تب خوکی آفریقایی (ASF) یک بیماری عفونی حاد، شدید و بسیار مسری است که توسط ویروس تب خوکی آفریقایی (ASFV) که خوک‌های اهلی یا گرازهای وحشی را آلوده می‌کند، ایجاد می‌شود. عوارض و مرگ و میر آن می تواند به 100٪ برسد و صنعت جهانی خوک را به طور جدی به خطر بیندازد و باعث خسارات اقتصادی غیرقابل محاسبه شود. سازمان جهانی بهداشت حیوانات (OIE) آن را به عنوان یک بیماری قابل گزارش حیوانات فهرست می کند.

در حال حاضر هیچ واکسن یا درمان موثری برای تب خوکی آفریقایی وجود ندارد. تشخیص سریع و دقیق تب آفریقایی خوکی از طریق روش های تشخیصی آزمایشگاهی برای جلوگیری از گسترش این بیماری بسیار مهم است. qPCR به عنوان ابزار اصلی برای تشخیص روتین ASF توسط OIE توصیه می شود.

Yeasen یک تولید کننده با تجربه غنی در تحقیق و توسعه مواد خام IVD است. در مواجهه با تب خوکی آفریقایی، Yeasen به طور مثبت پاسخ می‌دهد و با مشتریان برای توسعه سه راه‌حل فرآیند از استخراج تا تشخیص ویروس تب خوکی آفریقایی همکاری می‌کند. بنابراین سه راه حل چیست؟ و کاربرد این راهکارها چیست؟ در ادامه خواندن...

شکل 1. محلول های تشخیص تب خوکی آفریقایی Yeasen

راه حل اول: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(استعلام)

ویژگی های محصول

👍سیستم ضد آلودگی UDG، به طور موثر از خطر آلودگی آئروسل جلوگیری می کند

👍پایداری طولانی مدت محلول PCR از پیش مخلوط شده (مخلوط اصلی + پرایمرها + پروب) در دمای اتاق، دشواری تشخیص را بسیار ساده می کند.

👍راندمان تقویت بالا و تکرارپذیری خوب

👍مناسب برای چند پلتفرم و چند سیستم

نمایش موردی

👉پایداری طولانی مدت محلول PCR از پیش مخلوط شده
Cat#13171 برای پیکربندی محلول PCR از پیش مخلوط شده استفاده شد که می تواند به مدت 7 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار گیرد و 15 بار انجماد و ذوب مجدد در تقویت سیستم پلاسمید ASF انجام شود. نتایج نشان داد که مقدار Ct و حساسیت محلول PCR پس از قرار دادن 7 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد تفاوت معنی داری نداشته است و مقدار Ct پس از انجماد و ذوب مکرر 15 بار تغییر معنی داری نداشت.

شکل 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(پرس و جو کنید) در محلول PCR پیش مخلوط با پایداری طولانی مدت در تقویت سیستم پلاسمید ASF استفاده می شود. مقدار 2A-Ct در دمای 37 درجه سانتیگراد برای 0 روز و 7 روز 2B-حساسیت در دمای 37 درجه سانتیگراد برای 0 روز و 7 روز 2C-پایداری پس از انجماد-ذوب 15 بار

👉معرف های پایدار و قابل تکرار
چهار دسته مختلف Cat#13171 برای تکرار آزمایش تقویت سیستم پلاسمید ASFV 20 بار انتخاب شدند. تفاوت معنی داری در مقادیر Ct وجود نداشت، با CV کمتر از 1٪.

شکل 3.تست تکرار پذیری Yeasen Cat#13171

👉چند سیستم چند پلت فرم قابل اجرا است
Yeasen Cat#13171 برای تقویت پلاسمیدهای دوگانه تب خوکی آفریقایی ASFV/ACT به ترتیب بر روی پلتفرم های Bio-Rad CFX96، ABI Q5 و Slan استفاده شد. مشاهده می شود که Yeasen Cat#13171 برای انواع مختلف ابزار مناسب است و داده ها قابل اعتماد و پایدار هستند.

شکل 4. سیستم Real-Time PCR Bio-Rad CFX96

شکل 5. سیستم PCR Real-Time ABI Q5

شکل 6. Slan Real-Time PCR System

راه حل دوم:Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

ترکیب اصلی یونیورسال TaqMan qPCR مالتی پلکس Yeasen (Cat#11211) برای تقویت کارآمد الگوهای با غلظت پایین با استفاده از DNA پلیمراز Hot-Start Taq با آنتی بادی اصلاح شده و بافر چند پلکس همسان، عمیقاً بهینه شده است. این محصول از واکنش‌های PCR 4-plex در تک لوله پشتیبانی می‌کند و برای ژنوتیپ و آنالیز مولتی پلکس qPCR ایده‌آل است.

ویژگی های محصول

👍تحمل قوی به ناخالصی های خون، می تواند با واکنش استخراج اسید نوکلئیک Yeasen استفاده شود Cat#13720 Nocleic Acid Release Reagent V2، ایده آل برای qPCR مستقیم
👍حساسیت فوق العاده بالا به 3 کپی/واکنش، دقت تشخیص را تا حد زیادی بهبود می بخشد
👍پایداری طولانی مدت محلول PCR از پیش مخلوط شده (مخلوط اصلی + پرایمر + پروب) در دمای اتاق، که تا حد زیادی دشواری تشخیص را ساده می کند.

نمایش موردی

👉تحمل قوی به ناخالصی های خون
Yeasen Cat#11211 در مقایسه با محصولات مشابه سایر برندها تحمل بالاتری نسبت به مهارکننده ها در نمونه های خون دارد. نتایج نشان داد که Yeasen Cat#11211 تحمل بالایی به EDTA و سیترات سدیم دارد و می تواند 0.5 درصد خون کامل را تحمل کند.

شکل 7. Cat#11211 Universal TaqMan multiplex qPCR master mix و میکس اصلی از مارک های مختلف برای محلول های ASF qPCR به ترتیب با 3 میلی مولار EDTA (3A)، 6 میلی مولار سیترات سدیم (3B)، 0.5 درصد خون (3C) استفاده می شود.

👉حساسیت فوق العاده بالا به 3 کپی/واکنش

تکثیر پلاسمید ASFV با 20 تکرار بر اساس محصولات برندهای مختلف انجام شد. نتایج آزمایشات نشان می دهد که میزان تشخیص محصولات Yeasen بیشتر است.

شکل 8. مقایسه میزان تشخیص در بین محصولات مشابه از برندهای مختلف (3 نسخه در سیستم نهایی)

👉پایداری طولانی مدت، پایدار به مدت 7 روز در دمای اتاق

محلول PCR سیستم پلاسمید دوگانه ASFV/ACT می تواند عملکرد پایدار را پس از 7 روز در 4 درجه سانتیگراد، 25 درجه سانتیگراد و 37 درجه سانتیگراد حفظ کند. مشاهده می شود که مقدار Ct و مقدار فلورسانس تغییر معنی داری نداشتند.

شکل 9. پایداری محلول PCR

راه حل III: تقویت همدما

محصولات Yeasen از فناوری تقویت همدما پشتیبانی می کنند که به انجام سریعتر و کارآمدتر تشخیص ASF کمک می کند. Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) از Thermophilic Geobacillus sp DNA Polymerase I، فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 5'-3' مشتق شده است. این محصول دارای فعالیت DNA پلیمراز 5'-3' قوی تر، فعالیت جابجایی رشته و تحمل dUTP است که برای واکنش های تقویت همدما ضد آلودگی مانند LAMP، CPA و غیره مناسب تر است.

ویژگی های محصول

👍راندمان تقویت بالا

👍تقویت بازده بالا

👍تحمل dUTP، می تواند در ترکیب با Cat#10303 Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG) استفاده شود.پرس و جو کنیدحساس به حرارت، 1 U/μL برای جلوگیری از خطر آلودگی آئروسل

نمایش موردی

👉جایگزین برتر برای محصولات وارداتی با برند N*

فرآیند تکثیر به ترتیب با استفاده از Bst DNA پلیمراز شرکت Yeasen و N* انجام شد. تفاوت معنی داری در مقدار Ct و شدت فلورسانس بین برندهای مختلف وجود نداشت.

شکل 10. منحنی های تقویت برندهای مختلف

سفارش محصولات