ماکروفاژها یک سلول مهم در سیستم ایمنی هستند و نقش های مختلفی در بافت ها از جمله پاکسازی پاتوژن، ترمیم بافت و تعدیل ایمنی ایفا می کنند. فعال شدن یا اختلال عملکرد غیرطبیعی ماکروفاژها در شرایط پاتولوژیک خاص، مانند التهاب مزمن، بیماری‌های خودایمنی، یا رشد تومور، ممکن است بر ارگانیسم تأثیر منفی بگذارد. لیپوزوم‌های کلودرونات بالغ‌ترین، راحت‌ترین و مقرون‌به‌صرفه‌ترین ابزار حذف ماکروفاژ در حال حاضر هستند و می‌توانند به طور موثر ماکروفاژها را از بافت‌ها و مکان‌های مختلف حیوانات از جمله کبد، طحال، ریه‌ها و خون حذف کنند و امروزه پرکاربردترین روش حذف ماکروفاژ هستند.

رویکردهای سازمان های مختلف (فقط جهت اطلاع)

اندام / ماکروفاژ	مقدار مصرف (20-25 گرم/موش)
ماکروفاژهای پالپ طحال / قرمز	تک دوز: 200 میکرولیتر در موش (IV یا IP). تخلیه طولانی مدت: دوز اول 200 میکرولیتر در موش، سپس 200 میکرولیتر بر موش در فواصل 2 تا 3 روزه
سلول های کبد / کوفر	تک دوز: 200 میکرولیتر در موش (IV یا IP). تخلیه طولانی مدت: دوز اول 200 میکرولیتر در موش، سپس 200 میکرولیتر بر موش در فواصل 2 تا 3 روزه
ماکروفاژهای ریه/آلوئولار	IV (200-150 میکرولیتر) همراه با داخل تراشه یا داخل بینی (50 میکرولیتر) بهترین نتایج را به همراه دارد.
گره لنفاوی	تزریق (100-200 میکرولیتر) در موش، رژیم های دوز خاص را می توان در ادبیات یافت.
مغز / میکروگلیا	ورود داخل بطن مغزی به مایع مغزی نخاعی، 10 میکرولیتر در موش، 50 میکرولیتر در موش.
خون/مونوسیت ها	150-200 میکرولیتر در موش (IV)، حداکثر سرعت تخلیه در عرض 24 ساعت به دست می آید، اما حداکثر سرعت تخلیه در 1-7 روز بستگی به سویه دارد.

سوالات متداول

Q1: پس از دریافت لیپوزوم کلودرونات چه باید کرد؟

پاسخ: پس از دریافت لیپوزوم کلودرونات، در صورت عدم امکان استفاده فوری، باید آن را در یخچال 4 درجه سانتیگراد قرار دهید. یخ زدن ممنوع! به عنوان محلول استوک استفاده کنید، رقیق سازی مجاز نیست. لیپوزوم ها مستعد بارش هستند، بنابراین توصیه می شود قبل از استفاده آنها را به آرامی مخلوط کنید. علاوه بر این، لیپوزوم های کلروفسفات 4 درجه سانتیگراد را نمی توان بلافاصله استفاده کرد و باید قبل از تزریق به دمای اتاق بازگردانده شوند.

Q2: چگونه لیپوزوم ها را از ویال منتقل کنم؟

پاسخ: بهترین راه برای انتقال لیپوزوم ها از ویال استفاده از سرنگ سوزنی استریل است. به این ترتیب سوسپانسیون لیپوزوم باقی مانده در ویال مهر و موم شده و تمیز می ماند. همچنین می توانید از یک پیپت با نوک استریل برای انتقال استفاده کنید، اما بهتر است این کار را در محیطی تمیز مانند هود BSC انجام دهید.

Q3: آیا می توان از لیپوزوم های کلودرونات برای پاکسازی ماکروفاژ در شرایط آزمایشگاهی استفاده کرد؟

پاسخ: این محصول را می توان برای پاکسازی ماکروفاژ در شرایط آزمایشگاهی استفاده کرد، اما این روش برای آزمایش های in vivo مناسب تر است. دلیل اصلی این است که در طی کشت آزمایشگاهی، کلروفسفات آزاد شده از سلول های مرده یا "نشت" از لیپوزوم ها در محیط کشت باقی می ماند، اما در داخل بدن، کلروفسفات نیمه عمر بسیار کوتاهی دارد و به سرعت توسط کلیه ها پاک می شود. اگرچه اسید کلروفسفریک آزاد وارد سلول ها یا لیپوزوم ها نمی شود، پس از تجمع در محیط کشت به آرامی وارد سلول ها می شود.

Q4: دلیل مرگ حیوانات بلافاصله پس از تزریق داخل وریدی لیپوزوم کلودرونات چیست؟

پاسخ: از یک طرف این امکان وجود دارد که به حیوان یک سوسپانسیون لیپوزوم ناهمگن تزریق شده باشد. توصیه می شود قبل از استفاده به آرامی تکان دهید تا مخلوط شود. لیپوزوم ها پس از مدتی در شرایط آزمایشگاهی ته نشین می شوند. اگر مجبور به تزریق بیش از یک حیوان در یک زمان در مدت زمان طولانی باشد، لیپوزوم ها در سرنگ ته نشین می شوند و یک سوسپانسیون ناهمگن تشکیل می دهند، به طوری که اندازه گیری اولین تزریق به طور قابل توجهی نسبت به اندازه گیری آخرین تزریق تغییر می کند. از طرف دیگر ممکن است لیپوزوم ها به تازگی از یخچال خارج شده و به دمای اتاق برنگشته باشند.

Q5: حیوان چند روز پس از تزریق لیپوزوم کلودرونات مرد؟

پاسخ: ممکن است به دلیل آلودگی باکتریایی باشد. حذف ماکروفاژها از بدن شانس عفونت را به عنوان مثال ذرات ویروسی، باکتری ها یا مخمرها افزایش می دهد.

Q6: لیپوزوم های کلودرونات اثر مطلوب را ندارند؟

پاسخ: لیپوزوم های کلودرونات در دسته های بزرگ تولید می شوند و هر دسته از نظر غلظت کلودرونات و همچنین تعدادی از آلاینده های احتمالی آزمایش می شود تا از صحت آن قبل از فروش به مشتریان اطمینان حاصل شود. علاوه بر این، لیپوزوم ها در برابر درجه حرارت بسیار حساس هستند. روش صحیح حمل و نگهداری آنها در دمای 4 تا 8 درجه سانتیگراد است. سوسپانسیون ها را نه باید منجمد کرد و نه بالای 30 درجه سانتی گراد حرارت داد. باید ظرف مدت 3 ماه از زمان دریافت محموله مصرف شود، در غیر این صورت ممکن است اثر استفاده تحت تأثیر قرار گیرد.

Q7: آیا هنگام تزریق داخل وریدی، آیا می توان حجم تزریق را افزایش داد؟

ج: تزریق داخل وریدی باید بر اساس وزن بدن حیوان باشد و نباید از 0.1 میلی لیتر در 10 میلی گرم بیشتر شود، اما برای تزریق داخل صفاقی می توان حجم تزریق را به طور مناسب افزایش داد. تزریق زیر جلدی باید با توجه به حجم محل تزریق تصمیم گیری شود.

Q8: هنگام استفاده از لیپوزوم ها باید به چه نکاتی توجه کنیم؟

پاسخ: لیپوزوم های تهیه شده از لیپیدهای دارای زنجیره هیدروکربنی اشباع در واقع بسیار قوی هستند، اما اقدامات احتیاطی زیر باید مورد توجه قرار گیرد.

①با حلال های آلی مانند کلروفرم، متانول، اتانول، DMSO، اتر و غیره مخلوط نکنید.

② سورفکتانت ها را اضافه نکنید، مگر اینکه مجبور باشید برای جدا کردن لیپوزوم ها این کار را انجام دهید.

③ نزدیک یا بالاتر از دمای انتقال فاز اصلی لیپیدها حرارت ندهید، مگر اینکه بارگذاری دارو را انجام دهید، که نیاز به جوجه کشی بالاتر از دمای انتقال فاز دارد.

توصیه محصول

نام محصول	شماره مورد	مشخصات
لیپوزوم های کلودرونات (از دانشگاه Vrije آمستردام)	40337ES08	5 میلی لیتر
	40337ES10	10 میلی لیتر
لیپوزوم های کنترل (PBS)	40338ES08	5 میلی لیتر
	40338ES10	10 میلی لیتر