پورومایسین یک آنتی بیوتیک آمینوگلیکوزید است که توسط Streptomyces alboniger تولید می شود. این یک آنالوگ از انتهای 3' مولکول aminoacyl-tRNA است و می تواند به محل A ریبوزوم متصل شود، در زنجیره پپتیدی در حال ادغام قرار گیرد، جابجایی پپتید روی ریبوزوم را مختل کند، باعث خاتمه زودهنگام زنجیره در طول ترجمه و در نتیجه مهار سنتز پروتئین شود.
شکل 1 فرمول ساختاری پورومایسین (CAS NO. 53-79-2)
ژن pac، کدکننده پورومایسین N-acetyltransferase (pac)، در باکتری تولیدکننده پورومایسین Streptomyces alboniger یافت شد که به پورومایسین مقاومت می‌دهد. این ویژگی اکنون به طور گسترده برای غربال رده های سلولی ترانسفکت شده پایدار پستانداران که حامل پلاسمیدهایی با ژن pac هستند استفاده می شود. استفاده گسترده از پورومایسین در غربالگری رده‌های سلولی پایدار به ویژگی‌های ناقل‌های لنتی ویروسی مربوط می‌شود که اغلب آنها حامل ژن pac در ناقل‌های تجاری لنتی ویروسی هستند. در موارد خاص خاص، پورومایسین همچنین می تواند برای غربالگری سویه های E. coli تبدیل شده با پلاسمیدهای حامل ژن pac استفاده شود. پورومایسین به سرعت عمل می کند و می تواند به سرعت باعث مرگ سلولی در غلظت های پایین شود. سلول های پستانداران چسبنده به غلظت 2-5 میکروگرم در میلی لیتر حساس هستند پورومایسین، در حالی که سلول های سوسپانسیون در حال حاضر به غلظت های کمتر از 0.5-2 میکروگرم در میلی لیتر پورومایسین حساس هستند. سلول های پستانداران با مقاومت پایدار به پورومایسین می توانند در عرض یک هفته تولید شوند.
غربالگری خط سلولی پایدار
اصل تجربی
با شبیه‌سازی DNA/shRNA اگزوژن در یک ناقل حامل ژن pac، ناقل نوترکیب به سلول‌های میزبان ترانسفکت می‌شود و در کروموزوم‌های آنها ادغام می‌شود، به طور پایدار با تقسیم سلولی منتقل می‌شود و در نهایت با پورومایسین غربالگری می‌شود.
آماده سازی و پیش آزمایش
1 غلظت استفاده توصیه شده
سلول های پستانداران: 1-10 میکروگرم در میلی لیتر، غلظت بهینه باید با آزمایش قبلی تعیین شود.
E.coli: برای غربالگری E. coli تبدیل شده پایدار حامل ژن pac در محیط LB agar، از غلظت 125 میکروگرم بر میلی لیتر استفاده کنید. تنظیم دقیق pH برای غربالگری پورومایسین ترانسفورماتورهای پایدار E. coli مورد نیاز است.
2 روش انحلال
پورومایسین را در آب مقطر حل کنید تا محلول ذخیره 50 میلی گرم بر میلی لیتر تهیه شود، با فیلتر 0.22 میکرومتر استریل کنید، مقدار کمی از آن را استریل کنید و در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری کنید.
3 تعیین منحنی کشتن پورومایسین (با استفاده از ترانسفکشن shRNA یا انتقال لنتی ویروسی به عنوان مثال)
غلظت غربالگری موثر پورومایسین با نوع سلول، وضعیت رشد، تراکم سلولی، متابولیسم سلولی و موقعیت چرخه سلولی مرتبط است. تعیین حداقل غلظت پورومایسین که سلول های ترانسفکت نشده را می کشد بسیار مهم است. انجام یک پیش آزمایش غربالگری گرادیان پورومایسین برای اولین آزمایش برای ایجاد منحنی کشتار ضروری است.
- سلول های صفحه ای با تراکم 5~8×104سلول/چاه در یک صفحه 24 چاهی و یک شبه کشت داده شود.
- محیط غربالگری را آماده کنید: محیط تازه حاوی غلظت های مختلف پورومایسین (مثلاً 0-15 میکروگرم در میلی لیتر، حداقل 5 گرادیان).
- با محیط غربالگری تازه آماده شده جایگزین کنید، به کشت ادامه دهید و رشد سلولی را مشاهده کنید و هر 2 تا 3 روز یکبار محیط غربالگری تازه را عوض کنید.
- بقای سلولی را روزانه مشاهده کنید. غلظت دارویی که به طور موثر تمام سلول های غیر ترانسفکت شده را در عرض 4-6 روز از بین می برد، حداقل غلظت است.
غربالگری ترانسفکتانت های پایدار
- پس از عفونت لنتی ویروسی به مدت 48-72 ساعت (70-80% تلاقی)، سلول ها را در محیطی حاوی غلظت مناسب پورومایسین حداقل به مدت 48 ساعت کشت دهید. هنگامی که تمام سلول های گروه کنترل غیر ترانسفکت شده با پورومایسین می میرند، سلول های باقی مانده در گروه آلوده به ویروس همه سلول های مثبت هستند.
【نکته】: ① اثر آنتی بیوتیک ها زمانی آشکار می شود که سلول ها در مرحله تقسیم فعال هستند. اگر سلول ها بیش از حد متراکم باشند، کارایی آنتی بیوتیک ها به میزان قابل توجهی کاهش می یابد. تراکم سلولی نباید از 25 درصد تجاوز کند. ② وضعیت رشد سلول را روزانه مشاهده کنید. غربالگری پورومایسین حداقل به 48 ساعت نیاز دارد و غلظت موثر غربالگری پورومایسین معمولا بین 3 تا 10 روز طول می کشد. هرچه MOI ویروس بالاتر باشد، هر سلول دارای کپی های بیشتری از ژن مقاومت به پورومایسین و shRNA است. هنگام انجام غربالگری پورومایسین، هرچه MOI بالاتر باشد، سلول‌ها دارای نسخه‌های pac بیشتری هستند و غلظت پورومایسین بالاتری را می‌توانند تحمل کنند. غلظت پورومایسین را برای غربالگری سلول های ترانسفکت شده تنظیم کنید، اما غلظت پورومایسین نباید کمتر از حداقل غلظت موثر منحنی کشتار باشد.
- محیط کشت حاوی حداقل غلظت پورومایسین را برای گسترش سلول ها اضافه کنید و پس از اینکه نتایج آزمایش qPCR واجد شرایط شد، به انجماد ادامه دهید.
| محصولس نام | گربه# | مشخصات | ظاهر |
| پورومایسین دی هیدروکلراید CAS:58-58-2 | 60210ES25 | 25 میلی گرم | سفید تا پودری مانند سفید |
| 60210ES60 | 100 میلی گرم | ||
| 60210ES72 | 250 میلی گرم | ||
| 60210ES76 | 500 میلی گرم | ||
| 60210ES80 | 1 g | ||
| پورومایسین (محلول 10 میلی گرم بر میلی لیتر) CAS:58-58-2 | 60209ES10 | 1×1 میلی لیتر | محلول (10 میلی گرم در میلی لیتر در H2O） |
| 60209ES50 | 5×1 میلی لیتر | ||
| 60209ES60 | 10×1 میلی لیتر | ||
| 60209ES76 | 50×1 میلی لیتر |
توصیه محصول
انتشارات توسط مشتریانی که از این محصول استفاده می کنند (آمار جزئی: برخی)
[1] Zhang D، Liu Y، Zhu Y، و همکاران. یک مسیر غیر متعارف cGAS -STING-PERK برنامه ترجمه ای حیاتی برای پیری و فیبروز اندام را تسهیل می کند. Nat Cell Biol . 2022؛ 24 (5): 766- 782. doi:10.1038/s41556-022-00894-z (IF: 28.824)
[2] Lu T، Zhang Z، Zhang J، و همکاران. CD73 در وزیکول های خارج سلولی کوچک مشتق شده از HNSCC، سرکوب ایمنی مرتبط با تومور را با واسطه ماکروفاژها در ریزمحیط تعریف می کند. J Extracell Vesicles . 2022؛ 11 (5): e12218. doi:10.1002/jev2.12218 (IF: 25.841)
[3] منگ اف، یو زی، ژانگ دی، و همکاران.جداسازی فاز القایی NF2 جهش یافته، دستگاه cGAS-STING را محبوس می‌کند تا ایمنی ضد تومور را لغو کند. سلول مول . 2021؛ 81 (20): 4147-4164.e7.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.040 (IF: 17.970)
[4] چن اس، لیو اس، وانگ جی، و همکاران. هدف گذاری DRP1 با واسطه TBK1، حس نوکلئیک اسید را برای برنامه ریزی مجدد دینامیک و فیزیولوژی میتوکندری می دهد. سلول مول . 2020;80(5):810-827.e7.doi:10.1016 /j.molcel.2020.10.018 (IF: 15.584)
[5] ژائو کیو، ژنگ کی، ما سی، و همکاران. PTPS تقسیم‌بندی LTBP1 S-Nitrosylation را تسهیل می‌کند و باعث رشد تومور در شرایط هیپوکسی می‌شود. سلول مول . 2020؛ 77 (1): 95-107.e5. doi:10.1016/j.molcel.2019.09.018 (IF: 14.548)
[6] Mo J، Liu F، Sun X، و همکاران. مهار مجتمع FACT سیگنال دهی نابجای جوجه تیغی را هدف قرار می دهد و بر مقاومت در برابر آنتاگونیست های صاف غلبه می کند. سرطان Res . 2021؛ 81 (11): 3105-3120. doi:10.1158/0008-5472.CAN-20-3186 (IF: 12.701)
[7] Zou Y، Wang A، Shi M، و همکاران. تجزیه و تحلیل مناظر ردوکس و پویایی در سلول های زنده و in vivo با استفاده از سنسورهای فلورسنت کدگذاری شده ژنتیکی پروتوک Nat . 2018؛ 13 (10): 2362-2386. doi:10.1038/s41596-018-0042-5 (IF: 12.423)
[8] مائو ال، چن جی، لو ایکس، و همکاران. تجزیه و تحلیل پروتئومی سلول های سرطانی ریه نقش مهم BCAT1 را در متاستاز سلول های سرطانی نشان می دهد. ترانوستیک ها 2021؛ 11 (19): 9705-9720. منتشر شده در 27 سپتامبر 2021. doi:10.7150/thno.61731 (IF: 11.556)
[9] Han L، Zhang F، Liu Y، و همکاران. پروتئین 1 مرتبط با گلوبولین رحم (UGRP1) به پودوپلانین (PDPN) متصل می شود تا مسیر التهابی جدیدی را در طول عفونت استرپتوکوک پنومونیه ایجاد کند. Clin Transl Med. 2022؛ 12 (6): e850. doi:10.1002/ctm2.850 (IF: 11.492 )
[10] ژانگ ام، لیو اف، ژو پی، و همکاران. مسیر سیگنالینگ MTOR با مهار اتوفاژی، تمایز ماکروفاژها از پیش سازهای میلوئید موش را تنظیم می کند. اتوفاژی . 2019؛ 15 (7): 1150-1162. doi: 10.1080/15548627.2019. 1578040 (IF: 11.059)
[11] ژانگ اس، یانگ زی، بائو دبلیو، و همکاران. SNX10 (مرتب‌سازی نکسین 10) با کنترل تخریب اتوفاژیک SRC از شروع و پیشرفت سرطان کولورکتال جلوگیری می‌کند. اتوفاژی . 2020؛ 16 (4): 735 -749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122 (IF: 11.059)
[12] Zhang Y، Ding H، Wang X، و همکاران. MK2 تخریب Tfcp2l1 را از طریق لیگاز β-TrCP یوبیکوئیتین برای تنظیم خود نوسازی سلول های بنیادی جنینی موش ترویج می کند. نماینده سلول . 2021؛ 37 (5): 109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (IF: 9.423)
[13] Jiang Y، Dong Y، Luo Y، و همکاران. فسفوریلاسیون با واسطه AMPK در 53BP1 باعث افزایش c-NHEJ می شود. نماینده سلول . 2021؛ 34 (7): 108713. doi:10.1016/j.celrep.2021.108713 (IF: 9.423)
[14] Sun Q، Ye Y، Gui A، و همکاران. MORTALIN-Ca 2+ محور مقاومت ذاتی ریتوکسیماب را در لنفوم بزرگ سلول B منتشر می کند. سرطان لت . 2022; 537:215678. doi:10.1016/j.canlet.2022.215678 (IF: 8.679)
[15] جین آر، ژائو آ، هان اس، و همکاران. تعامل S100A16 و GRP78 با واسطه استرس شبکه آندوپلاسمی از طریق مسیر IRE1α/XBP1 در فیبروز توبولو بینابینی کلیوی فعال می‌شود. سلول مرگ دیس . 2021؛ 12 (10): 942. منتشر شده در 13 اکتبر 2021. doi: 10.1038/s41419-021-04249-8 (IF: 8.469)
[16] Zhang P، Zhang Z، Fu Y، و همکاران.Ubiquitination مرتبط با K63 DYRK1A توسط TRAF2 Sprouty 2 تخریب EGFR را کاهش می دهد. سلول مرگ دیس . 2021؛ 12 (6): 608. منتشر شده در 11 ژوئن 2021. doi:10.1038/s41419-021-03887-2 (IF: 8.469)
[17] Zhao T، Li Y، Shen K، Wang Q، Zhang J. حذف OLR1 متابولیسم گلیکولیتیک را برای سرکوب تکثیر سلول های سرطانی روده بزرگ و مقاومت شیمیایی با کاهش SULT2B1 از طریق c-MYC تضعیف می کند. سلول مرگ دیس. 2021؛ 13 (1): 4. منتشر شده در 17 دسامبر 2021. doi: 10.1038/s41419-021-04174-w (IF: 8.469)
[18] ژو آر، وو کیو، وانگ ام، و همکاران. پروتئین فسفاتاز PPM1A، YAP را دفسفریله و فعال می کند تا بر بازسازی روده و کبد پستانداران نظارت کند. PLoS Biol . 2021; 19 (2): e3001122. منتشر شده در 25 فوریه 2021. doi:10.1371/journal.pbio.3001122 (IF: 8.029)
[19] Wu S، Wang S، Lin X، Yang S، Ba X، Xiong D، Xiao L، Li R. Lanatoside C با تنظیم توزیع NRF2 در سلول ها، تکثیر ویروس هرپس سیمپلکس 1 را مهار می کند. فیتومدیسین. 2024 فوریه؛ 124:155308. doi: 10.1016/j.phymed.2023.155308. (اگر:7.9)
[20] Shen K، Song W، Wang H، Wang L، Yang Y، Hu Q، Ren M، Gao Z، Wang Q، Zheng S، Zhu M، Yang Y، Zhang Y، Wei C، Gu J. رمزگشایی پتانسیل متاستاتیک و درمان کمکی بهینه پس از عمل ملانوما بر اساس امتیاز متاستاز. کشف مرگ سلولی. 2023 اکتبر 25; 9 (1): 397. doi: 10.1038/s41420-023-01678-6. (اگر:7.0)
محصولات مرتبط
| نام محصول | گربه# | مشخصات |
| سیپروفلوکساسین هیدروکلراید | 60201ES05/25/60 | 5/25/100 گرم |
| آمپی سیلین، نمک سدیم | 60203ES10/60 | 10/100 گرم |
| داکسی سایکلین هیکلات | 60204ES03/08/25 | 1/5/25 گرم |
| کلرامفنیکل، درجه USP | 60205ES08/25/60 | 5/25/100 گرم |
| کانامایسین سولفات | 60206ES10/60 | 10/100 گرم |
| تتراسایکلین HCl تتراسایکلین هیدروکلراید (USP) | 60212ES25/60 | 25/100 گرم |
| وانکومایسین هیدروکلراید | 60213ES60/80/90 | 100 میلی گرم / 1 گرم / 5 گرم |
| نمک سولفات جنتامایسین | 60214ES03/08/25 | 1/5/25 گرم |
| اسپکتینومایسین هیدروکلراید | 60215ES08 | 5 گرم |
| فلئومایسین (20 میلی گرم در میلی لیتر در محلول) | 60217ES20/60 | 20/5×20 میلی گرم |
| بلاستیسیدین S (بلاستیسیدین) | 60218ES10/60 | 10/10×10 میلی گرم |
| نیستاتین | 60219ES08 | 5 گرم |
| سولفات G418 (ژنتیکین) | 60220ES03/08 | 1/5 گرم |
| پورومایسین (محلول 10 میلی گرم در میلی لیتر) | 60209ES10/50/60/76 | 1 × 1 / 5 × 1 / 1 0 × 1 / 50 × 1 میلی لیتر |
| پورومایسین دی هیدروکلراید | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 میلی گرم / 1 گرم |
| هیگرومایسین B (50 میلی گرم در میلی لیتر) | 60224ES03 | 1 گرم (20 میلی لیتر)/10×1 گرم (20 میلی لیتر) |
| هیگرومایسین B | 60225ES03/10 | 1/10 گرم |
| اریترومایسین | 60228ES08/25 | 5/25 گرم |
| تیمنتین | 60230ES07/32 | 3.2/10×3.2 گرم |
| اورئوباسیدین A (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1 میلی گرم |
| سولفات پلی میکسین B | 60242ES03/10 | 1/10 MU |