال بالایی است بلکه نیمه عمر سیگنال طولانی تری را نیز حفظ می کند.

شکل 1. مقایسه عملکرد برای کیت های مختلف سنجش ژن گزارشگر Yeasen

02 مقایسه واکنشگر تشخیص ژن Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter با محصولات رقیب

هنگام استفاده از Yeasen Bio-One Step، رقیب P و رقیب V بر روی یک رده سلولی که به طور پایدار لوسیفراز کرم شب تاب را بیش از حد بیان می کند، نتایج نشان می دهد که مقدار سیگنال و نیمه عمر سیگنال Yeasen Bio-One Step اساساً با رقیب P سازگار است و نیمه عمر سیگنال برتر از رقیب V است.

شکل 2. مقایسه معرف تشخیص ژن گزارشگر Yeasen Bio-One Step Luciferase با رقبا

03 تست پایداری یخ-ذوب معرف تشخیص ژن یاسن بیو-وان مرحله لوسیفراز ریپورتر

Reagent تشخیص ژن Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter آزمایش‌های مکرر انجماد و ذوب را انجام داده است و نتایج نشان می‌دهد که حتی پس از 5 چرخه انجماد و ذوب، عملکرد محصول بدون تغییر قابل‌توجه ثابت می‌ماند.

شکل 3.آزمایش مکرر انجماد- ذوب معرف تشخیص ژن Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter

رویه عملیاتی

01 انتقال سلولی

معرف را مستقیماً به سوسپانسیون سلولی اضافه کنید، سپس 5 بار به بالا و پایین پیپت کنید تا از مخلوط شدن کامل اطمینان حاصل کنید، 5 دقیقه صبر کنید تا لیز سلولی کامل شود.

02 بارگیری نمونه

100 میکرولیتر از مخلوط (معرف تشخیص + محیط کشت سلول) را در هر چاهک صفحه تشخیص پیپت کنید.

03 تشخیص فلورسانس

پارامترها را روی صفحه خوان تنظیم کنید. صفحه تشخیص را در صفحه خوان قرار دهید، آن را برای چند ثانیه لرزش دهید و سپس به تشخیص ادامه دهید.

لیست محصولات

دسته بندی محصولات	نام محصول	کد محصول	مشخصات محصول
کیت سنجش ژن لوسیفراز ریپورتر	کیت سنجش لوسیفراز Bio-One Step	11411ES60/80/81	100T/10×100T/1000T
	کیت سنجش لوسیفراز یک مرحله ای ثابت	11413ES60/80/81	100T/10×100T/1000T
	کیت سنجش لوسیفراز یک مرحله ای روشن	11412ES60/80/81	100T/10×100T/1000T
کیت سنجش ژن گزارشگر دوگانه لوسیفراز	کیت سنجش ژن گزارشگر دوگانه لوسیفراز	11402ES60/80	100T/1000T
	کیت سنجش ژن Dual Glo Luciferase Reporter	11405ES60/80	100T/1000T