مقدمه ای بر ماکروفاژها

کشف ماکروفاژها به سال 1882 برمی گردد، زمانی که زیست شناس الی متچنیکوف در حین مطالعه بر روی حیوانات ابتدایی که فاقد مکانیسم های ایمنی سازگار بودند، آنها را کشف کرد و از این سلول ها به عنوان فاگوسیت یاد کرد. ماکروفاژها گروه ناهمگنی از سلول های ایمنی با درجه انعطاف پذیری بالا و عملکردهای متنوعی از جمله توسعه بافت و هموستاز در داخل بدن، حذف باقی مانده های سلولی، حذف پاتوژن ها و تعدیل پاسخ های التهابی هستند. سیگنال های القایی مختلف می توانند ماکروفاژها را فعال کنند تا مورفولوژی و ویژگی های فیزیولوژیکی خود را تغییر دهند.

شکل 1 منشا ماکروفاژ

با قرض گرفتن مفهوم سلول‌های T کمکی (Th)، حالت فعال‌سازی ماکروفاژ معمولاً از نظر روش فعال‌سازی به دو دسته ساده‌سازی می‌شود: ماکروفاژهای فعال کلاسیک، CAMs، و ماکروفاژهای فعال جایگزین، AAMs. ماکروفاژهای M1 سیتوکین های پیش التهابی تولید می کنند که در برابر تهاجم پاتوژن مقاومت می کنند اما باعث آسیب ارگانیسمی نیز می شوند. ماکروفاژهای M2 سیتوکین های ضد التهابی ترشح می کنند و در ترمیم و بازسازی بافت و تشکیل تومور نقش دارند.

شکل 2 فنوتیپ های مختلف، نشانگرهای سطح سلولی و عملکرد ماکروفاژها

شایان ذکر است که دو فنوتیپ ماکروفاژ کاملاً متضاد نیستند، یعنی فنوتیپ‌های M1 و M2 متقابلاً منحصر به فرد نیستند، اما اغلب همزیستی می‌کنند، و بنابراین نمی‌توان آنها را به‌سادگی به عنوان جمعیت‌های ماکروفاژی کاملاً متمایز در نظر گرفت. نشانگرهای پلاریزاسیون ماکروفاژها معمولاً در سطوح مختلف بر روی ماکروفاژهای فنوتیپ‌های مختلف بیان می‌شوند و ماکروفاژهای فنوتیپ‌های مختلف می‌توانند تحت شرایط خاصی تحت تبدیل متقابل قرار گیرند. در ترمیم زخم در داخل بدن، ماکروفاژها پروفایل ترشح M1 پیش التهابی را در فاز اولیه نشان می‌دهند، با ظرفیت بالایی برای ارائه آنتی‌ژن و تولید اینترلوکین‌های IL-12 و IL-23، که از تکثیر سلولی جلوگیری می‌کنند و باعث آسیب بافتی می‌شوند، در حالی که در مرحله بهبودی دیرهنگام، ماکروفاژها به سمت یک پروفایل ضد التهابی و التهابی M2 تغییر می‌کنند که باعث ایجاد التهاب و التهاب M2 می‌شود. واسطه ها مانند TGF-β، VEGF و EGF و غیره. فروکش و بهبود زخم

شکل 3 مکانیسم فنوتیپ های اصلی فعال سازی ماکروفاژها در ترمیم، بازسازی و فیبروز بافت

مطالعه in vivo

ماکروفاژها تنها سلول‌هایی هستند که در هر اندام بدن وجود دارند و در اپیدرم، قرنیه و داخل مفاصل بدون رگ‌های خونی یافت می‌شوند و یکی از مهم‌ترین روش‌های مطالعه زیست‌شناسی in vivo آن‌ها تخلیه ماکروفاژ است. تخلیه ماکروفاژ در داخل بدن روشی برای حذف ماکروفاژها با استفاده از تکنیک های فیزیکوشیمیایی یا ژنتیکی است. این روش اکنون به طور گسترده برای مطالعه نقش ماکروفاژها در مدل های بیماری حیوانی و مطالعه مکانیسم های آسیب شناسی ایمنی یا آسیب التهابی، مانند بیماری های التهابی استفاده می شود: آسم آلرژیک، دیابت، چاقی، آترواسکلروز، مطالعات مربوط به بیماری های خود ایمنی؛ و سایر زمینه های بیماری: تومورها، بیماری های مرتبط با ویروس، بازسازی بافت و سایر مطالعات مرتبط. روش لیپوزوم کلودرونات در حال حاضر رایج ترین روش برای تخلیه ماکروفاژها است.

لیپوزوم کلودرونات

از آنجایی که پروفسور نیکو ون رویجن با استفاده از مکانیسم اندوسیتوز ماکروفاژها با استفاده از مکانیسم اندوسیتوز ماکروفاژها با موفقیت یک عامل حذف سلولی کلودرونات لیپوزوم را در شرایط in vivo ایجاد کرد تا کلودرونات را وارد سلول کند، جایی که اسید کلروفسفریک آزاد می شود، که می تواند با رسیدن به غلظت خاصی باعث آپوپتوز ماکروفاژها شود، بنابراین به هدف حذف ماکروفاژ می رسد.این معرف به عنوان بالغ ترین و راحت ترین ابزار حذف ماکروفاژ در جهان به طور گسترده مورد استفاده قرار گرفته است.

شکل 4 نمودار شماتیک اصل پاکسازی ماکروفاژها

رویکردهای سازمان های مختلف (فقط جهت اطلاع)

اندام / ماکروفاژ	مقدار مصرف (20-25 گرم/موش)
ماکروفاژهای پالپ طحال / قرمز	تک دوز: 200 میکرولیتر در موش (IV یا IP). تخلیه طولانی مدت: دوز اول 200 میکرولیتر در موش، سپس 200 میکرولیتر در موش در فواصل 2 تا 3 روزه
سلول های کبد / کوفر	تک دوز: 200 میکرولیتر در موش (IV یا IP). تخلیه طولانی مدت: دوز اول 200 میکرولیتر در موش، سپس 200 میکرولیتر بر موش در فواصل 2 تا 3 روزه
ماکروفاژهای ریه/آلوئولار	IV (200-150 میکرولیتر) همراه با داخل تراشه یا داخل بینی (50 میکرولیتر) بهترین نتایج را به همراه دارد.
گره لنفاوی	تزریق (100-200 میکرولیتر) در موش، رژیم های دوز خاص را می توان در ادبیات یافت.
مغز / میکروگلیا	ورود داخل بطن مغزی به مایع مغزی نخاعی، 10 میکرولیتر در موش، 50 میکرولیتر در موش.
خون/مونوسیت ها	150-200 میکرولیتر در موش (IV)، حداکثر سرعت تخلیه در عرض 24 ساعت به دست می آید، اما حداکثر سرعت تخلیه در 1-7 روز بستگی به سویه دارد.

توصیه محصول

نام محصول	شماره مورد	مشخصات
لیپوزوم های کلودرونات (از دانشگاه Vrije آمستردام)	40337ES08	5 میلی لیتر
	40337ES10	10 میلی لیتر
لیپوزوم های کنترل (PBS)	40338ES08	5 میلی لیتر
	40338ES10	10 میلی لیتر