فوق العاده تمیز UCF.ME ™ RNase Termostable H: برش دقیق برای آزمایش های کارآمد تر!

ایده آل برای حذف rRNA و پوشش mRNA تشخیص کارایی

RNase H مقاوم در برابر حرارت، با مقاومت استثنایی در برابر حرارت، از RNase H معمولی هم در ویژگی و هم از نظر کارایی بهتر عمل می کند!

مقدمه ای بر RNase H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) آنزیمی است که به طور خاص جزء RNA رشته های هیبریدی RNA-DNA را تجزیه می کند. با بریدن رشته RNA برای حفظ یکپارچگی و پایداری الگوی DNA، نقش حیاتی در فرآیندهایی مانند همانندسازی، ترمیم و رونویسی DNA ایفا می کند. این باعث می‌شود که به طور گسترده در آزمایش‌های زیست‌شناسی مولکولی، از جمله سنتز cDNA، حذف rRNA و مطالعات تداخل RNA استفاده شود. با این حال، E. coli RNase H دارای محدودیت‌هایی است:

  • ممکن است باعث برش غیر اختصاصی RNA یا DNA تک رشته ای شود و دقت نتایج تجربی را کاهش دهد.
  • پایداری حرارتی ضعیف آن از حفظ فعالیت در دماهای بالا جلوگیری می کند و آن را برای آزمایش هایی مانند رونویسی معکوس در دمای بالا یا PCR که به دماهای بالا نیاز دارند، نامناسب می کند.

این کاستی ها محققان را به توسعه RNase H مقاوم در برابر حرارت برای گسترش کاربردهای آن و افزایش کارایی تجربی سوق داده است.

Figure 1: RNase H Mechanism

شکل 1: مکانیسم RNase H

RNase H مقاوم در برابر حرارت از Thermus thermophilus

RNase H مقاوم در برابر حرارت، مشتق شده از Thermus thermophilus، همولوگ E. coli RNase H است و توابع ریبونوکلئاز مشابهی دارد. پیوندهای فسفودی استری رشته RNA را در هیبریدهای RNA:DNA با حفظ یکپارچگی رشته DNA به طور دقیق شناسایی و به طور موثر می شکافد. تجزیه و تحلیل ساختاری عمیق نشان می‌دهد که، اگرچه توزیع پایداری کلی آن شبیه به E. coli RNase H است، T. thermophilus RNase H پیشرفت‌های قابل‌توجهی در پایداری کلی و پایداری باقی مانده محلی نشان می‌دهد.

با دمای فعالیت بهینه بالای 65 درجه سانتیگراد، RNase H با قابلیت گرما، ویژگی و کارایی بیشتری را در دماهای واکنش بالاتر ارائه می‌کند و شکاف غیر اختصاصی را به حداقل می‌رساند. این ویژگی پتانسیل گسترده خود را در آزمایشات زیست شناسی مولکولی باز می کند، از جمله:

  • حذف rRNA
  • تشخیص نرخ پوشش mRNA
  • حذف mRNA poly(A) هیبرید شده به poly(dT)
  • حذف mRNA در طول سنتز رشته دوم cDNA
  • بهبود راندمان تقویت در آزمایش‌های رونویسی معکوس، تقویت همدما و PCR با دمای بالا
Figure 2: Three-Dimensional Structure Comparison of Thermostable RNase H and E. coli RNase H [1]

شکل 2: مقایسه ساختار سه بعدی RNase H و E. coli RNase H مقاوم در برابر حرارت [1]

UCF.MERNase H مقاوم در برابر حرارت (Cat14545)

RNase H مقاوم در برابر حرارت اغلب در آزمایش‌های تشخیص پاتوژن، مانند حذف rRNA در توالی‌یابی متاژنومیک (mNGS) و توالی‌یابی هدفمند پاتوژن (tNGS) استفاده می‌شود. باقیمانده اسیدهای نوکلئیک باکتریایی میزبان یا پس زمینه در آنزیم می تواند به طور قابل توجهی دقت تشخیص را به خطر بیندازد. برای رسیدگی به این موضوع، Yeasen بیوگرافیفن آوری UCF.ME را معرفی می کند™ RNase H (Cat14545) مقاوم در برابر حرارت، با استفاده از UCF.ME اختصاصی آن توسعه یافته است™ تکنولوژی فرآیند فوق العاده تمیز تولید شده در UCF.ME™ این محصول در مرکز آنزیم مولکولی فوق‌العاده تمیز، تحت کنترل کیفی دقیقی قرار می‌گیرد - از انتخاب مواد و مدیریت محیطی گرفته تا بهینه‌سازی فرآیند و آزمایش - با اطمینان از حداقل بقایای پس‌زمینه gDNA باکتریایی و نوکلئاز.این نتایج تجربی دقیق، قابل اعتماد و قابل تکرار را تضمین می کند.

مزایای محصول:

  • فعالیت بالا و قوام دسته به دسته عالی
  • باقیمانده gDNA میزبان بسیار کم: <0.02 کپی/U
  • بدون باقیمانده اگزونوکلئاز، اندونوکلئاز یا RNase
  • پایداری برجسته: بدون از دست دادن قابل توجه فعالیت آنزیم پس از 32 روز در دمای 4 درجه سانتی گراد، 16 روز در دمای 25 درجه سانتی گراد، یا 7 روز در دمای 37 درجه سانتی گراد

نمایش عملکرد UCF.MERNase H مقاوم در برابر حرارت (Cat14545)

1. فعالیت بالا و سازگاری دسته ای

سه دسته UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت با سوبستراهای RNA:DNA انکوبه شد و تغییرات باند از طریق الکتروفورز ژل آگارز آنالیز شد. نتایج نشان می‌دهد که تنها 0.05 واحد از این آنزیم به طور موثر RNA را در بسترهای RNA:DNA 20 pmol می‌شکند، با قوام دسته به دسته عالی، و پایداری و قابلیت اطمینان آن را برجسته می‌کند.

Figure 3: Activity Detection Results of UCF.ME® Thermostable RNase H &nbsp;

شکل 3: نتایج تشخیص فعالیت UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت

توجه: شرایط واکنش: 50 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه. RNA: بستر DNA - 20 pmol

2. کم باقیمانده gDNA میزبان: <0.02 کپی/U

آزمایش باقی مانده gDNA میزبان (E. coli) در چندین دسته نشان می دهد که هر سه دسته UCF.ME™ RNase H دارای سطوح باقیمانده بسیار کمتر از 0.02 کپی/U است که خلوص بالا و قابلیت اطمینان تجربی را تضمین می کند.

Figure 4: Host gDNA Residue Results of UCF.ME® Thermostable RNase H

شکل 4: نتایج باقیمانده gDNA میزبان UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت

3. بدون باقیمانده اگزونوکلئاز، اندونوکلئاز یا RNase

25 UCF.ME ™ RNase H مقاوم در برابر حرارت با سوبستراهای اسید نوکلئیک انکوبه شد و تغییرات نوار با الکتروفورز ژل آگارز ارزیابی شد. هیچ باقیمانده اگزونوکلئاز، اندونوکلئاز یا RNase در هیچ یک از سه دسته شناسایی نشد، که اطمینان قوی برای دقت و قابلیت اطمینان نتیجه ارائه می‌کند.

Figure 5: Detection Results of Exonuclease, Endonuclease, and RNase Residues in UCF.ME® Thermostable RNase H

شکل 5: نتایج تشخیص باقیمانده های اگزونوکلئاز، اندونوکلئاز و RNase در UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت

4. پایداری عالی

UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت تحت آزمایشات پایداری قرار گرفت: 32 روز در دمای 4 درجه سانتی گراد، 16 روز در دمای 25 درجه سانتی گراد و 7 روز در دمای 37 درجه سانتی گراد. اندازه‌گیری‌های فعالیت آنزیم کاهش قابل‌توجهی را نشان نداد، که پایداری استثنایی آن را در یک محدوده دمایی گسترده و مناسب بودن آن برای ذخیره‌سازی طولانی‌مدت و شرایط آزمایشی متنوع را ثابت کرد.

Figure 6: Accelerated Stability Results of UCF.ME® Thermostable RNase H

شکل 6: نتایج پایداری تسریع شده UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت

محصولات مرتبط توصیه شده

منبع

نام محصول

گربه No

T. thermophilus

UCF.ME™ RNase H مقاوم در برابر حرارت

14545ES

E.coli

RNase H

12906ES

مراجع

1. Hollien J, Marqusee S. توزیع ساختاری پایداری در یک آنزیم ترموفیل [J]. مجموعه مقالات آکادمی ملی علوم، 1999، 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ، Dai N، Chan SH. خصوصیات انتخابی mRNA 5'End-Capping با غنی‌سازی هدایت‌شده توسط پروب DNA با اندوریبونوکلئازهای خاص مکان [J]. [03/03/2025].

3. Gu H، Sun YH، Li XZ. روش‌های جدید کاهش rRNA برای توالی‌یابی RNA کل و پروفایل ریبوزوم که برای گونه‌های پرندگان [J] توسعه یافته است. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.

تحقیق